Mta-1在甲狀腺腫瘤中的表達(dá)及其臨床意義

【摘要】 目的 探討Mta-1蛋白在甲狀腺腫瘤組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)Envision法檢測(cè)140例甲狀腺癌組織、50例甲狀腺腺瘤及30例正常甲狀腺組織中Mta-1蛋白的表達(dá)，分析Mta-1蛋白的表達(dá)與甲狀腺癌臨床病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果 甲狀腺癌中Mta-1陽性表達(dá)明顯高于正常甲狀腺組織和甲狀腺腺瘤(P<0.05)。甲狀腺癌組織中，Mta-1的表達(dá)與腫瘤大小、AJCC分期、分化程度、是否有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及浸潤(rùn)深度密切相關(guān)(P<0.01)，而與年齡及性別無關(guān)（P>0.05）。結(jié)論 Mta-1參與了甲狀腺癌的形成過程，并與甲狀腺癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)，為甲狀腺癌的分子靶向治療提供了新的靶點(diǎn)。

【關(guān)鍵詞】 甲狀腺腫瘤； 免疫組織化學(xué)； Mta-1

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甲狀腺腫瘤起病隱匿，在臨床上發(fā)現(xiàn)時(shí)多以無痛性甲狀腺結(jié)節(jié)為主要表現(xiàn)，但其具有多變的生物學(xué)特征，這給臨床術(shù)前判斷甲狀腺腫瘤的良惡性及轉(zhuǎn)移浸潤(rùn)潛力帶來一定的困難。近年來甲狀腺腫瘤領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)課題已逐漸集中于探討甲狀腺腫瘤的生物學(xué)特性與轉(zhuǎn)移浸潤(rùn)及預(yù)后的關(guān)系，并尋找相關(guān)的分子診斷標(biāo)志物以提高鑒別診斷甲狀腺良惡性腫瘤和判斷甲狀腺癌轉(zhuǎn)移潛力的準(zhǔn)確性，并為分子靶向治療研究指明新的方向^［1，2］。轉(zhuǎn)移相關(guān)基因(metastasis associated -1，Mta-1)是近年來發(fā)現(xiàn)在許多惡性腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移過程中扮演重要角色的新基因組^［3］。目前尚少見Mta-1蛋白在甲狀腺良、惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移中作用的研究報(bào)道^［4］。本研究通過觀察Mta-1蛋白在甲狀腺良、惡性腫瘤中的表達(dá)情況，并分析它與甲狀腺癌臨床病理特征間的關(guān)系，旨在探討Mta-1蛋白在鑒別甲狀腺良、惡性腫瘤的診斷價(jià)值及其在腫瘤形成、癌變及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2005年8月16日～2010年9月15日于東莞石碣醫(yī)院和暨南大學(xué)第一附屬醫(yī)院行手術(shù)治療的甲狀腺腫瘤患者190例，其中男46例，女144例；年齡21～72歲，平均(40.5±4.6)歲；甲狀腺腺瘤50例，甲狀腺癌140例(乳頭狀癌45例，濾泡狀癌45例，髓樣癌25例，未分化癌25例)，均經(jīng)手術(shù)切除后送組織病理活檢證實(shí)。另選擇同期甲狀腺腺瘤旁的正常甲狀腺組織30例為對(duì)照組，均經(jīng)組織病理活檢證實(shí)。

1.2 方法

1.2.1 試劑 Elivsion試劑盒和DAB顯色試劑盒均購自廣州安必平醫(yī)藥科技有限公司，Mta-1鼠抗人多克隆抗體均購自Bioworld Technology公司(抗體稀釋度1∶150)。

1.2.2 免疫組織化學(xué)染色 所有手術(shù)切除標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林液固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)4 μm切片。采用Elivsion兩步法Mta-1蛋白的表達(dá)，操作程序按說明書進(jìn)行：脫蠟、脫水、抗原修復(fù)，30 ml/L過氧化氫溶液室溫封閉10 min，滴加第一抗體Mta-1，37 ℃孵育2 h，滴加第二抗體辣根酶標(biāo)記羊抗鼠IgG多聚體，37 ℃孵育20 min，DAB顯色3～5 min，蘇木素對(duì)比襯染，光鏡下觀察。陰性對(duì)照以PBS替代一抗，用已知陽性標(biāo)本作陽性對(duì)照。

