針藥并用對脾虛證大鼠血清甲狀腺激素水平的影響

劉亞麗,楊麗娟,晉志高,王曉寧

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針藥并用對脾虛證大鼠血清甲狀腺激素水平的影響

劉亞麗,楊麗娟,晉志高,王曉寧

(煤炭總醫院,北京 100028)

觀察脾虛證大鼠血清甲狀腺激素水平的改變及針刺配合西洋參湯對其改變的影響。將40只wistar大鼠隨機分為正常對照組、模型組、西洋參組、針藥并用組,每組10只。模型組、西洋參組、針藥并用組用偏食法建立脾虛證動物模型。造模成功后,模型組用生理鹽水1 mL/100 g體重灌胃;西洋參組給予西洋參湯1 mL/100 g灌胃;針藥并用組采用針刺雙側足三里、三陰交,并給予西洋參湯1 mL/100 g灌胃。以上治療均為每日1次,治療10 d。第11天處死4組動物,取樣做測定血清三碘甲狀腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)、反三碘甲狀腺原氨酸(rT3)、促甲狀腺素(TSH)含量,并測量各組動物造模前后體重,胸腺、脾臟質量。模型組大鼠造模后體重、胸腺質量/體重、脾臟質量/體重比及血清T3、T4含量顯著下降,與正常對照組比較,差異均具有統計學意義(＜0.05,＜0.01)。西洋參組與針藥并用組大鼠胸腺質量/體重及T3、T4含量較模型組有顯著提高(均＜0.01);針藥并用組大鼠體重和脾臟質量/體重與模型組比較,差異均具有統計學意義(＜0.05)。針藥并用能改善脾虛證大鼠的脾虛癥狀,其作用機理與調節甲狀腺激素水平有關。

針刺療法;針藥并用;西洋參;甲狀腺激素;大鼠

現代研究發現,脾虛證見于臨床諸多疾病,消化、內分泌、神經、免疫系統的疾病均可由脾虛引起[1]。脾虛證患者及動物模型中,有不同程度的神經內分泌和免疫學指標改變,機體免疫狀態低下,提示脾虛證與神經內分泌免疫調節環路有一定聯系[2]。本實驗采用偏食法建造中醫脾虛動物模型,通過觀察各組動物血清甲狀腺激素水平的變化,探討針藥并用對脾虛證大鼠神經內分泌免疫方面的影響,以期為脾虛證治療提供新的實驗依據,現報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

普通級2月齡wistar大鼠40只,由中國中醫科學院醫學動物中心提供,雌雄各半,體重為(200±20)g。動物室為開放式、標準實驗室,溫度、照明、噪聲、換氣均控制在規定范圍內,普通飼料喂養,自由飲水。

1.2 主要試劑及儀器

西洋參購自北京同仁堂藥店。取西洋參300 g,冷水浸泡1 h,在武火煎煮15 min后文火煮30 min,取出頭煎液,再加冷水同上方法煎煮為2煎。取全部水煎液混勻過濾后,于60℃水浴濃縮至300 mL,為西洋參湯,生藥含量為1 g/mL,置于冰箱內保存。血清三碘甲狀腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)、反三碘甲狀腺原氨酸(rT3)、促甲狀腺素(TSH)放射免疫試劑盒均由北京科美東雅生物技術有限公司提供。SN-695B型智能放射免疫測量儀由上海原子核研究所日環儀器一廠生產。

1.3 造模方法

正常對照組10只動物生理鹽水灌胃,每日1次,每次1 mL/100 g體重,共10 d,第11天處死動物。其余30只動物采用彭成等[3]方法造模,50%醫用乙醇1 mL /100 g體重,山西白醋(pH=3)1 mL/100 g體重,誘發脾氣虛大鼠模型。于實驗第1天用50%白酒1 mL/100 g體重灌胃,第2天后每天用山西白醋1 mL/100 g體重灌胃,共10 d。第11天停止造模。

造模成功后將動物隨機分為3組。模型組10只,改用生理鹽水1 mL/100 g體重灌胃,每日1次,共10 d;針藥并用組10只,針刺雙側足三里、三陰交,取穴參照《實驗針灸學》,選用0.30 mm×40 mm毫針,針刺深度為0.2～0.3 cm,采用平補平瀉法捻轉行針1 min,留針20 min,再給予西洋參湯1 mL/100 g體重灌胃,每日1次,共10 d;西洋參組10只,給予西洋參湯1 mL/100 g體重灌胃,每日1次,共10 d。第11天處死3組動物,取樣做各種檢查。

1.4 觀察指標及方法

各組動物于最后1次給藥后16 h眼球取血,觀察各組大鼠血清中T3、T4、rT3、TSH水平的變化。采用放射免疫分析法,嚴格按試劑盒說明書要求并由專人進行操作,所有樣品一次完成實驗。同時測量各組動物實驗前后體重、胸腺和脾臟質量。

