不同方法學檢測乙型肝炎血清標志物結果的評價探討

【摘要】 目的 探討不同方法學及試劑檢測乙型肝炎血清標志物的一致性。方法 選取筆者所在醫院經羅氏ECLIA檢測證實的100例乙型肝炎病毒（HBV）感染者以及50例健康體檢者的血清，選用ELISA、TRFIA和ECLIA三種方法對乙型肝炎血清標志物進行檢測。結果 在檢測乙型肝炎血清標志物方面三種方法的結果具有高度以上的一致性，且ECLIA法在檢測中敏感性最高。結論 當前實驗室使用的乙型肝炎血清標志物檢測方法均具有較高的一致性，有利于實驗室之間進行結果互認。

【關鍵詞】 乙型肝炎； 血清標志物； 檢測； 評價

當前我國乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的攜帶率約為10%左右，臨床上用于乙型肝炎病毒血清免疫學標志物（HBV-M）檢測的方法很多，國內傳統檢測手段主要使用酶聯免疫吸附法（ELISA），近年來諸如時間分辨熒光分析法（TRFIA）、微粒子酶免疫分析法（MEIA）以及電化學發光法（ECLIA）等新式檢測手段也逐漸應用于實驗室檢測中。本次試驗選用ELISA、TRFIA和ECLIA三種方法對乙型肝炎血清標志物進行檢測，旨在對不同方法學檢測結果之間的一致性進行評價。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選取筆者所在醫院經羅氏ECLIA檢測證實的100例乙型肝炎病毒（HBV）感染者的血清，患者均符合慢性乙型肝炎診斷標準^［1］，其中男65例，女35例；年齡16～50歲；另選取50例健康體檢者的血清。

1.2 方法

1.2.1 儀器試劑 ELISA檢測選用ALISEI全自動酶標儀（意大利）以及科華生物試劑盒（上海）；TRFIA檢測選用WALLAC DELFIA-1235時間分辨免疫熒光分析儀（芬蘭）和新波生物試劑盒（上海）；ECLIA檢測選用羅氏E601電化學發光免疫分析儀（德國）及其標準配置試劑。

1.2.2 檢測方法 檢測操作均按照儀器操作說明書以及試劑盒說明書進行。本組待檢血清樣本均用3種方法進行檢測，每次檢測時均帶陰、陽性質控（質控來源為上海市臨床檢驗中心以及羅氏公司）。檢測結果的判定以試劑說明書中規定的Cut-off值作為標準，應用夾心法檢測時，結果大于Cut-off值為陽性；應用競爭法檢測時，結果小于Cut-off值為陽性。

1.3 統計學方法 不同檢測方法結果的一致性采用Kappa檢驗，一致性的強弱程度按照Landis以及Koch參照Kappa系數的大小進行判斷，共分為6個區段，Kappa系數小于0時為極差；0～0.2為微弱；0.21～0.4為弱，0.41～0.6為中度；0.61～0.8為高度；0.81～1.0為極強^［2］；抽樣誤差的排除應用μ檢驗。

2 結果

2.1 使用ELISA法與ECLIA法檢測乙型肝炎血清標志物結果比較 見表1。

2.2 使用TRFIA法與ECLIA法檢測乙型肝炎血清標志物結果比較 見表2。

3 討論

當前實驗室對乙型肝炎血清標志物的檢測方法中，ELISA法適用于定性檢測，TRFIA、ECLIA等適用于定量檢測，由于不同實驗室在應用這些方法時的溯源性以及采用的單位各不相同，因此結果相差較大，給患者的就診以及臨床醫生對報告結果的正確解讀造成了不便，基于此，不同方法學檢測結果之間的相關性評價就顯得十分必要。本次研究所選用的3種檢測方法中，ECLIA法是當前特異性和敏感性最好的檢測方法，故將其檢測結果與其他方法進行比較，以評價不同方法學檢測結果之間的一致性。

根據本次研究結果顯示，ELISA法和ECLIA法在HBeAg項目上顯示極強一致性，剩余4項均為高度一致性，顯示ELISA法在臨床應用中檢測率良好^［3］，但HBsAg項目上有8例漏診，提示該法在敏感性方面尚有不足，在血站以及手術等對結果極為敏感的情況下不適合應用此法，但是ELISA法試劑成本較低，因此適用于普通人群篩查或者經濟狀況較差的患者。TRFIA法與ECLIA法檢測結果在HBsAg、HBeAg、抗HBe以及抗HBc這4個項目上具有極強的一致性，在抗HBs項目上具有高度一致性，這一結果亦與國內文獻［4］報道基本一致。

綜上所述，酶聯免疫吸附法（ELISA）、時間分辨熒光分析法（TRFIA）以及電化學發光法（ECLIA）三種方法在乙型肝炎血清標志物檢測方面一致性較高，有利于實驗室之間進行結果互認。

參 考 文 獻

［1］ 中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會.病毒性肝炎防治方案.中華肝臟病雜志，2010，（8）：324-329.

［2］ 夏邦世.時間分辨免疫熒光技術檢測HBV血清標志物臨床應用評價.臨床醫學，2006，33（3）：6-7.

［3］ 周迎春，陳輝，關平，等.3種方法測定低濃度乙型肝炎病毒表面抗原效果評價.檢驗醫學與臨床，2007，4（11）：1070-1071.

［4］ 陳佑明，黃敬，熊符，等.時間分辨熒光免疫分析法和免疫放射分析法檢測HBsAg的對比分析.標記免疫分析與臨床，2006，13（1）：50-51.

（收稿日期：2011-05-23）

（本文編輯：郎威）

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表1 ELISA法與ECLIA法檢測乙型肝炎血清標志物結果比較

注：所有項目P<0.05，兩種檢測方法具有一致性

表2 TRFIA法與ECLIA法檢測乙型肝炎血清標志物結果比較

注：所有項目P<0.05，兩種檢測方法具有一致性