慢性蕁麻疹患者血清IL-4\\IL-6和IFN-γ的測定

作者單位：524037 廣東省湛江市中心人民醫院

通訊作者：周琛

【摘要】 目的 探討慢性蕁麻疹患者血清中調節激活正常T細胞表達和分泌的IL-4、IL-6、IFN-γ的水平及意義。方法 對105例慢性蕁麻疹患者進行臨床評價，采用ELISA法測定30例健康志愿者與105例慢性蕁麻疹患者IL-4、IL-6和IFN-γ的含量。結果 慢性蕁麻疹患者血清中IL-4含量高于正常對照組（P＜0.01），IFN-γ含量顯著低于正常對照組（P＜0.05），IL-6含量與正常對照組差異無統計學意義（P＞0.05）。結論 慢性蕁麻疹患者血清中IL-4增高， IFN-γ下降，提示IL-4和IFN-γ在慢性蕁麻疹患者的發病過程中起一定作用。

【關鍵詞】 慢性蕁麻疹； 白介素-4； 白介素-6； 干擾素-γ

Dection of serum IL-4，IL-6 and IFN-γ in patients with chronic urticaria ZHOU Chen，CHEN Xin，CHEN Bao-jiang，GUAN Zhou-yuan.Central People's Hospital of Zhanjiang， Zhanjiang 524037，China

【Abstract】 Objective To investigate the serum levels of regulated upon activation normal T cell expressed and secreted（RANTES） IL-4， IL-6， IFN-γin patients with chronic urticaria and their roles in the pathogenesis of chronic urticaria.Methods 105 patients with chronic urticaria were inclueled into this studly along with 30 normal human control.ELISA was used to study the serum levels of IL-4，IL-6 and IFN-γ in normal controls and patients.Results The levels of IL-4 in the patients with chronic urticaria was higher than those in normal controls （P<0.01）.The levels of IFN-γin the patients with chronic urticaria was lower than that in normal controls （P<0.01） .There was no significant difference in the level of IL-6 between the patients with chronic urticaria and normal controls（P>0.05）.Conclusion The serum levels of IL-4 is elevated in patients with chronic urticaria， and exhibits a positive correlation tendency with disease activity. A significant decrease is observed in the serum levels of IFN-γ， which hints that IL-4 and IFN-γ may play a certain role in the pathogenesis of chronic urticaria.

【Key words】 Chronic urticaria; IL-4; IL-6; IFN-γ

慢性蕁麻疹的病因及發病機制尚未完全明了，普遍認為其發病主要是各種刺激因素通過刺激肥大細胞脫顆粒，釋放組胺，導致毛細血管通透性增加，從而產生風團。筆者通過檢測慢性蕁麻疹患者血清中的白介素-4（IL-4）、白介素-6（IL-6）和干擾素-γ（IFN-γ）的水平，探討是否由于Th-1/Th-2免疫失衡及組胺釋放，從而引發慢性蕁麻疹的發生。

1 材料與方法

1.1 研究對象 慢性蕁麻疹組：臨床表現為一過性風團，皮損時隱時現，以瘙癢為主要癥狀，病因不清，每周至少發作2次或癥狀持續2 d，每個風團持續時間24 h，病程≥6周。隨機選取2009年6月～2010年12月門診確診的慢性特發性蕁麻疹患者105例，男54例，女51例，年齡18～69歲，平均（35.03±10.08）歲，病程8周～10年，平均（132.58 ±126）周。排除自身免疫性疾病以及腫瘤和其他嚴重系統疾患，并且就診前7 d未服抗組胺制劑，以及2個月內未服用糖皮質激素和免疫抑制劑等影響免疫功能的藥物，并且經抽血檢測體外過敏原（吸入性變應原）陽性。正常對照組：隨機選取健康志愿者30例，男12例，女18例，年齡20～61歲，平均（30.30 ±10.2）歲，無慢性過敏性疾病，無精神神經疾病及精神病家族史。慢性蕁麻疹組與健康對照組間年齡、性別經統計學分析，差異無統計學意義。

1.2 試劑與儀器 全自動酶標儀（芬蘭，Thermo Lab Systems 型號MK3，Multiskan IL-4）檢測試劑盒，人IL-6 ELISA試劑盒，由北京科美東雅生物技術有限公司提供，測量儀器為合肥眾成機電技術開發有限公司生產的DFM-96型放射免疫γ計數器，IFN-γ檢測試劑盒（深圳晶美生物有限公司），－70 ℃冰箱，微量移液器。實驗操作由專職技術人員嚴格按說明書操作規程進行。

1.3 標本采集 以上各組受試者均于晨起8點空腹采集靜脈血4 ml置無菌試管中，室溫下靜置30 min后，3000 r/min，離心10 min，無菌收集血清1 ml，分裝至EP管中，加蓋塞緊，置-70 ℃ 冰箱內保存備用，并由專職技術人員在2周內檢測完畢。

1.4 具體操作步驟 將配制好的標準品各100 μl依次加入一排，并增加一孔只加樣品稀釋液作為零孔，分別標記樣品編號，加入100 μl已稀釋后的樣品于空白微孔中，酶標板加蓋，37 ℃反應90 min，甩去酶標板內液體，再對著吸水紙拍幾下；將準備好的生物素抗IL-6抗體工作液按每孔0.1 ml依次加入，于37 ℃反應60 min，0.01 PBS洗滌3次，每次浸泡1 min，將準備好的ABC工作液按每孔0.1 ml依次加入37 ℃反應30 min；0.01 PBS洗滌5次，每次浸泡1～2 min，按每孔90 μl依次加入TMB顯色液，37 ℃避光反應10～15 min，按每孔0.1 ml依次加入TMB終止液，此時藍色立即轉黃色，用酶標儀在450 nm的酶標儀上讀取各孔OD值，以零孔設為對照，所有的標準品和樣品的吸光值減去零孔的吸光值后，得到的數據在坐標紙上畫出曲線，在標準曲線上查找對應的濃度范圍。

