活血通脈注射液對大鼠血管平滑肌細胞增殖的影響

趙 燕 陜西省銅川市人民醫院（銅川727000）

活血通脈注射液經皮腔內冠狀動脈介入術（Percutaneous coronary intervention，PCI）已成為治療冠心病的主要手段之一，但術后再狹窄嚴重影響其遠期的治療效果，介入術后再狹窄率可高達40%～50%［1］。介入手術后，雖在一時解決了心血管的局部阻塞問題，但它只是對出現問題的血管進行了局部處理，并沒有從根本上解決造成血管狹窄的病因，支架介入術后，原先沒有出現病變的血管仍有可能出現阻塞、狹窄。其晚期血栓或遲發血栓卻是致命的并發癥，一旦發生，往往危及患者生命［2］。所以后續的藥物治療和生活方式的調整，除了能防止原先放入支架的血管出現再狹窄，還能防止沒有病變的血管發生病變。已有研究表明，某些中藥具有抑制血管內膜增生、抑制平滑肌細胞增殖的作用［3］。本實驗探討了活血通脈對大鼠血管平滑肌細胞增殖與凋亡的影響，現報道如下。

1 材料與方法 1.1 試驗動物與材料 選取健康SD大鼠80只（雌雄各半），月齡6～8個月，體重1.51±0.22Kg，由本院實驗動物中心提供（動物合格證號：SCXK2003－0003）。中藥活血通脈注射液：由人參、麥冬、川芎組成，國藥準字Z20100032，成都森科制藥有限公司。阿托伐他汀：河南天方藥業股份有限公司，國藥準字H20093757。一氧化氮試劑盒購自北京三博生物科技有限公司，內皮素試劑盒購自上海生物生物工程研究所

1.2 分組方法 把SD大鼠80只隨機分為4組，每組20只，雌雄各半，A正常對照組；B模型組；C活血通脈注射液組；D阿托伐他汀組。B、C、D組行手術造模。

1.3 術造模 用20%烏拉坦溶液以5mL／Kg腹腔注射麻醉大鼠，仰位固定，切開皮膚，分離右股動脈，穿刺右股動脈，逆行導入直徑0.5mm的球囊導管至腎動脈下方，鹽水充盈球囊，抽空球囊內液體，重復上述過程2次，達到剝脫動脈內皮的目的，建立動物心臟狹窄模型。

1.4 給藥方法A組動物未經手術及用藥；B組動物經歷手術但未用藥；C組動物于術前1d開始給予活血通脈注射液（4mL／kg／d），腹部靜脈緩慢注射：D組動物于術前1d開始給予阿托伐他汀片（1mg／kg／d）口服。C組與D組的用藥天數都為15d。

1.5 指標檢測 1.5.1血清NO和血漿ET檢測：動物冠心病模型建立2周后，麻醉實驗動物，腹主動脈取血，血樣注入含7.5%EDTA二鈉30μl和抑肽酶40μl的試管中；用低溫離心機4℃3000rpm離心10min，分離血清，－70℃保存。血清NO測定：硝酸還原酶法；血漿ET測定：放免法。

1.5.2 光鏡檢查：造模2周，實驗動物麻醉后，小心并迅速分離出腹主動脈，截取長約10mm腹主動脈，用于光鏡檢測，4℃冰箱保存。照相采用OLYMPUS AX70顯微照像系統。內膜面積＝內彈力板圍繞面積－管腔面積，中膜面積＝外彈力板圍繞面積－內彈力板圍繞面積，內膜增殖指數＝內膜面積／（內膜面積＋中膜面積）。

1.6 統計學處理 數據處理采用SPSS19.0統計分析軟件包進行統計學處理。NO、ET檢測與光鏡圖像測量等資料采用±s表示，組間兩兩比較采用方差分析。以P＜0.05為有統計學意義。

2 結果 2.1 血清NO和血漿ET檢測結果 由表1可見，鼠腹主動脈球囊損傷后，血清NO明顯下降、血漿ET明顯升高（P＜0.01）。活血通脈注射液組和阿托伐他汀組血清N0水平明顯升高（P＜0.05），血漿ET水平顯著降低（P＜0.05）。

表1 活血通脈對大鼠血清NO和血漿ET的影響（±s）

表1 活血通脈對大鼠血清NO和血漿ET的影響（±s）

組 別 n NO（μmol／L） ET（pg／mL）正常對照組 20 73.24±7.25 80.84±12.69模型組 20 53.65±.25 118.95±14.20活血通脈注射液組 20 66.79±5.62 86.30±11.84阿托伐他汀組 20 60.28±6.13 84.95±15.62

2.2 光鏡觀察結果 正常對照組：腹主動脈血管壁界限清楚，分為內膜、中膜和外膜。內膜為單層內皮細胞，中膜的主要細胞成分是平滑肌細胞，外膜為薄層纖維結締組織。模型組可見內膜不規則地增厚，部分突向管腔，增厚的內膜以平滑肌細胞及基質為主。活血通脈注射液組和阿托伐他汀組內膜增生程度有不同程度的減輕。

2.3 光鏡圖像分析結果 由表2可見，經過光鏡圖像分析，正常對照組大鼠主動脈內膜面積無法測量。模型組內膜增生明顯，活血通脈注射液組和阿托伐他汀組內膜面積明顯減少（P＜0.01）；活血通脈注射液組內膜增殖指數明顯降低（P＜0.01）。

