三黃顆粒退黃機(jī)制的初步研究

張國(guó)斌，尹江峰，王 強(qiáng)，劉君波

三黃顆粒是由我院自主研發(fā)，由茵陳、大黃、黃芩、黃柏和甘草等中草藥組成的復(fù)方中藥制劑，具有清熱利濕、退黃之功效［1］。臨床上主要用于新生兒溶血癥、高膽紅素血癥、傳染性黃疸型肝炎等疾病。現(xiàn)利用ANIT造成小鼠膽汁瘀積模型和CCl4造成小鼠肝細(xì)胞損傷模型，對(duì)三黃顆粒的退黃機(jī)制進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品與試劑 三黃顆粒(解放軍二○二醫(yī)院制劑室)，聯(lián)苯雙酯滴丸(北京協(xié)和藥廠)，茵梔黃顆粒(魯南厚普制藥有限公司)，異硫氰酸-α-萘酯(ANIT)(北京北海六環(huán)科技發(fā)展有限公司，臨用前以大豆油配成3.5 mg/mL的溶液)，四氯化碳(CCl4):分析純(化學(xué)試劑有限公司，臨用前以大豆油配成0.12%的溶液)，0.9%氯化鈉注射液(沈陽(yáng)志鷹制藥廠)，ALT、AST、BIL、ALP、LDH試劑盒均為OLYmpus原裝試劑盒。

1.1.2 主要儀器 OLYmpus AU2700全自動(dòng)生化分析儀;KDC-40低速離心機(jī)(科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司);電子分析天平(上海天平儀器廠)。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小白鼠，體質(zhì)量18～22 g，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，合格證號(hào)SCXK(京)2007-0001。

1.2 方法

1.2.1 三黃顆粒抗ANIT致小鼠膽汁瘀積［2-3］昆明種小鼠60只，雄性，體質(zhì)量18～22 g，適應(yīng)性喂養(yǎng)2 d后，按質(zhì)量隨機(jī)分成6組，每組10只，即空白對(duì)照組，ANIT模型組，茵梔黃顆粒組，三黃顆粒低、中、高劑量組。空白對(duì)照組和ANIT模型組每日灌胃(ig)蒸餾水20 mL/kg;茵梔黃組每日按2.34 g/kg(顆粒量)，20 mL/kg ig給藥;三黃顆粒低、中、高劑量組每日分別按4、6、8 g/kg(生藥量) ig給藥，連續(xù)給藥10 d。于給藥第8天，除空白對(duì)照組小鼠按20 mL/kg ig給予大豆油外，其余各組小鼠均按70 mg/kg劑量ig給ANIT，體積為20 mL/kg，之后繼續(xù)給藥。48 h后斷頭取血，血樣經(jīng)3 000 r/min，離心5 min后經(jīng)全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清ALT、AST、STB、ALP活性;并立即剖腹取肝臟，用生理鹽水沖盡殘血，濾紙拭干，稱重，計(jì)算肝指數(shù)，肝指數(shù)=肝重/體重。

1.2.2 三黃顆粒抗 CCl4致小鼠急性肝損傷［2-3］

昆明種小鼠70只，雌雄各半，體質(zhì)量18～22 g，適應(yīng)性喂養(yǎng)2 d后，按質(zhì)量隨機(jī)分成7組，每組10只，即空白對(duì)照組，CCl4模型組，聯(lián)苯雙酯組，茵梔黃顆粒組，三黃顆粒低、中、高劑量組。空白對(duì)照組和CCl4模型組給予蒸餾水;聯(lián)苯雙酯組每日按200 mg/kg給藥;茵梔黃顆粒組每日按2.34 g/kg (顆粒量)給藥;三黃顆粒低、中、高劑量組每日按4、6、8 g/kg(生藥量)給藥，給藥體積均為20 mL/ kg，1次/d，連續(xù)給藥10 d，末次給藥后2 h，除空白組腹腔注射(ip)10 mL/kg的大豆油外，其余各組小鼠均ip 0.12%CCl4大豆油溶液，體積為10 mL/ kg。24 h后斷頭取血，血樣經(jīng)3 000 r/min，離心5 min后經(jīng)全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清ALT、AST活性;并立即剖腹取肝臟，用生理鹽水沖盡殘血，濾紙拭干，稱重，計(jì)算肝指數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 三黃顆粒對(duì)ANIT致小鼠膽汁瘀積的影響

