正交試驗優選丹川膠囊的醇提工藝

葛 莉 馮一凡 王衛鋒 李 芳 張小莉

陜西中醫學院10級研究生（咸陽712046）

丹川膠囊由丹參、川芎、天麻等藥物組成，具有益氣活血、疏經通絡之功，用于急性高原病的治療。為了有效控制提取工藝，本文將采取正交試驗法，以丹參酮ⅡA、丹酚酸B結合醇浸出物為評價指標，確定最佳醇提取工藝條件。

1 儀器與試藥 1.1 試藥 丹參、川芎、天麻等中藥均購自陜西省藥材公司，經檢驗均符合《中國藥典》2010年版一部的規定［1］；丹參酮ⅡA對照品（批號1107－200416，供含量測定用）；丹酚酸B對照品（批號111562－201110，供含量測定用）；均購自中國藥品生物制品檢定所。所用化學試劑為分析純（天津富宇化學試劑廠）、液相用試劑為色譜純（美國Fisher scintific）、水為娃哈哈純凈水（杭州娃哈哈食品有限公司）。

1.2 儀器 高效液相色譜儀（Lab Alliance型恒流泵；Waters966二極管陣列檢測器，活德國際貿易（上海）有限公司；Millennium 32色譜工作站）、C18色譜柱（Diamosil 4.6×250mm，5μm）、超聲波清洗機（H66025T）、TGL－16G離心機（上海安亭科學儀器廠）、HCTP11B10托盤藥物天平（北京市宣武區天平廠）、BP211D型電子分析天平（德國賽多利斯天平有限公司）。

2 方法與結果 2.1 醇提工藝 正交設計為了確定最佳的提取參數，擬采用正交試驗對提取工藝中所涉及的條件進行優選，通常情況下：提取時間、加醇量、提取次數以及乙醇濃度對提取結果影響較大，因此，以提取時間、加醇量、提取次數、乙醇濃度作為影響因素，各選擇三個水平，以L9（34）表安排試驗，篩選最佳提取工藝條件。因素水平表見表1。

2.2 評價指標 確定丹參為方中君藥，丹參酮ⅡA以及丹酚酸B為其主要有效成分，且其含量測定有成熟方法，可用HPLC法測定提取物中丹參酮ⅡA以及丹酚酸B的含量，因此選擇以丹參酮ⅡA、丹酚酸B的含量并結合醇浸出物作為評價指標。

2.3 樣品溶液的制備 按處方比例量稱取醇提工藝部分的藥材（丹參、川芎各36g，天麻18g）90g，共9份，按正交實驗表下設計的實驗條件以加熱回流方式進行提取，合并提取液。將上述提取液濃縮，定容至一定體積，制得樣品溶液。

表1 因素水平表

2.4 醇浸出物測定方法 取各正交試驗號提取液50mL，于干燥至恒重的蒸發皿中水浴蒸干，105℃烘箱干燥至干，取出，迅速置干燥器中放冷，稱重，計算。

2.5 含量測定 2.5.1丹酚酸B含量測定［2，3］：

2.5.1.1 色譜條件：色譜柱：C18色譜柱（Diamosil 4.6×250mm，5μm）；流動相：乙腈－甲醇－（甲酸：水）｛10：30：60（1：59）｝；流速1.0mL·min－1；檢測波長286nm；柱溫25℃；進樣量10μL。

2.5.1.2 對照品溶液的制備：精密稱取丹酚酸B對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.1348mg的溶液，搖勻，即得。

2.5.1.3 供試品溶液的制備：分別精密吸取各提取液5mL，置10mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.5.1.4 測定法：分別吸取對照品溶液及上述供試品溶液各10μL，注入色譜儀，測定并計算。

2.5.2 丹參酮ⅡA 含量測定［4，5］：2.5.2.1色譜條件：色譜柱：C18色譜柱（Diamosil 4.6×250mm，5μm）；流動相：甲醇－水（75：25）；流速1.0mL·min－1；檢測波長270nm；柱溫25℃；進樣量10μL。

2.5.2.2 對照品溶液的制備：精密稱取丹參酮ⅡA對照品適量，加甲醇制成每1mL含11mg的溶液，搖勻，即得。

2.5.2.3 供試品溶液的制備：分別精密吸取各提取液5mL，置10mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.5.2.4 測定法：分別精密吸取對照品溶液及上述供試品溶液各10μL，注入色譜儀，測定并計算。

2.6 結果及分析正交試驗 結果見表2，方差分析結果見表2。

表2 醇提L9（34）正交試驗表及結果

表3 方差分析表

試驗結果表明，提取次數對提取量影響較大，由正交試驗結果以及方差分析結果表現出來的最佳工藝為A2B2C3D2。即：加8倍量70%乙醇回流提取3次，每次1.5h。

2.7 驗證試驗 按處方量稱取各藥材共135g，共3份，按照所選提取條件試驗，并測定丹參酮ⅡA、丹酚酸B的含量和醇浸出物。結果見表4。

表4 驗證試驗結果

3次驗證試驗表明，檢測指標接近或者高于正交表中最優值，說明優選的提取條件基本可行。

3 討 論 3.1 在對醇提工藝條件進行優選時

我們同時考察了丹參酮ⅡA、丹酚酸B的含量和醇浸出物，這比采取單一指標對提取工藝進行評價更加科學和合理。

3.2 根據本實驗優選的最佳工藝 經三批中試放大生產，結果產品質量穩定，適合工業化大生產。

［1］ 國家藥典委員會.中國藥典［S］.一部.北京：人民衛生出版社，2010，70－71.

［2］ 苑相愛.高效液相色譜法測定心肌炎顆粒中丹酚酸B含量 ［J］.中國藥業，2010，19（3）：21－22.

［3］ 杜中良，程振田.正交試驗優選丹參中丹酚酸B的提取工藝 ［J］.中國藥房，2010，21（31）：2911－2912.

［4］ 黃愛英.HPLC法測定復方丹參合劑中丹參酮ⅡA的含量 ［J］.中醫藥導報，2011，17（4）：110－111.

［5］ 宋志釗，劉元，莫海濤，等.HPLC法測定千斤腦康寧膠囊中丹參酮ⅡA ［J］.中國實驗方劑學雜志，2010，16（6）：79－80.