桂枝芍藥知母湯拆方的正交t值法實驗研究※

楊 鑫李忠汗俞晶華汪 悅*

桂枝芍藥知母湯拆方的正交t值法實驗研究※

楊 鑫1李忠汗2俞晶華1汪 悅1*

（1江蘇省南京中醫藥大學第一臨床醫學院，南京210029；2江蘇省南京中醫藥大學第二臨床醫學院，南京210029）

桂枝芍藥知母湯為治療類風濕關節炎的經方，長期以來廣泛應用于臨床，收效良好。為進一步探究方中起主要作用的藥物，筆者采用正交t值法從抗炎、鎮痛兩方面藥理作用綜合考慮，進行了初步的處方篩選。實驗結果表明：白芍、麻黃、制附子、炙甘草為方中主藥。

桂枝芍藥知母湯；正交t值法；抗炎；鎮痛；拆方

桂枝芍藥知母湯，原方出自《金匱要略?中風歷節病脈證并治》篇，主治風濕歷節，方由桂枝、白芍、知母、防風、炙甘草、麻黃、制附子、生姜、白術9味中藥組成，臨床廣泛應用于治療類風濕關節炎，取得良好療效。為了尋找復方中起主要作用的藥物，我們將9味中藥作為處理因素，采用正交t值法[1]從抗炎、鎮痛兩方面藥理作用綜合考慮，進行了初步的處方篩選。

1 資料與方法

1.1 實驗動物 昆明種小鼠240只，（20±2）g，♀♂各半，由南京中醫藥大學實驗動物中心提供，動物使用合格證：SYXK（蘇）2007-0030。

1.2 藥物分組及制備方法 中藥：第1組：桂枝12g，白芍9g，知母12g，防風12g，炙甘草6g，麻黃6g，制附子10g，生姜15g，白術15g；第2組：桂枝12g，生姜15g，制附子10g；第3組：知母12g，麻黃6g，白術15g；第4組：白芍9g，防風12g，麻黃6g，生姜15g；第5組：知母12g，防風12g，炙甘草6g，制附子10g；第6組：桂枝12g，白芍9g，炙甘草6g，白術15g；第7組：桂枝12g，防風12g，麻黃6g，甘草6g；第8組：白芍9g，防風12g，白術15g，附子10g；第9組：白芍9g，知母12g，甘草6g，生姜15g；第10組：桂枝12g，白芍9g，知母12g，麻黃6g，附子10g；第11組：桂枝12g，知母12g，防風12g，白術15g，生姜15g；第12組：麻黃6g，甘草6g，白術15g，生姜15g，附子10g。中藥購自南京中醫藥大學百草堂門診部，劑量參照方劑大辭典。各組藥物分別以蒸餾水浸泡1h，旺火煮沸后，文火煎1h，保溫2h，濾液并濃縮，配制至濃度為2g?mL-1，由南京中醫藥大學第一臨床醫學院實驗中心配制。

1.3 實驗試劑 冰醋酸，上海化學試劑有限公司，批號：0304101。二甲苯，南京化學試劑廠，批號：990306。

1.4 實驗儀器 電子天平，上海天平儀器廠。

1.5 實驗方法

1.5.1 正交t值法 按照表1，每味藥取兩個水平，即1水平為用藥，2水平為不用藥，分成12組（詳細分組見藥物與制備方法），分別將其抗炎及鎮痛作用結果進行加權綜合評分（抗炎權數為0.6，鎮痛權數為0.4)，計算t值，篩選出最為有效的抗炎鎮痛組合。

1.5.2 對小鼠鎮痛作用的影響（醋酸扭體法） 按文獻[2]方法，取（20±2）g昆明種小鼠，120只，隨機分為12組，每組♀♂各半。各組按20mL?kg-1灌胃給藥，連續給藥5d，末次給藥后30min腹腔注射0.5%冰醋酸0.2mL/只，觀察10min內每組小鼠扭體反應出現的次數，取其平均扭體次數。數值越小表示鎮痛作用越強。

1.5.3 對小鼠抗炎作用的影響（二甲苯誘發小鼠耳腫脹法） 分組方法同上，各組按20mL?kg-1灌胃給藥，連續給藥5d，末次給藥后1h，于一側耳殼正反兩面均勻涂抹二甲苯，0.1mL/只，1h后處死小鼠，沿耳廓基線剪下兩耳，于同一部位用打孔器沖下耳片(直徑8～9mm)，稱重，計算兩耳片重量之差為腫脹度。數值越小表示抗炎作用越強。

2 結果

見表1。根據表1，白芍、防風、麻黃、炙甘草、白術、制附子的P值＜0.05，具有統計學意義，尤其是白芍、防風、麻黃、制附子的P值＜0.01，在統計學上有顯著性意義，具有肯定的抗炎鎮痛作用。防風、白術M2＜M1，D值為負值，其可能對抗炎鎮痛作用的表達具有負面效應。桂枝、知母、生姜P＞0.05，不具有統計學意義，其作用不確定。