2.1.1 對(duì)小鼠肝指數(shù)的影響 模型組小鼠的肝指數(shù)明顯高于空白組(P＜0.001)。三黃顆粒低、中、高劑量組均能抑制ANIT所致小鼠肝指數(shù)的升高(與模型組比較，P＜0.05或P＜0.01)，各劑量組呈現(xiàn)一定的劑量相關(guān)性。茵梔黃顆粒組對(duì)ANIT致小鼠肝指數(shù)升高的抑制作用差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(與模型組比較，P＜0.05)。見表1。

2.1.2 對(duì)小鼠血清中ALT、AST的影響 模型組血清中ALT、AST明顯高于空白組(P＜0.001)。三黃顆粒中、高劑量組和茵梔黃顆粒組對(duì)抑制ANIT所致小鼠血清ALT、AST升高差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(與模型組比較，P＜0.05或P＜0.01)，低劑量組能抑制ALT升高(P＜0.05)，對(duì)AST的升高雖有降低的趨勢(shì)，但抑制作用差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，各劑量組呈現(xiàn)一定的劑量相關(guān)性。見表2。

表1 三黃顆粒對(duì)小鼠肝指數(shù)的影響±s)

表1 三黃顆粒對(duì)小鼠肝指數(shù)的影響±s)

注:與空白組比較，#P＜0.001;與模型組比較，*P＜0.05，*＊P＜0.01

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表2 三黃顆粒對(duì)小鼠血清中ALT、AST的影響±s)

表2 三黃顆粒對(duì)小鼠血清中ALT、AST的影響±s)

注:與空白組比較，#P＜0.001;與模型組比較，*P＜0.05，*＊P＜0.01

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2.1.3 對(duì)小鼠血清中STB、ALP的影響 模型組小鼠血清中STB、ALP明顯高于空白組(P＜0.01或P＜0.001)。三黃顆粒中、高劑量組和茵梔黃顆粒組均能抑制ANIT所致小鼠血清STB、ALP升高(與模型組比較，P＜0.05或P＜0.01)，三黃顆粒低劑量組能抑制STB的升高(P＜0.05)，對(duì)ALP的升高有降低的趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，各劑量組呈現(xiàn)一定的劑量相關(guān)性。見表3。

表3 三黃顆粒對(duì)小鼠血清STB、ALP的影響(±s)

表3 三黃顆粒對(duì)小鼠血清STB、ALP的影響(±s)

注:與空白組比較，#P＜0.01，##P＜0.001;與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01

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2.2 三黃顆粒對(duì)CCl4致小鼠肝損傷的影響

2.2.1 對(duì)小鼠肝指數(shù)的影響 模型組小鼠的肝指數(shù)明顯高于空白組(P＜0.001)。三黃顆粒低、中劑量組和中藥茵梔黃顆粒組能抑制CCl4所致小鼠肝指數(shù)的升高(與模型組比較，P＜0.05)，高劑量組和聯(lián)苯雙酯組可抑制CCl4所致小鼠肝指數(shù)的升高(P＜0.001)。見表4。

表4 三黃顆粒對(duì)小鼠肝指數(shù)的影響(±s)

表4 三黃顆粒對(duì)小鼠肝指數(shù)的影響(±s)

