兩種糖化血紅蛋白檢測(cè)方法的比較和性能評(píng)價(jià)

作者單位：272029 濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院

通訊作者：趙元明

【摘要】 目的 對(duì)兩種糖化血紅蛋白的檢測(cè)方法進(jìn)行比較和方法學(xué)評(píng)價(jià)。方法 用離子交換層析法、免疫比濁法測(cè)定糖化血紅蛋白，依據(jù)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)EP9-A2文件要求，分別在上述兩種檢測(cè)系統(tǒng)中測(cè)定標(biāo)本糖化血紅蛋白的濃度，記錄檢驗(yàn)結(jié)果，檢查離群點(diǎn)，計(jì)算線性方程、相關(guān)系數(shù)和直線回歸方程。結(jié)果 離子交換層析法測(cè)定均值8.49，免疫比濁法測(cè)定均值9.04，線性回歸方程Y0.966X-0.24，兩者相關(guān)性良好，兩者之間的偏差在臨床允許誤差范圍內(nèi)。結(jié)論 當(dāng)使用2種以上檢測(cè)方法檢測(cè)同一項(xiàng)目時(shí)，應(yīng)進(jìn)行方法比對(duì)和偏倚評(píng)估，免疫比濁法和離子交換層析法兩種檢測(cè)方法具有可比性，臨床可接受。

【關(guān)鍵詞】 糖化血紅蛋白； 免疫比濁法； 離子交換層析法； 檢測(cè)系統(tǒng)； 方法比對(duì)

Performance evaluation of two methods in detecting glycosylated hemoglobin LIU Ling-yun，ZHAO Yuan-ming. Hospital affiliated to Jining Medical College， Jining 272029，China

【Abstract】 Objective To compare and methodology evaluate two glycosylated hemoglobin detection methods.Methods Use the ion exchange chromatography， Immunoturbidimetry to detect the glycosylated hemoglobin， according to requirements of the EP9 - A2 paperwork maked by the American Association for Clinical Laboratory Standards， respectively detected the glycosylated hemoglobin concentrations in the above two kinds of detecting system， record test results， check outliers， calculate the linear equation， the correlation coefficient and linear regression equation.Results Determination mean of ion exchange chromatography is 8.49， determination mean of Immunoturbidimetry is 9.04， linear regression equation Y0.966 X-0.24， have a good correlation， within the clinical tolerances.Conclusion When using more than two kinds of detecting methods to detect the same item， should use the methods compare and bias evaluation， through studying the Immunoturbidimetry and ion exchange chromatography， we know these two methods are comparable， clinical acceptable.

【Key words】 Glycosylated hemoglobin; Immunoturbidimetry; Ion exchange chromatography; Methods comparison

近年來(lái)，隨著人們生活水平的提高，糖尿病的發(fā)病率越來(lái)越高，引起人們的關(guān)注。因此，探尋一種準(zhǔn)確、可靠、簡(jiǎn)便易行、便于進(jìn)行批量測(cè)量的實(shí)驗(yàn)方法，成為臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的要求。由于空腹血糖（FPG）和口服葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)（OGTT）在糖尿病的篩選、診斷、血糖控制等方面存在缺陷。目前，糖化血紅蛋白（HbA1c）作為糖尿病篩選、診斷、血糖控制、療效評(píng)估的有效監(jiān)測(cè)指標(biāo)，在臨床中得到了廣泛使用^［1］。現(xiàn)有兩臺(tái)儀器：一臺(tái)日立7600和一臺(tái)D-10糖化血紅蛋白分析儀，分別采用免疫抑制比濁法和離子交換層析微柱法來(lái)檢測(cè)HbA1c。不同的儀器采用不同的原理方法，使用不同來(lái)源的試劑、校準(zhǔn)品，構(gòu)成各自獨(dú)立的檢測(cè)系統(tǒng)，且各個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)的靈敏度、精密度不同。如何對(duì)不同分析系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析評(píng)價(jià)，是目前檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)界關(guān)注和討論的熱點(diǎn)。本研究按照臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)“用患者樣本進(jìn)行方法對(duì)比及偏倚評(píng)估-標(biāo)準(zhǔn)指南”（EP9-A）^［2］文件的要求，對(duì)實(shí)驗(yàn)室日立7600和D-10兩種糖化血紅蛋白檢測(cè)方法進(jìn)行對(duì)比和偏倚評(píng)估。為實(shí)現(xiàn)同一檢驗(yàn)科不同檢測(cè)系統(tǒng)間檢測(cè)結(jié)果的可比性及實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可提供可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑 （1）檢測(cè)系統(tǒng)一：D-10糖化血紅蛋白分析儀，離子交換層析微柱，BIO-RAD公司的配套試劑和專用校準(zhǔn)品。（2）檢測(cè)系統(tǒng)二：日立7600全自動(dòng)生化分析儀，免疫抑制比濁法，寧波美康生物試劑有限公司的配套試劑和專用校準(zhǔn)品。（3）質(zhì)控品：兩個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)使用的質(zhì)控品批號(hào)：20100112A。

