氧化應激在阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征與腦梗死中的作用分析

董曉瑩，李東芳

國外流行病學研究顯示，阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征 （OSAHS）患者腦血管病的發病率是40%～8 6%［1］，且OSAHS是高血壓病、冠心病、心肌梗死、肺心病及腦卒中等發病的獨立危險因素［2］。它具有起病隱匿、發病率高、潛在危險大等特點，主要死因為心腦血管并發癥［3］，所以二級預防極為重要。但對于OSAHS導致腦梗死發生的作用機制仍不十分清楚。因此，進一步明確OSAHS在腦梗死發病中的作用機制，為早期預防其導致腦梗死的發生及進展是目前迫切需要解決的關鍵問題。本課題通過病例對照研究探討氧化應激在OSAHS引起動脈粥樣硬化和腦梗死中的作用機制，為OSAHS患者合并腦梗死的臨床治療及預防提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2010年10月—2011年12月就診于我院的住院患者中選取腦梗死患者20例、OSAHS患者20例、腦梗死＋OSAHS患者20例作為病例組，在體檢中心選取同一時期的健康體檢者20名作為對照組。入組標準：腦梗死患者均符合1995年全國第四屆腦血管病學術會議制定的診斷標準，并通過頸動脈超聲、顱多普勒超聲（TCD）、頭顱核磁及磁共振血管造影（MRA）證實為大動脈粥樣硬化性腦梗死。OSAHS患者均符合中華醫學會呼吸病學分會睡眠呼吸疾病學組制定的診斷標準，即臨床上有典型的夜間睡眠時打鼾及呼吸不規律，白天過度嗜睡，經多導睡眠圖監測提示每夜7h睡眠過程中呼吸暫停及低通氣反復發作在30次以上，或睡眠呼吸暫停低通氣指數（AHI）≥5次／h。排除標準：存在下列情況之一者：合并冠心病、心房纖顫、心肌梗死、肝腎功能不全；合并慢性感染性疾病、自身免疫性疾病、應用炎癥抑制藥物、免疫抑制劑以及小動脈病變性腦梗死等其他類型腦梗死。并收集臨床資料：年齡、性別、吸煙、飲酒、體重指數（BMI）、合并高血壓、2型糖尿病、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）。血清HDL＞5.7mmol／L為高膽固醇血癥，血清LDL＞3.12mmol／L為高低密度脂蛋白血癥。所有研究對象均為山西省太原市無血緣關系的漢族自然人，并均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 頸動脈內膜中層厚度（IMT）的測定及判斷 檢測儀器：選用飛利浦IU22彩色多普勒超聲儀，探頭頻率為3MHz～9 MHz。檢測方法：患者取平臥頭仰位，雙肩墊枕，使頸部充分顯露，探頭置于頸部下頜角后方縱行向側后方向逐漸移動，二維觀察血管走向、管腔內徑、管壁厚度、有無斑塊等情況。測量指標：頸動脈IMT。判斷標準：IMT＜1.0mm為正常，1.0mm≤IMT＜1.2mm為內膜增厚，IMT≥1.2mm為斑塊形成。病例組患者超聲檢查均在入院一周內，對照組于體檢當日由本院超聲室固定醫師檢測完成。

1.2.2 睡眠多導圖監測 監測儀器：為美國Tyco公司生產的Sandman Elite型64導睡眠診療系統及澳大利亞生產的Compumedics E－型44導數據采集系統。監測指標：AHI、夜間最低血氧飽和度、平均血氧飽和度、氧飽和度＜90%的時間所占的百分比。病例組患者均于入院一周內，對照組于體檢一周內在我院睡眠監測中心行多導睡眠圖監測。

1.2.3 標本采集 所有受試者在知情情況下，自愿參與試驗。在睡眠監測檢查的第2天清晨空腹抽取肘靜脈血2mL，室溫凝固30min后離心（1 000r／min×15min），取上清液分裝后置于－70℃冰箱內保存備用。本實驗所有試劑均由上海西唐生物科技有限公司提供；所用儀器有SPX－250B－D型振蕩培養箱、SPR－980自動酶標分析儀。

1.2.4 血清15－F2t－異前列烷的測定

1.2.4.1 準備試劑 標準品液配制：使用前加入1mL蒸餾水混勻，配成20ng／mL的溶液。設標準管8管，第1管加標本稀釋液900μL，第2管至第8管加入標本稀釋液500μL。在第1管中加入20ng／mL的標準品溶液100μL混勻后用加樣器吸出500μL，移至第2管。如此反復作對倍稀釋，從第7管中吸出500μL棄去。第8管為空白對照。10×標本稀釋液用蒸餾水作1∶10倍稀釋。洗滌液用重蒸餾水1∶20稀釋。

1.2.4.2 檢測程序 加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100 μL，將反應板充分混勻后置37℃120min；洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4次～6次，向濾紙上印干；每孔中加入第一抗體工作液100μL。將反應板充分混勻后置37℃60min；洗板：同前；每孔加酶標抗體工作液100μL，將反應板置37℃30min；洗板：同前；每孔加入底物工作液100μL，置37℃暗處反應15 min；每孔加入100μL終止液混勻；30min內用酶標儀在450 nm處測吸光值。