1.2.3 結(jié)果判斷 Mta-1蛋白主要在細(xì)胞核表達(dá)，呈棕黃色顆粒狀。隨機(jī)選擇5個(gè)高倍鏡視野(400倍)，以染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞率的得分之和進(jìn)行判斷：無染色記0分，弱染色(淺黃色)記1分，中等染色(棕黃色)記2分，強(qiáng)染色(黃褐色)記3分；陽性細(xì)胞率≤5%記0分，＞5%～25%記1分，＞25%～50%記2分，＞50%記3分。上述兩項(xiàng)積分相加，0分為陰性(-)，1～2分為弱陽性(+)，3～4分為中等陽性(++)，5～6分為強(qiáng)陽性(+++)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料運(yùn)用χ2檢驗(yàn)法。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Mta-1在各型甲狀腺腫瘤組織和正常甲狀腺組織中的表達(dá) 30例正常甲狀腺組織中無Mta-1陽性表達(dá)；甲狀腺腺瘤HIF-1α陽性表達(dá)率為8.0%(4/50)；甲狀腺癌HIF-1α陽性表達(dá)率為55.7%(78/140)。正常甲狀腺組織與甲狀腺腺瘤中Mta-1陽性表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，甲狀腺癌中Mta-1陽性表達(dá)明顯高于正常甲狀腺組織和甲狀腺腺瘤，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而不同類型甲狀腺癌組織間Mta-1陽性表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

2.2 甲狀腺癌組織中Mta-1與臨床病理特征的關(guān)系 甲狀腺癌組織中，Mta-1的表達(dá)與腫瘤大小、AJCC分期、分化程度、是否有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及浸潤(rùn)深度密切相關(guān)(P<0.01)，而與年齡及性別無關(guān)（P>0.05）。見表2。

3 討論

近年來影像學(xué)技術(shù)的發(fā)展飛速，在一定程度上提高了甲狀腺腫瘤的早期診斷率，但影像學(xué)技術(shù)對(duì)早期鑒別診斷甲狀腺腫瘤的良惡性仍存在不確定性。因此，尋找能鑒別良、惡性甲狀腺腫瘤并評(píng)估其生物學(xué)特性的腫瘤分子標(biāo)志物已成為學(xué)者們最迫切需要解決的問題^［5～6］。

Mta-1是1993年P(guān)encil等應(yīng)用差異雜交技術(shù)從具有轉(zhuǎn)移潛能的鼠乳腺癌細(xì)胞株13762NF中篩選克隆出的，因該基因的表達(dá)與乳腺腫瘤轉(zhuǎn)移成正相關(guān)，故被命名為（腫瘤）轉(zhuǎn)移相關(guān)基因。研究表明，Mta-1在人正常組織，包括心、腎、肺、肝等均呈低水平表達(dá)，而在腫瘤組織中表達(dá)水平較高，且與人類許多惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過程緊密相關(guān)^［7～9］。本研究結(jié)果顯示，甲狀腺癌中Mta-1陽性表達(dá)明顯高于正常甲狀腺組織和甲狀腺腺瘤，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且不同類型甲狀腺癌組織間Mta-1陽性表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。表明Mta-1與甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，可能參與促進(jìn)腫瘤細(xì)胞異常增殖的過程，且在不同病理類型甲狀腺癌發(fā)生過程中發(fā)揮的作用是相似的。提示Mta-1可以作為輔助甲狀腺癌早期鑒別診斷的輔助分子學(xué)指標(biāo)。

同時(shí)本研究結(jié)果分析了Mta-1表達(dá)與甲狀腺癌的臨床病理特征之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)Mta-1的表達(dá)與甲狀腺癌組織的腫瘤大小、是否有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度、分化程度以及AJCC分期密切相關(guān)(P<0.01)。提示Mta-1的過度表達(dá)不僅與甲狀腺癌發(fā)生密切相關(guān)，而且與甲狀腺癌的增殖、浸潤(rùn)和淋巴轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)。但目前對(duì)其確切機(jī)制及其與其他腫瘤轉(zhuǎn)移基因間的關(guān)系尚不明了，仍有待進(jìn)一步探討。相信隨著Mta-1在甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展過程中作用機(jī)制研究的不斷深入，Mta-1將可能成為甲狀腺癌的分子靶向治療的新靶點(diǎn)。

參 考 文 獻(xiàn)

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（收稿日期：2011-09-19）

（本文編輯：陳丹云）