1.2 對(duì)象 收集本院已確診的糖尿病和健康體檢者EDTA-K2抗凝血，共32份，其濃度選擇按照EP9-A2文件中的要求，空腹靜脈采血2 ml，EDTA-K2抗凝，并在采集后4 h內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 方法

1.3.1 參考方法與實(shí)驗(yàn)方法 D-10糖化血紅蛋白分析儀（離子交換層析微柱法）作為參考方法（X）；日立7600生化分析儀（免疫比濁法）作為實(shí)驗(yàn)方法（Y）。

1.3.2 樣本處理 根據(jù)美國(guó)國(guó)家實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（NCCLS）EP9-A2文件要求，做方法學(xué)比較試驗(yàn)^［3］。每天收集新鮮標(biāo)本8份，分別用兩種檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)這8份樣品進(jìn)行測(cè)定。連續(xù)檢測(cè)4 d，共計(jì)32組數(shù)據(jù)。

1.3.3 精密度檢測(cè) 用日立7600生化分析儀分別對(duì)高、中、低3種不同濃度的樣本進(jìn)行批內(nèi)和批間重復(fù)實(shí)驗(yàn)，并記錄檢測(cè)數(shù)據(jù)。

1.3.4 準(zhǔn)確度檢測(cè) 用日立7600生化分析儀分別對(duì)高、中、低3種不同濃度樣本進(jìn)行回收試驗(yàn)，并記錄檢測(cè)數(shù)據(jù)。

1.4 數(shù)據(jù)作圖分析 散點(diǎn)圖：Y軸為待比方法每樣本測(cè)定的值；X軸為參比方法每樣本測(cè)定的值。

1.5 參考方法（X）測(cè)定范圍的檢測(cè) 參考方法的測(cè)定范圍是否合適，可用相關(guān)系數(shù)（r）作粗略估計(jì)，如r≥0.975（或r²≥0.95），則認(rèn)為X的分析范圍合適，可用直線回歸計(jì)算斜率、截距，并根據(jù)臨床使用要求，將各個(gè)項(xiàng)目給定的醫(yī)學(xué)決定水平Xc帶入回歸方程，計(jì)算實(shí)驗(yàn)方法（Y）與比較方法（X）之間的相對(duì)偏差（SE%），若r＜0.975，則使用t檢驗(yàn)對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，并計(jì)算實(shí)驗(yàn)方法和參考方法均值的相對(duì)偏差^［4］。

1.6 計(jì)算線性回歸方程 YbX+a。

1.7 臨床可接受性能判斷 以臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)規(guī)范88（CLIA'88）對(duì)室間評(píng)估的允許誤差為判斷依據(jù)，方法學(xué)比較評(píng)估的相對(duì)偏差（SE%）≤1/2 CLIA'88屬于臨床可接受水平，即不同檢測(cè)系統(tǒng)間的測(cè)定結(jié)果具有可比性。

2 結(jié)果

2.1 2種檢測(cè)系統(tǒng)的精密度性能評(píng)價(jià) 對(duì)高、中、低3種濃度樣本分別進(jìn)行3次測(cè)試，得到批內(nèi)精密度；每日測(cè)一次，連續(xù)測(cè)3 d，得到天間精密度。數(shù)據(jù)見表1和表2，可以看出免疫比濁法的批內(nèi)、天間CV值已經(jīng)達(dá)到CLSI要求。

表1 免疫抑制比濁法的精密度評(píng)價(jià)

表2 離子交換層析法的精密度評(píng)價(jià)

2.2 日立7600（免疫抑制比濁法）準(zhǔn)確度評(píng)價(jià) 對(duì)標(biāo)本進(jìn)行回收試驗(yàn)，將被分析的純品標(biāo)準(zhǔn)液加入樣品中，成為分析樣品，原樣品加入同量的無(wú)分析物的溶液作為基礎(chǔ)樣品，然后用實(shí)驗(yàn)方法分析，兩者測(cè)定結(jié)果的差值為回收量。以衡量方法的準(zhǔn)確度。數(shù)據(jù)見表3。