1.2.4.3 結果計算與判定 所有OD值都應減除空白值后再行計算。以標準品2 000pg／mL、1 000pg／mL、500pg／mL、250 pg／mL、125pg／mL、62.5pg／mL、31.2pg／mL、0pg／mL為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上作圖，畫出標準曲線。根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應15－F2t－異前列烷含量。

1.3 統計學處理 采用SPSS17.0統計軟件處理數據。定量資料用均數±標準差（x±s）表示；定性資料用頻數表示。4組中定量資料的比較采用單因素方差分析，定性資料的比較采用卡方檢驗，組間兩兩比較采用LSD法分析，15－F2t－異前列烷和IMT之間的相關性在各組中以散點圖形式描述。

2 結 果

2.1 病例組與對照組一般資料比較 4組TC、LDL水平差異有統計學意義（F＝3.510、2.822，P＜0.05）；年齡、性別、吸煙、飲酒、BMI、合并高血壓、2型糖尿病、TG、HDL在各組中差異無統計學意義（P＞0.05）。詳見表1。

表1 病例組與對照組一般資料比較

2.2 15－F2t－異前列烷和IMT檢測結果 4組的15－F2t－異前列烷和IMT差異有統計學意義（P＜0.05）。因研究對象各組中TC和LDL亦有統計學意義，用協方差分析扣除TC、LDL因素的影響后再次分析所研究變量。對15－F2t－異前列烷進行統計分析顯示F＝153.142，P＜0.001，說明在扣除TC、LDL因素的影響后，4組的總體15－F2t－異前列烷均數有差別， 組 間比較除腦梗死組和OSAHS組的差異無統計學意義外（P＝0.384），其余各組間差異有統計學意義（P＜0.05）。對IMT進行統計分析顯示F＝183.056，P＜0.001，說明在扣除TC、LDL因素的影響后，4組的總體IMT均數有差別，組間比較除腦梗死組和OSAHS組的差異無統計學意義外（P＝0.466），其余各組間差異均有統計學意義（P＜0.05）。兩變量的總體均數在腦梗死＋OSAHS組中均最大，在對照組中均最小，腦梗死組和OSAHS組居中。詳見表2。

表2 各組15－F2t－異前列烷和IMT檢測結果（x±s）

2.3 15－F2t－異前列烷和IMT的相關性 在各組中分別以15－F2t－異前列烷為橫坐標，以IMT為縱坐標，用散點圖描述兩者的相關性。可見在病例組中兩者存在線性關系，而在對照組中無相關性，在病例組中的相關性以腦梗死＋OSAHS組中最明顯，呈直線相關。對照組：r＝－0.046，P＝0.847；腦梗死組：r＝0.460，P＝0.041；OSAHS組：r＝0.482，P＝0.032；腦梗死＋OSAHS組：r＝0.685，P＜0.001。

3 討 論

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征是腦梗死明確的獨立危險因素，動脈粥樣硬化是OSAHS發生心腦血管病的始發因素和基本病因，氧化應激在動脈粥樣硬化的發生發展中起重要作用。OSAHS患者典型的慢性間歇低氧所導致的低氧血癥和高碳酸血癥極易促進動脈粥樣硬化的形成。而關于OSAHS導致腦梗死的機制方面研究仍不十分明確。

本實驗應用協方差分析扣除TC和LDL的影響，通過檢測對照組、腦梗死組、OSAHS組、腦梗死＋OSAHS組15－F2t－異前列烷和IMT的差別，結果發現，15－F2t－異前列烷和IMT在4組中差別有統計學意義（P＜0.001）。在各組中以散點圖描述15－F2t－異前列烷與IMT的關系，可知兩者在病例組中呈正相關，在腦梗死＋OSAHS組中直線相關較為明顯。這與Denis等［4］在2010年關于15－F2t－異前列烷和IMT關系的研究相類似。氧化應激導致動脈粥樣硬化的可能機制如下：氧化應激可引起血漿中C反應蛋白（CRP）、瘦素、白介素（IL）－1β、IL－6、IL－8、腫瘤壞死因子（TNF－α）及黏附分子等炎癥因子水平明顯升高，產生系統性炎癥反應，為動脈粥樣硬化的形成提供了充分的條件［5，6］。氧化應激產生的活性氧（ROS）損傷內皮細胞是動脈粥樣硬化發生的啟動步驟［7］。氧化應激形成的脂質過氧化物的增加可導致血漿黏度增高、血小板聚集和血栓形成，促進動脈粥樣硬化發生［8，9］。氧化應激狀態下，LDL氧化修飾為氧化型低密度脂蛋白（ox－LDL），并通過多種途徑啟動和促進動脈粥樣硬化的發生、發展，最終導致粥樣斑塊破裂，引發惡性心腦血管事件。

在OSAHS患者導致腦梗死發病的過程中，氧化應激水平增高導致頸動脈內膜增厚，頸動脈硬化程度增強，進而導致腦梗死發病率上升可能是其重要的作用機制之一，故在臨床診療中應積極對OSAHS患者進行二級預防，延緩其進展至腦梗死。

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