c－FLIP在前列腺癌過表達的研究進展*

冷遠景， 陳 捷， 王共先

(南昌大學第一附屬醫院泌尿外科，南昌大學泌尿外科研究所，江西南昌330006)

前列腺癌(prostatic carcinoma，PCa)為歐美發達國家男性最常見的惡性腫瘤之一，是老年男性惡性腫瘤死亡的首要原因［1］。在我國隨著社會人口老齡化、前列腺特異性抗原(prostate specific antigen，PSA)普查和臨床診療技術的提高，PCa的發病率呈上升趨勢。PCa患者早期診斷時多對激素剝奪治療(androgen deprivation therapy，ADT)敏感，稱為雄激素依賴性前列腺癌(androgen－dependent prostate cancer，ADPC)。但長時間的ADT時，ADPC會逐漸演變為雄激素非依賴性前列腺癌 (androgen－independent prostate cancer，AIPC)。Fas相關死亡域樣白細胞介素1β轉換酶抑制蛋白(cellular FLICE－inhibitory protein，c－FLIP)作為一種抗凋亡蛋白，參與死亡受體(death receptor，DR)信號通路。c－FLIP的表達在PCa中具有重要意義，可能是AIPC和ADPC治療新的基因靶點［2］。為此本文介紹c－FLIP的一些概況及在PCa過表達意義的研究進展。

1 c－FLIP概述和功能

DR信號通路配體包括FasL、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α，TNF － α)、腫瘤壞死因子相關弱凋亡誘導配體(TNF－like weak inducer of apoptosis，TWEAK)/APO－3L和腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(TNF－related apoptosis－inducing ligand，TRAIL)/APO－2L，通過與相對應的受體Fas/CD95、TNFR －1、DR3/AP0－3、DR4/5結合并活化，活化后的Fas相關死亡域(Fas－associated death domain，FADD)能夠與procaspase－8形成復合物，激活DR信號通路，誘導細胞凋亡。TRAIL和TWEAK配體能特異性誘導腫瘤細胞凋亡而不損傷正常細胞，在腫瘤治療可能具有重要意義［3－4］。但往往腫瘤中存在c－FLIP過表達的情況，影響TRAIL的治療效果。

c－FLIP 又稱 Casper、iFLICE、FLAME －1、CASJ、CLARP、MRIT或usurpin，其基因轉錄時有13種mRNA剪接變異體，但目前在細胞中只能檢測到3種蛋白產物，即 c－FLIP(L)、c－FLIP(S)和 c－FLIP(R)。其中c－FLIP(L)分子量約55 kD，N端有2個死亡效應結構域(death effect domain，DED)，C端含有無生物學活性的caspase－8樣結構域;c－FLIP(S)和c－FLIP(R)分子量分別為2.6 kD 和2.4 kD，N'端結構與 c－FLIP(L)類似，但C端比 c－FLIP(L)短，且C端無caspase－8樣結構域。c－FLIP結構類似于 procaspase－8，其3種亞型蛋白產物的DED均能競爭性與DR的FADD結合，抑制caspase凋亡通路，從而維持細胞存活。Chang等［5］發現c－FLIP僅在高劑量時才表現抗凋亡作用，而低劑量的c－FLIP卻表現為促凋亡功能。因此，降低PCa細胞c－FLIP過表達水平，可能會提高腫瘤細胞的凋亡敏感性。

2 雄激素受體信號通路調控c－FLIP表達

雄激素受體(androgen receptor，AR)信號通路存在于前列腺組織，被認為與前列腺生長、PCa細胞存活及AIPC進程均有一定聯系。AR信號通路主要從兩方面調控c－FLIP表達:(1)當內源性雄激素配體如睪丸激素、二氫睪酮活化AR，活化的AR進入細胞核內，通過 INNP4B/Akt/NF － κB/FBX10/c － Fos［6－8］通路使c－FLIP表達;(2)此外作為AR靶向基因的c－ FLIP［9－11］，其非編碼區存在雄激素反應元件(androgen response elements，AREs)，能夠與活化的AR的DNA區域(DNA－binding domain，DBD)結合，形成復合物c－FLIP(AREs)－DBD(AR)，此復合物也可使c－FLIP表達上調［11］。AR的輔調節因子如FOXO3a等在調控AR與其靶向基因結合的同時，也可調控c－FLIP的表達［12］。ADT時:一方面上述信號通路被阻斷，Akt/PI3K途徑受到抑制，c－Fos上調，c－FLIP表達下降;另一方面也影響AR的活化，從而不能與c－FLIP的DBD結合，抑制了c－FLIP表達。可以認為，活化的AR可調控c－FLIP的表達水平。

3 過表達的c－FLIP維持PCa細胞的存活與生長

細胞凋亡是機體正常細胞在生理和病理性刺激后，高度有序基因調控下，一系列酶參與的引起自發死亡過程。當前列腺細胞發生癌變時，基因調控紊亂，表現為抗凋亡基因表達上調，促凋亡基因表達下降。Kim 等［13］發現 96.3%(103/107)PCa 患者組織存在抗凋亡蛋白c－FLIP的強陽性表達。Christian等［14］發現，轉染c－FLIP表達質粒至PC－3細胞荷瘤鼠能影響蛋白酶小體(proteosome)抑制劑硼替佐米(bortezomib)的治療效果，54%的PC－3細胞荷瘤鼠腫瘤體積并沒有明顯變化，而對陰性對照組有治療作用。蛋白酶抑制劑雖能誘發處于快速分裂中的癌細胞的凋亡，但主要途徑仍是通過細胞外凋亡途徑即caspase途徑，而表達的c－FLIP能夠抑制procaspase－8的激活，阻斷caspase凋亡途徑，因此轉染c－FLIP表達質粒至PC－3細胞荷瘤鼠對硼替佐米的治療具有抵抗作用。

