缺鐵性貧血Wistar大鼠對Hp的易感性分析

幽門螺桿菌(Hp)感染被認為是消化性潰瘍和胃癌的主要危險因素之一。Hp感染可導致缺鐵性貧血(IDA)^[1]。近年來，Hp感染與缺鐵性貧血(IDA)之間的關系越來越受到眾多學者的關注^[2]。然而，正常的Wistar大鼠很難被Hp感染，本研究用Hp感染缺鐵性貧血的Wistar大鼠，分析其對Hp的易感性。

資料與方法

實驗動物：體重180±5g的雌性Wistar大鼠24只(購自蘭州大學實驗動物中心)。

Hp的培養：于-80℃的冰箱中取出HpSS1.Hp11637(金昌分離株)后融化，離心2000r/3分鐘。用無菌槍頭吸取沉淀，將菌液接種于哥倫比亞培養基上。在37℃的恒溫箱中需氧環境(5%氧氣，85%氮氣，10%二氧化碳)培養72小時后，取出培養基，用L環刮取透明的針尖樣的菌落，用同樣的方法傳代3～5次后，配制成菌液。

缺鐵性貧血模型的建立：采用已有的低鐵飼料喂養的方法^[3]，建立Wistar大鼠的缺鐵性貧血模型。

實驗動物處理：Hp感染組飼以清潔級飼料，缺鐵Hp感染組飼以低鐵飼料，兩組大鼠均飲去離子水。1個月后，兩組大鼠每周用Hp混合菌液1.5ml(1010CFU/ml)灌胃2次，灌胃前禁水禁食24小時，并以5% NaHCO3溶液2ml預先處理。15分鐘后，再給予HpSS1和Hp11637的混合(1:1)菌液1.5ml(1010CFU/ml)灌胃。3個月后，處死兩組大鼠，取出胃黏膜，觀察其形態有無異常，并做快速脲素酶試驗，觀察脲酶試紙的顏色變化。

結 果

Hp感染組中脲素酶試驗均為陰性，缺鐵Hp感染組中有2只大鼠脲素酶試驗為陽性。肉眼下，兩組大鼠的胃黏膜均無明顯異常。

討 論

幽門螺桿菌是一種單極.多鞭毛.末端鈍圓.螺旋形彎曲的細菌。長2.5～4.0μm，寬0.5～1.0μm。在胃黏膜上皮細胞表面常呈典型的螺旋狀或弧形。在固體培養基上生長時，除典型的形態外，有時可出現桿狀或圓球狀。幽門螺桿菌是微需氧菌，環境氧要求5%～8%，在大氣或絕對厭氧環境下不能生長。幽門螺桿菌檢測試劑為目前國內使用最廣泛的幽門螺桿菌檢測工具。許多固體培養基可作幽門螺桿菌分離培養的基礎培養基，布氏瓊脂使用較多，但需加用適量全血或胎牛血清作為補充物方能生長。常以萬古霉素.TMP.兩性霉素B等組成抑菌劑防止雜菌生長。幽門螺桿菌的全基因序列已經測出，其中尿素酶基因有4個開放性讀框，分別是UreA.UreB.UreC和UreD。UreA和UreB編碼的多肽與尿素酶結構的兩個亞單位結構相當。幽門螺桿菌的尿素酶極為豐富，約含菌體蛋白的15%，活性相當于變形桿菌的400倍。尿素酶催化尿素水解形成“氨云”保護細菌在高酸環境下生存。此外，尚有VacA基因和CagA基因，分別編碼空泡毒素和細胞毒素相關蛋白。根據這兩種基因的表達情況，又將幽門螺桿菌菌株分成兩種主要類型：Ⅰ型含有CagA和VacA基因并表達兩種蛋白，Ⅱ型不含CagA基因，不表達兩種蛋白，尚有一些為中間表達型，即表達其中一種毒力因子。現在多認為Ⅰ型與胃疾病關系較為密切。幽門螺桿菌對臨床微生物實驗中常用于鑒定腸道細菌的大多數經典生化實驗不起反應。

Hp是一種世界范圍內廣泛分布的革蘭陰性桿菌，發達國家5%的人口是Hp亞臨床感染，發展中國家兒童Hp感染率甚至可達80%～90%^[4]。與Hp感染有關的研究也成為近幾年的熱點，Hp感染可引起IDA。但Hp感染的模型不易建立。

本實驗Hp感染組飼以清潔級飼料，缺鐵Hp感染組飼以低鐵飼料，兩組大鼠均飲去離子水。1個月后，兩組大鼠每周用Hp菌液1.5ml灌胃2次。3個月后，處死兩組大鼠，取出胃黏膜，觀察其形態有無異常，并做快速脲素酶試驗，觀察脲酶試紙的顏色變化。通過Hp感染缺鐵性貧血的Wistar大鼠，得出缺鐵性貧血的Wistar大鼠對Hp的易感性高于正常的Wistar大鼠。這可能與缺鐵使Wistar大鼠的抵抗力下降有關。本實驗一方面更好的驗證了IDA與Hp感染的關系，另一方面為建立Hp感染模型開辟了一條新途徑，在排除缺鐵性貧血的干擾因素后可用此方法建立簡易的Hp感染模型，從而進行更多的與此相關的研究。

參考文獻

1 Marignani M，Delle-Fave G，Mecarocci S，et al.High prevalence of atrophic body gastritis in patients with unexplained microcytic and macrocytic anemia:a prospective screening study［J］.Am J Gastroenterol，1999，94(3):766-767.

2 白賢女，徐全宇，呂建南，主編.幽門螺桿菌的研究與進展［J］.臨床誤診誤治，2004，17(2):83.

3 田婷，馮楠，胡曉梅，等.Wistar大鼠缺鐵性貧血模型的建立［J］.當代醫學，2011，17(35):41-42.

4 陳艷，肖政.幽門螺桿菌與中青年缺鐵性貧血關系的臨床研究［J］.臨床血液學雜志，2007，20(6):349-351.