1.5 統計學方法

采用SPSS13.0統計軟件進行處理,數據以均數±標準差表示,組間比較采用單因素方差分析,進一步兩兩比較,采用檢驗,以＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 針藥并用對實驗性脾虛證大鼠體重及臟器指數的影響

由表1可見,實驗前各組大鼠體重比較,差異均無統計學意義(＞0.05);模型組大鼠實驗結束后體重減輕,與正常對照組比較,差異具有統計學意義(＜0.05)。經針刺和灌服西洋參后,西洋參組大鼠體重比模型組略有升高,但差異無統計學意義(＞0.05);針藥并用組大鼠體重升高,與模型組和西洋參組比較,差異均具有統計學意義(＜0.05)。

表1 各組動物實驗前后體重比較 (±s,g)

注:與正常對照組比較1)＜0.05;與針藥并用組比較2)＜0.05

由表2可見,模型組大鼠胸腺質量/體重、脾臟質量/體重與正常對照組比較,差異均具有統計學意義(＜0.05)。經針刺和灌服西洋參后,西洋參組和針藥并用組胸腺質量/體重均升高,與模型組比較,差異均具有統計學意義(＜0.05)。西洋參組、針藥并用組及正常對照組3組間比較,差異均無統計學意義(＞0.05)。針藥并用組大鼠脾臟質量/體重升高,與模型組和西洋參組比較,差異均具有統計學意義(＜0.05)。

表2 各組大鼠臟器質量/體重比較 (±s,mg/g)

注:與正常對照組比較1)＜0.05;與模型組比較2)＜0.05;與針藥并用組比較3)＜0.05

2.2 針藥并用對實驗性脾虛證大鼠血清甲狀腺激素水平的影響

由表3可見,模型組大鼠血清T3、T4含量較正常對照組顯著降低(均＜0.01)。經針刺和灌服西洋參后,西洋參組和針藥并用組血清T3、T4含量均比模型組提高(均＜0.01)。西洋參組、針藥并用組及正常對照組3組間血清T3、T4含量比較,差異均無統計學意義(＞0.05)。

表3 各組動物血清甲狀腺激素含量比較 (n=10)(±s)

注:與正常對照組比較1)＜0.01;與模型組比較2)＜0.01

3 討論

本實驗采用偏食法(先食酒后食醋)建立脾虛證動物模型。從食醋第3天起,動物逐漸出現脾虛證表現,如體重減輕、食量減少、消瘦、腹瀉、體溫下降、耐寒力差、拱背、不好動、毛發松散、脫肛、自由活動度減少等,按中醫學進行辨證可以判定模型動物為脾虛證。經針刺和灌服西洋參后,西洋參組和針藥并用組大鼠體重增加、食量增加、耐寒力改善、毛發正常、自由活動度增強,顯示針刺和灌服西洋參可改善脾虛癥狀。

甲狀腺是機體重要的內分泌腺體之一,它通過分泌甲狀腺激素影響和調節機體細胞的生長、發育和能量代謝活動。T3、T4是甲狀腺細胞分泌的一組維持機體代謝、促進生長發育和神經系統分化成熟的重要激素,也是反映甲狀腺功能的重要指標。甲狀腺與胃腸道在胚胎期都起源于原始前腸,在正常情況下,消化系統對甲狀腺外周代謝起著重要作用;同時,甲狀腺也能促進消化系統吸收功能,故甲狀腺激素與消化系統功能的關系密切[4]。在病理狀態時,脾虛患者吸收功能下降,糖攝入不足,5'-脫碘酶活性減低,結果T4向T3轉化減少,同時T3吸收也減少,這可能是脾虛患者血清甲狀腺激素水平下降的原因之一[5]。而胸腺和脾臟都是淋巴器官,與甲狀腺關系密切,T3、T4是參與機體細胞的生長、發育和能量代謝的重要激素之一,T3、T4的持續降低會減少體內物質吸收,從而使得能量代謝降低,通過免疫-神經-內分泌之間復雜的相互作用,機體的免疫、代謝功能下降,進一步影響到胸腺、脾臟的物質吸收和代謝,最終使胸腺質量/體重、脾臟質量/體重降低。本研究中,脾虛模型組動物血清T3、T4含量均比正常對照組顯著下降(均＜0.01),與陳芝喜等[6]報道的結果相符。

足三里穴屬胃經,三陰交穴屬脾經,脾胃互為表里,兩穴配伍可以治療許多消化系統疾病。針刺兩穴可影響神經-內分泌-免疫系統,以提高機體免疫功能[7],但其治療機制尚未系統闡明。西洋參味苦、性涼,入心、肺、腎經,功能滋陰降火、益氣生津。中醫學認為,腎為先天之本,對免疫系統發揮主導作用,能維持和調整免疫平衡及其穩定。現代藥理研究表明,西洋參具有增強免疫、抗腫瘤、抗炎抗病毒、抗誘變作用[8]。

