基質金屬蛋白酶－14對老年骨肉瘤組織中血管新生的影響

殷 鵬 牟文之 苑廣科 (濰坊醫學院附屬青州中心醫院，山東 濰坊 262500)

基質金屬蛋白酶－14對老年骨肉瘤組織中血管新生的影響

殷 鵬 牟文之 苑廣科 (濰坊醫學院附屬青州中心醫院，山東 濰坊 262500)

目的檢測基質金屬蛋白酶(MMP)－14、血管內皮生長因子(VEGF)和CD34在骨肉瘤中表達，探討MMP－14和VEGF對骨肉瘤中CD34標記陽性的血管密度(MVD)的作用。方法79例骨肉瘤患者術后存檔蠟塊為觀察組，40例良性骨病變組織為對照組，采用免疫組織化學方法檢測MMP－14、VEGF和CD34表達，分析MMP－14、VEGF表達和MVD在不同臨床病理特征的關系。結果觀察組MMP－14、VEGF表達陽性率、MVD顯著高于對照組;觀察組MMP－14、VEGF和MVD均與骨肉瘤臨床分期、Ki67表達及腫瘤體積相關。骨肉瘤MMP－14、VEGF表達和MVD呈正相關。結論骨肉瘤MMP－14、VEGF高表達，共同促進CD34陽性的MVD形成，聯合檢測MMP－14和VEGF可能對判斷骨肉瘤預后有重要意義。

骨肉瘤;基質金屬蛋白酶－14;血管內皮生長因子;CD34;免疫組織化學技術

老年骨肉瘤患者病情發展快，且腫瘤于數月內通過血道出現肺部轉移，因此惡性程度高，預后極差〔1〕。老年人手術過程中，較難對腫瘤組織切除干凈，可能與腫瘤中旺盛的血管新生有關。新近研究表明骨肉瘤生長過程常依賴血管生成，基質金屬蛋白酶家族(MMPs)是一大類鋅依賴性內肽酶家族，在腫瘤浸潤性生長和轉移中起重要作用〔2〕。MMP－14是MMPs家族重要成員，是一種跨膜蛋白水解酶，可降解基底膜和細胞外基質(ECM)成分，同時降解細胞因子和生長因子等〔3，4〕。近來有觀點認為MMP－14對腫瘤血管生成具有一定促進作用〔5〕。本文探討MMP－14對老年人骨肉瘤組織中血管生成的影響。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 2005年1月至2010年12月行骨肉瘤手術切除的蠟塊組織79例。均符合WHO骨肉瘤診斷標準。年齡60～89(平均66.9)歲，其中男40例，女39例，術前均未行放化療。同時選取病理證實為良性骨腫瘤的老年人標本40例為對照組，骨樣骨瘤30例，骨瘤10例;男女各20例，年齡60～86(平均67.6)歲。兩組性別、年齡等無明顯差別，具有可比性。

1.2 MMP－14、血管內皮生長因子(VEGF)和CD34蛋白檢測MMP－14、VEGF和CD34均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。三種蛋白檢測應用免疫組織化學技術SP法，操作均由同一病理技師完成，嚴格按說明書操作，嚴格質控。

1.3 結果判定標準 MMP－14和VEGF均為細胞質內出現棕黃色顆粒為陽性細胞，每張切片隨機觀察20個具有代表性的視野，取陽性細胞平均數，以陽性細胞數≥20%陽性，以＜20%

為陰性。CD34標記的微血管密度(MVD)的評價方法:以毛細血管內皮細胞胞質染色呈棕黃色顆粒者為陽性細胞，確定棕黃色染色的內皮細胞或細胞叢為一個血管，先在低倍鏡下全面觀察切片以確定腫瘤內血管密度最高處，在高倍鏡下記錄5個視野內微血管數，取其平均數為MVD值。

1.4 統計學方法 應用SAS6.12統計軟件進行χ2和t檢驗及相關分析。

2 結果

2.1 兩組 MMP－14、VEGF表達和 MVD比較 觀察組 MMP－14、VEGF陽性表達率和MVD明顯高于對照組(均P＜0.05)。見表1。

2.2 骨肉瘤MMP－14、VEGF表達和MVD與不同臨床病理特征的關系 觀察組MMP－14和VEGF陽性表達率、MVD值與骨肉瘤腫瘤直徑、Ki67表達量及Ennecking分期有關。見表2。

表1 兩組MMP-14、VEGF陽性表達率和MVD比較〔n(%)〕

表2 MM P-14、VEGF表達和MVD與骨肉瘤臨床病理指標的關系

2.3 觀察組MMP－14、VEGF陽性表達和MVD相關性分析線性相關分析結果顯示MMP－14和VEGF呈正相關(r=0.41，P=0.032 9)，MMP－14 和 MVD 呈正相關 (r=0.48，P=0.012 6)，VEGF和 MVD 呈正相關(r=0.51，P=0.008 6)。

3 討論

老年人由于機體退行性變化表現出腫瘤惡變過程中的差異，老年人骨肉瘤中存在豐富血管新生，且生物學行為復雜，影響因素更多〔6〕。MMPs是一組結構上具有很大同源性，并能有效降解ECM蛋白質，因為結構中含有金屬離子(主要是鋅和鈣)而進行命名〔7〕。MMP－14發揮作用時能在細胞表面對MMP－2等 MMPs家族成員進行有效活化，同時又反作用于MMP－14，使MMP－14表達明顯增高，形成環式循環，進而促進腫瘤離開原發部位發生轉移〔8，9〕。也有研究顯示 MMP－14可誘導腫瘤間質細胞產生MMP－14原酶，該酶激活后被腫瘤細胞攝取到細胞膜表面，起到降解ECM的作用;且激活的MMP－14不僅可激活 MMP－2 降解周圍基質，也可發揮降解 ECM 功能〔10，11〕。VEGF是目前研究最多的促血管生成因子，對腫瘤基質血管形成及腫瘤生物學行為均有重要影響〔12〕。而血管新生的標記物是研究腫瘤血管新生的基礎。CD34是直接反映腫瘤血管新生的指標，其標記血管內皮細胞的特異性和敏感性均很強。

本實驗結果提示MMP－14、VEGF和CD34在腫瘤形成和進展中有重要作用。MMP－14可通過調節ECM合成與降解代謝而影響細胞間、細胞與基質間信息傳遞，調節細胞分化及遷移，進而可能影響腫瘤生物學行為。本實驗結果提示MMP－14、VEGF對腫瘤中MVD有重要促進作用，即MMP－14、VEGF共同促進骨肉瘤中血管形成。此結果也提示MMP－14可能作為上游蛋白，調節VEGF表達，使骨肉瘤中新生血管增加，加速腫瘤形成〔13〕。實驗結果顯示MMP－14、VEGF和MVD均與腫瘤體積、Ki67表達陽性率及Ennecking臨床分期密切相關，由于Ki67表達及 Ennecking分期均與骨肉瘤預后相關，因此，聯合檢測MMP－14、VEGF和MVD可能對判斷老年人骨肉瘤預后有一定價值，即MMP－14、VEGF和MVD高表達老年患者預后差。

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R738

A

1005-9202(2012)16-3408-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.16.022

殷 鵬(1965－)，男，副主任醫師，副教授，主要從事骨外科疾病研究。

〔2011－10－17 收稿 2012－01－19 修回〕

(編輯 袁左鳴/張 慧)