注:與空白組比較，#P＜0.001;與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.001

組別 劑量(g/kg)動(dòng)物數(shù)(只)肝指數(shù)(×10－2)－ 10 4.750±0.410 CCl4模型組 － 10 6.115±0.455#聯(lián)苯雙酯組 0.2 10 5.154±0.270＊＊茵梔黃組 2.34 10 5.583±0.413*三黃顆粒低劑量 4 10 5.511±0.524*三黃顆粒中劑量 6 10 5.494±0.650*三黃顆粒高劑量 8 10 5.169±0.411空白對(duì)照組＊＊

2.2.2 對(duì)小鼠血清ALT、AST的影響 模型組小鼠血清中ALT、AST明顯高于空白組(P＜0.01或P＜0.001)。三黃顆粒中、高劑量組均能抑制CCl4所致小鼠急性肝損傷導(dǎo)致的血清中ALT、AST升高(與模型組比較，P＜0.05或P＜0.01)，低劑量組能抑制ALT的升高(P＜0.05)，對(duì)AST的升高有降低的趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，各劑量組呈現(xiàn)一定的劑量相關(guān)性。聯(lián)苯雙酯組能顯著對(duì)抗CCl4致小鼠急性肝損傷導(dǎo)致的血清中ALT、AST升高(與模型組比較，P＜0.01)。茵梔黃顆粒組也能顯著抑制由CCl4致小鼠肝損傷所致的血清ALT、AST升高(與模型組比較，P＜0.05)。見表5。

表5 三黃顆粒對(duì)小鼠血清ALT、AST的影響(±s)

表5 三黃顆粒對(duì)小鼠血清ALT、AST的影響(±s)

注:與空白組比較，#P＜0.01，##P＜0.001;與模型組比較，* P＜0.05，＊＊P＜0.01

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3 討論

三黃顆粒主要由茵陳、大黃、黃芩、黃柏和甘草等中藥組成，具有清濕熱、退黃疸之功效［1］。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證實(shí)，茵陳可增加膽汁分泌［4］、提高膽中膽酸、膽紅素的排泄量，保護(hù)肝細(xì)胞膜、防止肝細(xì)胞壞死，促進(jìn)肝細(xì)胞再生及改善肝臟微循環(huán)［5］。黃芩可使膽汁排泄量增加，對(duì)肝臟有一定保護(hù)作用［6］。甘草對(duì)肝損傷有保護(hù)作用。

ANIT可引起阻塞性黃疸，一次口服 ANIT 50～150 mg/kg時(shí)，血清膽紅素水平12～24 h開始升高，48 h達(dá)到高峰［2］。本實(shí)驗(yàn)制備的小鼠膽汁瘀積模型采用ig ANIT 70 mg/kg劑量，具有較好的重復(fù)性，模型組血清染黃率可達(dá)70%。本實(shí)驗(yàn)中，模型組小鼠肝指數(shù)、ALT、AST、STB、ALP均遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于空白組(P＜0.01或P＜0.001)，提示小鼠膽汁瘀積模型制備成功。

CCl4對(duì)肝細(xì)胞的損傷作用使肝細(xì)胞內(nèi)ALT、AST釋出，引起血清中該酶的活性大大提高［7］。本實(shí)驗(yàn)中，模型組小鼠肝指數(shù)、ALT、AST均明顯高于空白組(P＜0.01或P＜0.001)，提示小鼠肝細(xì)胞損傷模型制備成功。

茵梔黃顆粒的保肝利膽作用［8］以及聯(lián)苯雙酯的保肝作用［9-10］，在本次實(shí)驗(yàn)中也得到證實(shí)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，三黃顆粒可抑制ANIT致小鼠肝指數(shù)、ALT、AST、STB，ALP升高及CCl4所致小鼠肝指數(shù)、ALT、AST的升高，且存在一定的量效關(guān)系。三黃顆粒對(duì)ANIT和CCl4所致肝損傷具有保護(hù)和降酶退黃的作用，其退黃作用與其保肝利膽作用有關(guān)，但其具體的降黃機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

［1］ 藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［M］.一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:166，17，211，214，59.

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