陳芝喜等[6]認為甲狀腺激素可以與下丘腦-垂體-甲狀腺-胸腺軸進而與整個環路發生聯系,刺激細胞因子的分泌,以增強機體的免疫功能。本實驗中脾虛模型組血清T3、T4水平下降明顯,說明脾虛證動物有甲狀腺代謝和功能失調,進一步降低整個機體的代謝和免疫功能。而西洋參組和針藥并用組較模型組胸腺質量/體重、T3、T4均明顯增加,說明針刺和灌服西洋參可以增強機體吸收能力,通過調節動物的免疫-內分泌系統,促進機體細胞的生長、發育和能量代謝,使T3、T4的吸收和轉化增加,最終血清中T3、T4的含量升高明顯。甲狀腺激素與受體結合后,通過調節基因表達,合成蛋白質和酶產生生物效應。胸腺是機體的重要淋巴器官,其功能與免疫緊密相關,分泌胸腺激素及激素類物質,胸腺細胞存在甲狀腺激素受體,與甲狀腺激素結合后,促進胸腺因子的分泌,提高機體胸腺依賴性免疫功能[9]。針刺和灌服西洋參可以通過調節動物的丘腦-垂體-甲狀腺-胸腺內分泌環,提高動物機體的代謝和免疫水平,使胸腺質量/體重增加。這些是中醫學“脾主運化”理論在實驗研究中的客觀體現。

針藥并用組試驗后體重和脾臟質量/體重較模型組顯著提高(＜0.05),而西洋參組試驗后體重和脾臟質量/體重較模型組無統計學差異(＞0.05),可能與針刺和灌服西洋參的疊加作用有關。這需在以后的研究中進一步證實,也為以后其他相關實驗提供有限參考。

綜上所述,針藥并用組和西洋參組的胸腺質量/體重及血清T3、T4水平與模型組比較均升高,同時針藥并用組試驗后體重和脾臟質量/體重較模型組顯著提高,提示針刺足三里、三陰交穴結合西洋參湯和單獨服用西洋參湯具有下丘腦-垂體-甲狀腺軸多層次的調節作用,對脾虛證和脾虛證引起的代謝免疫低下,有顯著的治療作用,為脾虛證的研究提供了理論依據。

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[3］ 彭成,羅光宇.脾氣虛脾不統血證候動物模型的研究思路[J].中醫雜志,1996,(4):241-242.

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[6] 陳芝喜,劉小斌,周名璐,等.健脾補腎藥對脾虛大鼠細胞因子水平的影響[J].放射免疫學雜志,2003,16(4):217-219.

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Effect of Combined Acupuncture and Medicine on Serum Thyroid Hormone in Rats with Spleen Deficiency Syndrome

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,100028,

To observe changes in serum thyroid hormone levels and the effect of acupuncture plus American ginseng decoction on the changes in rats with spleen deficiency syndrome.Forty Wister rats were randomly allocated to normal, model, American ginseng and combined acupuncture and medicine groups, 10 rats each. An animal model of spleen deficiency syndrome was made by dietary bias in the model, American ginseng and combined acupuncture and medicine groups. After successful model making, the model group received an oral gavage of normal saline 1 ml/100 g; the American ginseng group, an oral gavage of American ginseng decoction 1 ml/100 g; the combined acupuncture and medicine group, acupuncture at bilateral points Zusanli and Sanyinjiao plus an oral gavage of American ginseng decoction 1 ml/100 g. The above treatments were given once daily for 10 days. The four groups of rats were sacrificed at 11 days. Samples were taken for the measurement of serum triiodothyronine (T3), thyroxine (T4), reverse triiodothyronine (rT3) and thyroid stimulating hormone (TSH) contents. Body, spleen and thymus weights were also measured in every group of rats before after model making.Body weight, thymus weight/body weight and spleen weight/body weight, and serum T3and T4contents decreased markedly in the model group of rats after model making. There were statistically significant differences compared with the normal group (＜0.05,＜0.01). Thymus weight/body weight, and serum T3and T4contents increased significantly in the American ginseng and combined acupuncture and medicine groups of rats compared with the model group (all＜0.01). There were statistically significant differences in body weight and spleen weight/body weight between the combined acupuncture and medicine group and the model group (＜0.05).The combined use of acupuncture and medicine can relieve the symptoms of spleen deficiency in rats with spleen deficiency syndrome. The mechanism of its action is related to regulating thyroid hormone levels.

Acupuncture therapy; Combined use of acupuncture and medicine; American ginseng; Thyroid hormones; Rats

R2-03

A

10.3969/j.issn.1005-0957.2012.11.844

1005-0957(2012)11-0844-03

國家自然科學基金(30572416)

劉亞麗(1975 - ),女,主治醫師

2012-03-03