1.5 統計學處理 用SPSS 16.0統計軟件進行統計學處理，所得實驗數據均以均數±標準差表示，進行t檢驗，分析病例組及正常對照組血清IL-4、IL-6及IFN-γ濃度， P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

見表1 。慢性蕁麻疹病例組患者血清中IL-4濃度與正常對照組比較差異有統計學意義（t2.656，P＜0.01），血清中IFN-γ濃度病例組與正常對照組比較差異有統計學意義（t2.425，P＜0.05），血清中IL-6濃度病例組與正常對照組比較差異無統計學意義（t1.982，P＞0.05）。

表1 慢性蕁麻疹患者與正常對照組血清IL-4、IL-6、

IFN-γ水平（x±s，μg/L）

3 討論

Th1細胞主要分泌IL-2、IL-12、干擾素（IFN）-γ、腫瘤壞死因子（TNF）-α等，主要介導細胞免疫反應，而Th2細胞主要產生IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13等，主要介導體液免疫反應。研究表明Th1/Th2細胞失衡與慢性蕁麻疹的發病有關。蕁麻疹患者發病的主要原因之一是血清IgE水平升高，而IL-4是IgE的一個主要調控因子^［1，2］，參與早期的抗原識別，因此IL-4在蕁麻疹的發生、發展中起著重要作用。國外有研究發現，過敏性皮膚病患者外周血單個核細胞產生IL-4明顯增多，而IL-γ明顯減少，這兩種因子失調程度、產生比例與疾病嚴重程度及IgE水平呈正相關。IFN-γ是一種重要的調節Th1/Th2平衡的調節因子，可抑制IL-4和IL-4介導的IgE的生成，并促進Th1型細胞因子的表達。Ferrer等^［3］通過檢測慢性蕁麻疹患者外周單核細胞內細胞因子的產生水平，發現IL-4水平明顯增高，并發現慢性蕁麻疹患者的CD4+T細胞活化并有產生高水平細胞因子的傾向，筆者在慢性蕁麻疹患者皮損組織病理中發現主要與CD4+T細胞浸潤相一致。

IFN-γ屬于Th1型細胞，是促進CD4+細胞轉變成Th細胞的主要細胞因子，它主要由激活的T淋巴細胞產生，其次可由NK細胞產生，主要作用是促使TH0細胞向TH1細胞分化，抑制向Th2細胞分化^［4］，而IL-4是一種Th-2型細胞細胞因子，具有調節Th1/Th2型細胞因子平衡的作用，IL-4就是一種很強的誘導劑，可以刺激T細胞表達IL-4，因而IL-4可以導致已有Th1型細胞因子模式向Th-2型細胞因子模式轉化。Th1細胞產生的IFN-γ與Th2細胞產生的IL-4互相拮抗，抑制體內IgE生成，從而抑制Ⅰ型變態反應的發生。本研究發現患者血清中IFN-γ水平下調，IL-4水平上調，Th2活化水平高于Th1，而且抑制機制失調，與文獻［5，6］報道的研究結論一致。

IL-6是一種與Th2免疫應答有密切關系的細胞因子^［7］，具有廣泛生物學作用的促炎性細胞因子，主要從血液中活化的單核細胞、成纖維細胞、巨噬細胞中產生^［8］。它是目前發現的一個重要的免疫抑制Th1細胞增殖及Th1細胞介導的細胞免疫應答。本研究發現患者血清中IL-6及IL-10水平略高于正常對照組，但兩者差異無統計學意義，原因可能是慢性蕁麻疹的不同病程紊亂的具體表現不同，也可能是實驗誤差，或樣本偏少，尚有待于后續更多樣本的研究，以進一步揭示和闡明。

參 考 文 獻

［1］ Mohamed RW， Fathy A，Ei-saved AE.Increased circulating Fcepsilon RII-bearing B-Lymphocytes and serum levels of IL-4 in nom-autoreaclive chronic idiopathic urticaria.Equpt Immunol，2003， 10（2）: 9-18.

［2］ Kimura M， Tsurutas， Yoshida T， et al. Unique profile of IL-4 and IFN-gamma production by peripheral blood. Immunol， 2000， 342: 643-645.

［3］ Ferrer M， Luquin E， Sanchez-Ibarrola A， et al. Secretion of cytokines， histamine and leukotrienesin chronic urticaria. Int Arch Allergy Immunol， 2002， 129（3）: 254-260.

［4］ Grlining G，Ford J G，Donaldson DD，et al. Roles of inter leukin-13 and interferon gawa in lung infammation. J chest， 2000，（2）: 88-95.

［5］ 黨倩麗，陸學東.慢性蕁麻疹血清IL-4，IFN-7及IgE水平觀察.臨床皮膚病雜志， 2000， 29（4）: 208-209.

［6］ 劉寶軍，王青，劉超，等.蕁麻疹患者外周血單核細胞產生IL-4，IL-10及IFN-γ水平及意義.臨床皮膚病雜志， 2002， 31（2）: 87- 88.

［7］ Mechiche H， koroglu A， Elaerts J， et al. Vascular effects of neurokinins in humans. Therapie， 2001， 56: 205-211.

［8］ Piconi S， Trabattoni D， Iemolie， et al. Immune profiles of patients with chronic idiopathic urticaria. Int Arch Allergy Immunol， 2002，128（1）: 59-66.

（收稿日期：2011-04-02）

（本文編輯：陳丹云）