ADPC和AIPC細胞的生長和存活均需要一定的c－FLIP表達:當ADT作用于雄激素依賴的LNCaP細胞時，c－FLIP表達下調，誘導腫瘤細胞凋亡。如再繼續ADT時，AR受體有可能會發生突變，其機制尚不明確。突變后的AR受體對雄激素異常敏感，表現為異常活化，而此時LNCaP細胞的c－FLIP表達水平升高，LNCaP細胞雖對ADT有抗性，但生長仍依賴于雄激素信號通路，只是此時雄激素信號通路的激活并不依賴于雄激素的存在，而是由于發生包括雄激素受體突變在內的改變導致該雄激素信號增強，此時單一的ADT對于AIPC效果往往較差。如使用低劑量12－O－十四烷酰佛波乙酸酯－13(12－O －tetradecanoylphorbol－13－acetate，TPA)降低LNCaP細胞的c－FLIP水平，可使LNCaP細胞重新對凋亡敏感化［15］。AIPC細胞的存活也同樣需要c－FLIP過表達的維持［16］:體外實驗發現低表達的PC－3細胞易受TRAIL誘導凋亡的影響;c－FLIP表達上調時，PC－3細胞對TRAIL誘導的凋亡不敏感。可能c－FLIP同時通過抑制介導激活細胞內源性線粒體途徑，維持 PCa細胞的存活［17］。有理由相信，高表達的c－FLIP在維持ADPC和AIPC的細胞生長與繁殖有著重要的地位。

4 過表達的c－FLIP影響AIPC的進程

AIPC的形成機制較為復雜，可能與腫瘤的異質性、AR異常變異及凋亡基因調控失調等方面有關。近幾年發現c－FLIP與雄激素非依賴性PCa形成有一定聯系:(1)ADT時，ADPC的c－FLIP表達上調，而在AIPC中無變化［18］;(2)動物實驗通過轉染c－FLIP基因至LNCaP細胞的荷瘤鼠發現耐受ADT時間短于對照組［11］。這可能是由于長時間治療ADPC時，引起AR受體突變后的異常活化，同時也在加速AIPC的形成，此外，也會引起c－FLIP表達上調。因此認為，c－FLIP的過表達參與了AIPC的進程，這對于治療AIPC或延緩其進程具有重要臨床意義。

5 過表達的c－FLIP作為PCa的治療靶點

上述已介紹c－FLIP對于維持PCa細胞的存活、生長及促進AIPC均有一定聯系，有效調節c－FLIP的過表達水平對于延緩AIPC及促進凋亡有一定作用。體外實驗發現第4代促性腺激素釋放激素(gonadotropin－releasing hormone，GnRH)拮抗劑Ozarelix對于PC－3、DU－145細胞具有抑制其增殖作用，其機制是降低腫瘤細胞的c－FLIP的表達，誘導 PCa 細胞凋亡敏感化［19］。Yasukochi等［20］研究發現在體外實驗中組織蛋白酶E對于PCa細胞增殖具有抑制作用，并且不受耐阿霉素治療PCa細胞作用的影響。他們認為組織蛋白酶E對PCa細胞的抑制作用是通過降低腫瘤細胞的c－FLIP表達水平，聯合使用組織蛋白酶E和阿霉素對于治療化療抵抗性的PCa是有效的。Jung等［21］迅速激活DU－145細胞的腺苷酸活化蛋白激酶(AMP－activated protein kinase，AMPK)后發現，DU145能抵抗Fas介導的DR信號通路，而抑制DU145的 AMPK會降低c－FLIP的表達水平，激活 DR信號通路。Symes等［22］發現米托蒽醌和多西紫杉醇能夠殺死PCa細胞的作用機制同樣也是因為降低c－FLIP的表達水平，此外，白細胞介素－8及MG－132通過降低c－FLIP表達誘導PCa細胞凋亡敏感化［23－24］。因此抑制 PCa細胞的c－FLIP表達對治療PCa具有一定作用［25］。

6 展望

c－FLIP作為抗凋亡蛋白，通過競爭性抑制DR的 Fas/CD95、TNFR －1、DR3/AP0－3、DR4/5與 procaspase－8結合，抑制細胞凋亡。研究證實了AIPC的組織中存在c－FLIP過表達的情況，進而對DR介導的凋亡信號產生抵抗作用。體內、外實驗發現直接或間接抑制PCa細胞的c－FLIP表達能誘導PCa細胞凋亡敏感化。本文作者認為c－FLIP可能是PCa有效的基因治療靶點，如何有效、特異地降低腫瘤組織c－FLIP水平可能將成為雄激素非依賴性(或難治性)PCa的治療重點之一。降低腫瘤組織的c－FLIP不僅能誘導PCa細胞凋亡，還能延緩甚至逆轉AIPC形成，在PCa基因治療的基礎研究中具有積極意義。

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