表2 活血通脈對大鼠腹主動脈內膜增生的影響（cm2，±s）

表2 活血通脈對大鼠腹主動脈內膜增生的影響（cm2，±s）

組 別 n 內膜面積 中膜面積 內膜增殖指數正常對照組 20 0 21.85±2.52 0模型組 20 9.86±1.21 23.95±2.52 0.29±0.01活血通脈注射液組 20 7.75±1.06 23.81±3.32 0.25±0.01阿托伐他汀組 20 8.02±0.85 22.39±0.28 0.26±0.03

3 討 論 冠心病的介入治療術后最常見的問題是血管再狹窄。球囊及支架的置入會損傷血管，內皮剝落，導致血管重構以及啟動了局部血栓形成和炎癥反應。血管平滑肌細胞向內膜遷移和過度增殖，在遷移過程中，大量膠原、彈力蛋白、纖維連接蛋白、多糖等基質沉積在血管壁，導致內膜增生，形成再狹窄［4］。據統計，球囊擴張術后再狹窄高達50%，金屬裸支架植入術后高達20%～30%，藥物支架置入后仍達5%～10%。經大量臨床實驗證實，介入治療術后3個月是再狹窄形成的關鍵時期，如果能在這段時間避免再狹窄的發生，則術后再狹窄的發生幾率會非常低［5］。

在常規藥物預防中，阿托伐他汀能抑制細胞內膽固醇合成限速酶，通過其降脂作用可以防止動脈粥樣硬化的發生和發展［6］。中醫認為，介入后再狹窄屬中醫血瘀證范疇，冠脈介入治療后的病機特點為本虛為主，兼有邪實。因此冠脈介入治療后的中醫辨證治療偏重于本虛的治療，從整體上調整陰陽平衡，改善臟腑功能，治療上多以益氣、活血、化痰為主［7］。本文所采用的中藥活血通脈注射液是在益氣養陰、活血通絡治療原則指導下組成的中藥復方制劑，由人參、麥冬、川芎成，方中人參大補元氣，復脈固脫，補脾益肺，生津，安神，用于體虛欲脫，肢冷脈微，脾虛食少；麥冬具有養陰生津，潤肺清心的作用，可用于肺燥干咳，陰虛癆嗽，喉痹咽痛，津傷口渴，內熱消渴，心煩失眠，腸燥便秘；川芎活血行氣、祛風止痛的功效，諸藥合用，共奏活血通絡之功［8，9］。本文研究結果顯示，活血通脈注射液可使冠心病大鼠主動脈內膜面積和內膜增殖指數明顯減少，內膜增生減輕。N0與ET－1具有相互拮抗的作用，是兩種重要的內皮源性血管活性因子。NO－1起血管擴張的作用，而ET－1作用則相反［10，11］。本文研究結果顯示，活血通脈注射液可明顯升高冠心病大鼠血清N0水平，降低血漿ET水平。上述研究表明，中藥活血通脈注射液具有防治介入術后再狹窄的作用，這可能與其調控平滑肌細胞增殖、升高血清N0水平、降低血漿ET水平有關。

［1］ 陳玉成，陳懷生，龍 波，等.丹參酮II A磺酸鈉對鼠髂動脈球囊損傷后血管內膜增殖的抑制［J］.中藥材，2007，30（7）：811－815.

［2］ 常 亮，張立德，馬賢德，等.補脾益氣中藥對脾氣虛證大鼠血管平滑肌細胞內PDGF、Caspase－3表達的影響［J］.中華中醫藥學刊，2011，25（2）：114－116.

［3］ Tnmer NA，0Regan DJ，Ball SG，et al.Simvastatin inhibits MMP－9secretion from human saphenous vein smooth muscle cells by inhibiting the RhoA／ROCK pathway and reducing MMP－9mRNA levels［J］.Faseb J，2005，19（7）：804－806.

［4］ Wang L，Chen J，Sun Y，et al.Regulation of connexin expression after balloon injury：possible mechanisms for antiproliferative effect of statins［J］.Am J Hypertens，2005，18（9 1）：146－1153.

［5］ 鄧 剛，余葉蓉.中藥黃芪對肥胖大鼠內皮血管舒張功能的影響［J］.四川大學學報：醫學版，2009，35（2）：608－611.

［6］ 王效增，韓雅玲.介入術后再狹窄形成中血管內皮細胞作用的研究進展［J］.臨床心血管病雜志.2005，21（7）：443－444.

［7］ 陳美華，林求誠，林炳輝.軟脈靈對動脈粥樣硬化血管功能的影響［J］.中醫藥通報，2007，26（1）：51－53.

［8］ 張利群，賈志梅，王洪濤，等.纈沙坦對大鼠心肌梗死后心室重構的影響［J］.中國醫科大學學報，2007，36（1）：57－61.

［9］ Zwadlo Carolin，Borlak Jurgen.Disease associated changes in the expression of ion channels，ion receptors，ion exchangers and Ca2＋handling proteins in heart hypertrophy［J］.Toxicol Appl Pharmaeol，2005，207（3）：244－256.

［10］ Borlak J，Thum T.Hallmarks of ion channel gene expression in end－stage heart failure［J］.FASEB J，2003，17（12）：1592－1608.

［11］ 蘇 丹，成建華，戴亞蕾，等.壓力負荷性左室肥厚大鼠心肌鈉鈣交換體和肌漿網鈣泵的表達［J］.基礎醫學與臨床，2008，28（8）：801－804.