嗎替麥考酚酯對老年系統性紅斑狼瘡患者免疫細胞水平變化的影響①

李倩倩 姜振宇 趙 令 馬 寧 王 凱 張彥東

(吉林大學白求恩第一醫院風濕免疫科，長春130021)

系統性紅斑狼瘡是(SLE)是一種自身免疫性疾病，病因及發病機制目前尚未完全闡明，SLE好發于育齡期女性，但也可發生于老年人，由于老年SLE臨床上較少見，且與青年SLE的臨床表現有較多不同，常易誤診。盡管目前對SLE發病機制的研究取得較大的發展，但主要是集中在疾病與適應性免疫系統的關系上，自身免疫性疾病的共同病理基礎是自身抗原和抗體形成免疫復合物，激活補體系統，是導致多器官損傷，除產生自身抗體外，還有免疫細胞、細胞因子等免疫異常，而淋巴細胞亞群特別是T細胞、B細胞及NK細胞對疾病均有一定的影響。現階段，SLE的治療仍以糖皮質激素和免疫抑制劑為主。單純應用糖皮質激素治療SLE，激素用量大，易復發;激素聯合免疫抑制劑治療SLE可減少激素用量，有效控制病情，而嗎替麥考酚酯(MMF)作為最初用于抑制器官移植后的排斥反應的免疫抑制劑，近年來開始試用治療多種自身免疫性疾病。本研究探討MMF對老年SLE的外周血T細胞、B細胞、NK細胞水平變化的影響。

1 材料與方法

1.1對象與方法 依據1997年美國風濕學會(ACR)修訂的SLE分類診斷標準選取30例2011年1月到2012年1月吉林大學第一醫院老年SLE(≥60 歲)［1］，男2 例，女28 例，年齡(59.40 ±0.96)歲，系統性紅斑狼瘡活動指數(SLEDAI)12(4～32)，抗-雙鏈DNA陽性率82%，C3為0.42(0.31～0.92)，C4為0.13(0.04～0.20)。將SLE患者隨機分為MMF聯合激素治療組，給予 MMF 600 mg/(m·d)口服，1 mg/(kg·d)潑尼松龍靜點;單純激素治療組，給予潑尼松龍1 mg/(kg·d)靜點，每組15例患者，均治療4周。治療中，除激素和MMF外，僅給予其他對癥支持治療，但對患者的淋巴細胞水平均無影響。SLE疾病活動指數(DAI)≥6分為疾病活動期。所有SLE患者均為初發SLE，排除系統性硬化、肌炎或其他自身免疫疾病，或過去的6個月已經給予免疫抑制劑或糖皮質激素治療的SLE患者。同期門診健康患者30例，男1例，女29例，年齡(59.20±1.151)歲。既往無風濕病及其他重大疾病病史。

1.2流式細胞技術檢測外周血淋巴細胞比例 于治療前及治療后4周采集所有研究對象的外周血，采用各種單抗染色及流式細胞術測定各淋巴細胞亞群的分數比。每個采樣管采集50 μl血液，加入5 μl單克隆抗體。單抗包括：FITC偶聯CD4單克隆抗體、PE偶聯CD8單克隆抗體、PerCP偶聯CD3單克隆抗體、FITC偶聯 CD3單克隆抗體，PE偶聯CD16CD56單克隆抗體，PE偶聯CD19抗體，樣本在室溫下放置0.5小時，之后加入美國BD公司生產的FACS細胞裂解液，靜置6分鐘。用PBS緩沖液洗過2遍后，應用流式細胞儀的數據分析軟件(v5.7.2)分析細胞水平。

1.3統計學方法 計量資料以中位數和范圍表示，計數資料以率表示，采用SPSS14.0統計軟件分析秩和檢驗和卡方檢驗。兩個變量的關系用等級相關分析評估。

2 結果

2.1老年SLE患者淋巴細胞亞群的水平變化 與對照組比較，老年SLE患者CD3+CD4+Th細胞明顯降低(P＜0.000 1)，CD3+CD8+Ts細胞明顯升高(P=0.000 3);老年SLE患者CD3-(CD16CD56)+NK、CD3+(CD16CD56)+NK細胞較對照組明顯降低(P＜0.000 1)，而CD3-CD19+B細胞較對照組明顯增高(P=0.000 2)。

2.2老年SLE患者外周血淋巴細胞亞群與SLEDAI的相關性 老年SLE患者外周血CD3-CD19+B細胞與 SLEDAI呈正相關性(P=0.003 4，R=0.267 8)。但我們發現CD3+CD4+Th(P=0.071 0，R=0.315 0)、CD3+CD8+Ts(P=0.126，R=0.245 6)、NK(P=0.098 7，R=0.574 1)細胞與SLEDAI活動指數無明顯相關性。

表1 老年SLE患者淋巴細胞亞群的水平變化(%)Tab．1 The change of lymphocyte subsets in elderly SLE patients(%)