表3 免疫抑制比濁法回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果（%）

2.3 方法學(xué)比對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 兩種方法測(cè)定結(jié)果比較 32份樣本HbA1c測(cè)定濃度范圍為5.0%～15.0%。

表4 兩種方法測(cè)定HbA1c的結(jié)果比較

2.3.2 對(duì)兩種實(shí)驗(yàn)方法的數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸統(tǒng)計(jì)得到方程Y0.966X-0.24，r²0.989，r²＞0.95，說(shuō)明日立7600免疫比濁法和D-10糖化血紅蛋白分析儀之間有良好的相關(guān)性。

2.3.3 散點(diǎn)圖 以生化分析儀免疫比濁法的測(cè)定值為Y軸，糖化血紅蛋白儀的測(cè)定值為X軸，散點(diǎn)圖見圖1。

2.4 臨床可接受性判斷 將b和a以及Xc（HbA1c的醫(yī)學(xué)決定水平）值代入SE｜（b-1）Xc+a｜后得知：SE≤1/2 CLIA'88。

3 討論

HbA1c是血液中紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白與血糖結(jié)合的產(chǎn)物，這種緩慢且不可逆的、非酶催化的反應(yīng)稱糖基化。HbA1c和血液中葡萄糖濃度持續(xù)升高呈正比，而與采血當(dāng)時(shí)的血糖濃度并不相關(guān)^［6］。紅細(xì)胞的平均壽命120 d，在紅細(xì)胞存活的過(guò)程中，血中葡萄糖濃度會(huì)有過(guò)多或過(guò)少的波動(dòng)，紅細(xì)胞越接近死亡，其血紅蛋白與葡萄糖的接觸時(shí)間就越長(zhǎng)，其糖化血紅蛋白的含量就越高。在紅細(xì)胞平均壽命（120 d）一半時(shí)段中所測(cè)得的平均值與糖化血紅蛋白最吻合^［7］。故HbA1c可反映測(cè)定前1～2個(gè)月內(nèi)血糖的平均水平，可作為糖尿病長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)的良好指標(biāo)^［8］。

目前，筆者所在科有兩種檢測(cè)系統(tǒng)可測(cè)定HbA1c，而不同的檢測(cè)系統(tǒng)其靈敏度、精密度不同。實(shí)現(xiàn)同一檢驗(yàn)項(xiàng)目不同檢測(cè)系統(tǒng)檢驗(yàn)結(jié)果的可比性是質(zhì)量管理的最終目標(biāo)。本研究參考EP9-A2文件，對(duì)2種檢測(cè)系統(tǒng)HbA1c測(cè)定進(jìn)行方法比對(duì)和偏倚評(píng)估，為實(shí)現(xiàn)HbA1c測(cè)定的可比性提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。比對(duì)實(shí)驗(yàn)要求：在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中必須保持實(shí)驗(yàn)方法和參考方法都處于完整的質(zhì)量控制之下，失控時(shí)必須重做。為了考察實(shí)驗(yàn)方法的精密度，筆者選用了高、中、低3種濃度的樣本進(jìn)行了批內(nèi)和天間重復(fù)性實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，免疫比濁法的批內(nèi)和天間CV＜6.67%，均低于1/3 CLIA'88規(guī)定的允許誤差范圍，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)方法（免疫比濁法）的精密度符合要求，比對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可靠。

相關(guān)與回歸分析表明，實(shí)驗(yàn)方法與參考方法間的相關(guān)系數(shù)r²＞0.95，說(shuō)明X的分布范圍合適，可以用回歸統(tǒng)計(jì)的方法分析對(duì)比檢測(cè)系統(tǒng)與實(shí)驗(yàn)檢測(cè)系統(tǒng)之間的系統(tǒng)誤差。將HbA1c的醫(yī)學(xué)決定水平值（Xc）代入相應(yīng)的回歸方程，計(jì)算出醫(yī)學(xué)決定水平出的系統(tǒng)誤差，得知：SE≤1/2 CLIA'88。因此，實(shí)驗(yàn)方法屬可接受，其測(cè)定結(jié)果在比較范圍內(nèi)與對(duì)比檢測(cè)方法具有可比性。綜上所述，免疫抑制比濁法與離子交換層析法呈高度相關(guān)，兩法均能滿足臨床需要。

參 考 文 獻(xiàn)

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（收稿日期：2011-03-31）

（本文編輯：陳丹云）