無精子因子微缺失與男性不育的臨床研究

張文林 鄧江錦

廣東省揭西縣人民醫院檢驗科，廣東揭西 515400

根據有關統計學資料，在我國正常家庭，不孕不育問題中有40% 左右系男方問題[1]。筆者通過對51例男性不育患者進行無精子因子（AZF）檢測，探討排除合并其他男性疾病后，原發性無精及少弱精癥患者與AZF微缺失的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機抽取2010年11月～2012年4月來筆者所在醫院就診的男性不育患者51例，年齡24～39歲，平均（29.5±6.3）歲。其中精液經離心沉淀后，連續2次顯微鏡檢查常規精液均未發現精子者（無精子癥）30例；連續兩次常規精液分析精子密度均＜5×106/mL或a級＜5%（嚴重少精子癥）及連續2次常規精液分析精子密度均為＜20×106/mL（少精子癥）者21例，分別分為無精子癥組和嚴重少精子癥及少精子癥組。并排除合并其他男科疾病。另選擇20例正常生育史男性健康志愿者作為對照組，年齡26～37歲，平均（30.7±4.4）歲。兩組患者在性別、年齡等一般資料比較（P＞0.05），差異無統計學意義，具有可比性。

1.2 AZF檢測方法

抽取受試者外周血3 mL，EDTA-K2抗凝后嚴格按照DNA提取試劑盒（HQ & Q Blood DNA Kit，安徽優晶生物工程有限公司）說明提取DNA。再進行多重PCR擴增，以性別決定基因SRY作為內參照，每個AZF區域設置2個序列標簽位點（sequence tagged sites，STS），AZFa 為 SY84、SY86；AZFb 為SY127、SY134；AZFc為SY254、SY255。所有DNA樣品均經2次多重PCR完成，稱為Multiplex A和B，每次多重PCR均包括AZFa、b、c區域的STS和對照基因引物。在Multiplex A中完成SRY、SY254、SY127、SY86的擴增；在Multiplex B完成SRY、SY134、SY84、SY255的擴增。 PCR擴增產物經3.0%瓊脂糖凝膠電泳（恒壓130 V）40 min，用GEL Doc2000凝膠成像系統進行DNA電泳條帶的觀察。

1.3 統計學處理

采用統計學軟件SPSS 13.0進行統計學分析，計量資料用（）的形式表示，采用t檢驗，計數資料用x2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組與AZF微缺失概況比較

51例不育患者中AZF基因微缺失7例，無精子癥組有2例AZFa缺失，1例AZFa＋AZFb＋AZFc缺失，1例AZFb＋AZFc缺失，1例AZFb缺失；嚴重少精子癥及少精子癥組有2例AZFc缺失。總體AZF微缺失檢出率13.7%。

2.2 AZF基因微缺失與精子密度的關系

30例無精子癥患者中Y染色體AZF微缺失5例，在無精子癥患者中AZF微缺失檢出率16.7%；21例嚴重少精子癥及少精子癥患者中AZF微缺失2例，檢出率9.5%，對照組未檢出AZF微缺失。

統計學分析顯示各組間AZF微缺失率，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 男性不育患者與正常生育史男性AZF基因微缺失檢出率比較

3 討論

據有關研究表明，有多種原因均可引起男性生精障礙，其中有近30%的患者原因不明[2]，即排除其他男性疾病后引起的生精障礙，稱為原發性不育，其中10%～15%的無精子癥和5%～10%的嚴重少精子癥及少精子癥由Y染色體上AZF的微缺失造成。

目前AZF微缺失的篩選在我國尚處于新興階段，對嚴重少弱精子癥和無精子癥的臨床指導意義卻難以估量，具體表現為：（1）通過檢查可以明確“原因不明”的不育患者的病因，減少無謂的“治療”，以達到節約醫療資源及患者治療少花費的目的，有利于社會和個人；（2）如果該類患者想以輔助生育技術達到生育目的，那么有必要對患者告知的是，其后代也存在著不育的可能[3]，具體說來，即對于Y染色體上的AZF微缺失，可以很大程度上從父代傳給子代，最有可能的后果是致使子代不育[4]。一般說來，傳統診斷手段中Y染色體培養過于耗時，并且不能區分具體位點的缺失，不利于臨床治療和診斷。所以筆者運用多重PCR技術檢測Y染色體AZF基因家族AZFa、AZFb、AZFc3個區域中6個序列標簽位點微缺失。本技術簡便、快速，較之傳統診斷方法節約時間，對患者損傷小。還可以避免因誤診帶來的不必要的藥物及手術治療，為男性不育患者的診斷、治療節省相當大的費用且可以提供有力的科學依據，值得臨床推廣應用。

[1] 王麗霞，王雪楠.男性不育癥患者微量元素含量與精液質量關系的研究[J].中國醫藥科學，2011，1（16）：14-15.

[2] 盧少明，陳子江，趙力新，等.不育男性無精子因子微缺失的檢測及評估[J].中華泌尿外科雜志，2004，25（8）：557-558.

[3] 曹興午.男性不育癥研究進展——無精子因子[J].中國性科學，2003，12（3）：23-24.

[4] 柳鑫，郝冬梅，閆素文.無精子因子區微缺失的研究進展[J].國外醫學（計劃生育分冊），2002，21（4）：229-230.