3 討論

類風濕關節炎屬中醫“歷節病”、“痹證”等范疇。病程日久，本虛標實，常表現為全身虛寒而局部有熱的寒熱錯雜癥候。桂枝芍藥知母湯溫陽祛濕與滋陰清熱并用，對類風濕關節炎寒熱錯雜證較為適合。本實驗結果表明：白芍、麻黃、制附子、炙甘草具有肯定的抗炎鎮痛作用，是方中起主要作用的藥物。

表1 各族抗炎鎮痛作用

中醫認為，麻黃、附子溫經散寒止痛，白芍斂陰榮脈、緩急止痛，甘草甘緩和中，“溫”、“和”、“緩”三管齊下，效力尤佳。頗多現代藥理研究亦為佐證：麻黃作為對疼痛有效的代表性藥物，對體表及運動器官的疼痛有特異性[3]。白芍對大鼠膠原性關節炎有明顯抑制作用，其機制可能是與降低血清白介素-1β和血管內皮生長因子的水平、誘導炎性細胞因子網絡趨于平衡有關[4]。制附子可能通過降低血清NOI、L-1β水平從而調控相關細胞因子的表達從而起到抗炎和消除關節腫脹的作用，改善滑膜組織病理學變化[5]。甘草中含有的甘草酸除具有抗炎、鎮咳、抗癌作用等作用外，還能誘導小鼠肝微粒體氧化酶，使其含量及活性增加，誘導其自身代謝，對免疫具有調節作用[6]。

實驗結果還表明：防風、白術二者的存在對全方抗炎鎮痛作用的表達起反作用，而桂枝、生姜、知母并未表現出明顯的抗炎鎮痛作用。中醫認為，防風祛風勝濕，白術健脾益氣，生姜解表溫中，知母清熱潤燥，這些藥物也無直接止痛之作用。桂枝一藥具有溫通經脈，散寒止痛的功效，自古為治療各類痹證之要藥，頗多經方亦把桂枝納為君臣，如黃芪桂枝五物湯、烏頭桂枝湯、桂枝附子湯等。亦有相關實驗數據支持證明：桂枝揮發油有明顯的抗炎作用[8]；桂枝對熱致痛小鼠可明顯延長其痛閾時間，對小鼠醋酸所致的疼痛，有顯著的拮抗作用[9]。然而本實驗并未體現出桂枝在抗炎鎮痛方面的優勢，同樣的結果亦見于痹痛靈拆方的正交t值法實驗研究[10]。陳麗平[11]實驗發現，桂枝抗炎作用較弱，但與白芍配伍后，抗炎作用顯著增強。即兩個藥物配伍具有協同作用。現代中藥學在闡述桂枝功效時亦多不直接指出其有止痛作用，只是通過配伍才產生止痛效應[12]。

據文獻記載[7]，桂枝芍藥知母湯治療類風濕關節炎的機理并不僅僅為抗炎鎮痛，其亦可通過抑制大鼠棉球肉芽腫組織增生，降低小鼠腹腔毛細血管通透性，抑制AA大鼠原發性足腫脹及繼發性關節炎等途徑緩解病情。因此，上述未表現出抗炎鎮痛作用的藥物或許可以通過其他途徑而發揮療效，我們并不能因此否定其在治療類風濕關節炎中的意義。

有學者指出[13]，拆方研究眾多數學設計模式用于中藥復方研究的最大不足之處是與中醫藥理論脫節，不能清楚地闡述中藥復方作用的物質基礎及作用原理。而且拆方實驗藥味多、步驟雜、數據繁，可能過程中會有一些誤差的產生。因此，我們并不能輕易否定某藥的作用，有關本實驗結果與中醫理論及臨床實踐的相符性及準確性，也有待進一步考察及證實。

我們今后將擴大樣本數量觀察實驗結果的重復性，還要從藥物間相互的配伍關系、劑量與療效的關系等進行深入研究分析，并進行藥效學和臨床觀察,做好新藥開發的前期研究。

[1] 李儀奎.中藥藥理實驗方法學[M].上海:上海科學技術出版社,1991:299.

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[3] 翁維良.臨床中藥學[M].鄭州:河南科學技術出版社,1998:181-629.

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[6] 劉仁俊.淺談甘草化學成分及藥理作用[J].中國中醫藥現代遠程教育, 2011,9(19):74.

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Orthogonal t Value Method to Guizhishaoyaozhimu Decoction Research

Yang Xin1Li Zhonghan2Yu Jinghua1Wang Yue1
(1 The First Clinical Medical College; Nanjing University of CM, Nanjing, 210029 China; 2 The Second Clinical Medical College; Nanjing University of CM, Nanjing, 210029 China)

Guizhishaoyaozhimu decoction is the classical prescription in the treatment of rheumatoid arthritis, which is widely used in clinic and receives curative effect. In order to further investigate the most important herbs in the prescription, we use orthogonal t value method to the initial screening from both the anti-inflammatory action and analgesic activity. The experiment results show that: white peony, ephedra, monkshood and licorice play the major role in the prescription.

Guizhishaoyaozhimu decoction; Orthogonal t value method; Anti-inflammatory; Analgesic

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.16.0113

1672-2779（2012）-16-0157-02

??蘇玲

2012-06-17）