2.3MMF對老年SLE患者外周血淋巴細胞亞群的影響 單用激素組治療后CD3-CD19+B細胞較治療前明顯降低(P=0.035 9)。MMF聯合激素組，治療后CD3+CD4+Th細胞較治療前明顯升高(P=0.002)，CD3-CD19+B細胞較治療前明顯降低(P＜0.000 1)。MMF聯合激素組對淋巴細胞亞群的影響優于單用激素組。見表2。

表2 MMF對老年SLE患者外周血淋巴細胞亞群的影響Tab．2 The effect of MMF on levels of peripheral blood lymphocyte subsets in elderly SLE patients

3 討論

T、B細胞亞群數量異常在SLE發病中的作用近年來一直是國內外學者研究的熱點。本研究發現老年SLE患者外周血CD4+T細胞數目降低和CD8+T細胞數目增加，進一步導致CD4+/CD8+比例失調，與既往研究成果相一致［2］。研究表明盡管在SLE患者外周血CD4+T細胞數目降低、CD8+T數目增加，但是仍然可以導致B細胞過度活化，進而產生各種自身抗體，引起發病［3］。

B細胞功能亢進，過度活化產生大量的自身抗體，可以導致SLE的發生和發展［4］。活動期SLE患者外周血B細胞中，TRAF作為細胞凋亡調控中的TNF信號負性調節因子，可能通過和抗凋亡蛋白連接而抑制其凋亡，從而導致B細胞存活延長，產生更多的自身抗體而致病［5］。本研究亦發現老年狼瘡患者B細胞明顯升高，且與SLEDAI呈明顯正相關。

有文獻報道NK細胞數量在SLE患者體內明顯下降［6］。本研究結果也提示，老年SLE患者NK細胞數較正常對照組明顯降低。研究發現在SLE中由于循環免疫復合物和血清細胞因子所引起的NK細胞凋亡可能導致NK細胞的減少［7］。

治療SLE的藥物主要是糖皮質激素和免疫抑制劑。MMF被認為是治療狼瘡腎的重要治療方法，且毒副作用小［8］。研究證實，MMF具有高度抗B、T細胞增生作用，減少自身抗體及抗DNA抗體的產生［9］，從而減少循環免疫復合物濃度及相應減少免疫復合物在腎臟的沉積，延緩腎臟損害。但迄今為止，有關MMF治療作用的研究僅限于狼瘡腎，并且它對于腎臟相關的非腎臟臨床表現的癥狀的研究并不多。本研究發現，激素和MMF聯合治療4周后，CD3+CD4+Th細胞較治療前明顯升高，B細胞較治療前明顯降低。單用激素治療4周后，僅有B細胞較治療前明顯降低，說明對于老年SLE患者MMF和糖皮質激素都可以調節免疫細胞的分布，但聯合應用MMF和激素在調節免疫細胞的效應方面優于單用激素，為了證明此項研究，還需要大樣本試驗。

1 Hochberg M C.Updating the American college of rheumatology revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus［J］.Arthritis Rheum，1997;40(9)：1725-1727.

2 Patrick Blanco，Vincent Pitard，Jean-Francois Viallard et al．Increase in activated CD8+T lymphocytes expressing perforin and granzyme B correlates with disease activity in patients with systemic lupus erythematosus［J］.Arthritis Rheum，52(1)：201-211.

3 Filaci G，Bacilieri S，Fravega M et al．Impairment of CD8+T suppressor cell function in patients with active systemic lupus erythematosus［J］.J Immunol，2001;166(10)：6452-6457.

4 張傳文.系統性紅斑狼瘡發病機制的研究進展［J］.醫學信息，2011;7(9)：3165-3166.

5 周 玲，柴華旗，戴 蘭 et al.系統性紅斑狼瘡患者外周血B淋巴細胞CD40、TRAF的表達及其意義［J］.蘇州大學學報，2008;28(3)：441-443.

6 Park Y W，Kee S J，Cho Y N et al．Impaired differentiation and cytotoxicity of natural killer cells insystemic lupus erythematosus［J］.Arthritis Rheum，2009;60：1753-1763.

7 Shibatomi K，Ida H，Yamasaki S et al．A novel role for interleukin-18 in human natural killer cell death：high serum levels and low natural killer cell numbers in patients with systemic autoimmune diseases［J］.Arthritis Rheum，2001;44：884-892.

8 Cortés-Hernández J，Torres-Salido M T，Medrano A S et al．Longterm outcomes-mycophenolate mofetil treatment for lupus nephritis with addition of tacrolimus for resistant cases［J］.Nephrol Dial Transplant，2010;25：3939-3948.

9 Allison A C，Eugi E M.Mycophenolate mofetil arationaly de sigmed immunosuppressive drug［J］.Clin Tram Splant，1993;7：96-112.