應用雙試劑檢測HBsAg在兵檢中檢測結果分析

在征兵體檢中，我縣已多年應用雙試劑檢測HbsAg，結果令人滿意，大大地提高了征兵的質量，進一步杜絕了漏檢、退兵地現象。選擇兩家合格廠家生產的HbsAg試劑，對同一標本在同等條件下，嚴格按試劑盒說明書進行操作。現將最近3年內我縣適齡青年采用雙試劑檢測結果作淺顯分析。

資料與方法

征兵體檢抽血人數1059人。

試劑：上海榮盛生物技術有限公司；鄭州安圖綠科生物有限公司。

兩家公司的產品均采用ELISA法進行HBsAg檢測，嚴格按照試劑盒說明書操作。

實驗步驟：①取出一定量的包被孔，編號。留一孔做空白對照、其余加入陰性對照三孔和陽性對照二孔50μl/孔及待測標本50μl/孔于相應的反應孔內。②除空白孔以外，各孔分別加入酶結合物50μl(或1滴/孔)。③在微型振蕩器上振蕩30秒使孔內液體混合均勻(該步驟非常重要)。④貼上板貼，置37℃下溫育30分鐘。⑤撕下板貼，洗板：甩去孔內液體，洗板6次，最后在吸水紙上拍干。⑥每孔加入底物液、顯色劑各50μl(或1滴/孔)，37℃避光溫育10分鐘。⑦加終止液50μl/孔(或1滴/孔)。輕輕振蕩混勻后，立即測試結果。⑧使用酶標儀測量：單波長測定，以空白孔調零，450nm測定各孔的OD值；直接采用450nm/(620～630nm)雙波長測定各孔的OD值。

結 果

兩家公司的產品均采用ELISA法進行HBsAg檢測。

討 論

對照表表明，如果單用上海榮盛生產的試劑盒，漏檢率1.04%，如果單用鄭州安圖綠科生產的試劑盒，漏檢率0.85%。

采用雙試劑對同一樣本進行檢測，可使漏檢率大大減低，從而大大提高了兵檢的質量。

針對兩組存在的差異，本文認為是由于試劑本身存在包被抗原的組成、長短、合成方式等方面的不同及使用單克匹配位點的不同，或試劑盒的生產工藝、保存、運輸等環節的差異也會影響其質量，加之不同地區、人群的流行感染株的差異及感染者體內抗體模式的多樣化及標本自身因素存在干擾因子(內源性物質和外源性物質)等因素的影響，另外試劑采用的方法學本身差異、操作因素的影響等等，有時就會出現極個別的標本在不同的試劑間有不同的結果；甚至同一標本在不同時間檢測結果亦不一致的情況。

檢測抗原時，病毒基因突變造成不同突變體之間存在著抗原性的差異出現結果不一。有研究結果表明［1］，在新加坡，乙肝病毒由于氨基酸145位置上Gly替待Arg是一種經常的病毒突變，盡管母親為HBsAg和HBeAg陽性時出生的新生兒進行了多克隆乙肝免疫球蛋白和乙肝疫苗的注射，但仍會感染乙肝病毒。HBV突變病毒基于改變膜蛋白的抗原簇顯示HBV不為先前認為的抗原單一性，并且抗體逃避性變異能在體內發生，所以這種逃避性變異可能不為現有單克隆試劑檢測。因此，用不同的HBsAg酶聯免疫(EIA)試劑檢測同一血清，其結果有可能截然不同，當然這樣的情況出現的幾率很低。目前此種情況很難避免，因為這些鑒別確認實驗只能在部分實驗室開展檢測，而且費用較高不易普及。

檢測試劑方法學本身不同造成靈敏度、特異性不同的出現。有報道［2］，用MEIA法有效檢測低水平HBsAg(ELISA檢測陰性標本)研究中ELISA檢測HBsAg約有1.58%大的假陰性率，并且對于ELISA顯色較弱者存在一定假陽性(可能與污染等因素有關)ELISA檢測血清HbsAg濃度在5ng/ml以下的弱陽性者約有2.92%的假陽性率。

包被抗原的組成、時間長短、合成方式等方面的不同造成結果不同。

標本自身因素存在干擾因子，內源性物質和外源性物質也在一定程度上干擾檢測結果。Boscato等(1986)指出，大約40%的人血清標本種含有非特異性干擾物質影響到檢測結果。如：溶血標本對非特異性因素的結果也有影響［3］。溶血嚴重程度對非特異性反應的影響明顯，溶血越嚴重引起假陽性反應越強烈。另外，離心方式和放置時間對非特異性反應也有影響［4］，離心轉速越高、時間越長、離心越徹底，消除非特異性反應的效果越好，假陽性率越低。反之，假陽性反應越明顯。

操作因素的影響造成結果前后不一［5］。ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體檢測。但ELISA測定影響因素較多。而且操作中有一定的技術要求，在臨床檢驗中除正常反應外，有時常可見到一些錯誤結果(即假陰性或假陽性結果)是由操作不當造成的，這應該引起重視。

參考文獻

1 酶聯免疫測定的干擾因素和對策.

2 酶免法檢測HbsAg假陽性原因分析.

3 蔣藝勤.酶免法檢測HbsAg假陽性原因分析［J］.四川生理科學雜志，2006，28(4):181-182.

4 王卉，任健民.酶免法檢測HbsAg假陽性原因探討［J］.實用醫技雜志，2002，9(1):15-16.

5 加樣時間對ELISA快速一步法檢測乙型肝炎標志物的影響.