17aα－D－高炔雌二醇－3－乙酯聯(lián)合化療抗腫瘤作用研究＊

北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所天津市分子核醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（天津300192）吳紅英 王月英 張 恒 李德冠 王小春 李 進(jìn) 杜利清 王 彥 褚麗萍 孟愛(ài)民

惡性腫瘤的治療主要包括手術(shù)及放、化療，而放、化療主要副作用是抑制免疫及造血功能。17aα－D－高炔雌二醇－3－乙酯（E838）是一種新型輻射防護(hù)劑。藥效學(xué)研究表明，E838小鼠的肝癌、肺癌等有明顯的抑制作用［1］。本實(shí)驗(yàn)按照國(guó)家一類(lèi)新藥報(bào)批要求［2］，通過(guò)建立人EC901食管癌荷瘤小鼠模型，探討單獨(dú)使用E838及聯(lián)合5－氟尿嘧啶藥物對(duì)食管癌是否具有抑瘤增效作用，為其用于治療腫瘤的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

材料與方法

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物和瘤株：裸鼠20只，8～12周齡，雄性，體重20～22g，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物所提供，許可證號(hào)：SCXK（2009－0004），EC901食管癌瘤株由天津醫(yī)科大學(xué)提供。

1.2 藥物：5－氟尿嘧啶注射液（5－Fu），由天津金耀氨基酸有限公司生產(chǎn)（批號(hào)為0904171），將5－Fu用生理鹽水配制成25mg／kg，E838制成7.5mg／kg。

1.3 儀 器：LM2235，Leica切 片 機(jī) （德 國(guó)），BX51，奧林巴斯顯微鏡（BX51日本），Sysmex poch－100i全自動(dòng)血液分析儀（日本）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 EC901荷瘤小鼠模型的建立：用生理鹽水調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1×107，取0.1ml接種于每只小鼠右側(cè)腋窩下。

2.2 分組及給藥：小鼠接種瘤細(xì)胞3d后，將其隨機(jī)分為對(duì)照組、5－Fu組、E838組、E838聯(lián)合5－Fu組，每組5只。E838組、E838聯(lián)合5－Fu組腹腔注射E838 0.2ml／只，1次／d，連續(xù)9d，5－Fu組及E838聯(lián)合5－Fu組，隔日1次腹腔注射5－Fu，0.2ml／只，共4次。

2.3 抑瘤率計(jì)算于實(shí)驗(yàn)第12天，將各組小鼠眼球采血，檢測(cè)血常規(guī)，處死小鼠后，剝?nèi)∧[瘤組織稱(chēng)重，計(jì)算抑瘤率。抑瘤率（%）＝（1－治療組平均瘤質(zhì)量／對(duì)照組平均瘤質(zhì)量）×100%。另取小鼠一側(cè)股骨，沖洗骨髓腔，收集骨髓細(xì)胞，用全自動(dòng)血液分析儀計(jì)數(shù)骨髓有核細(xì)胞數(shù)。

2.4 病理學(xué)觀察：取小鼠瘤組織，常規(guī)固定、脫水、石蠟包埋，切片。切片HE染色后用中性樹(shù)脂封片，用正置顯微鏡進(jìn)行組織學(xué)觀察并采集圖像。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組數(shù)據(jù)間用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 E838聯(lián)合化療對(duì)食管癌EC901抑瘤率的影響 E838組、5－Fu組及E838聯(lián)合5－Fu組對(duì)食管癌EC901的生長(zhǎng)均有抑制作用，抑瘤率分別為63.23%、56.32%和73.56%，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），E838聯(lián)合5－Fu組可顯著提高抑瘤作用，見(jiàn)表1。

表1 E838聯(lián)合化療對(duì)小鼠食管癌的抑制作用（ˉx±SD）

2 E838聯(lián)合化療對(duì)小鼠造血功能的影響 E838組、5－Fu組及E838聯(lián)合5－Fu組的骨髓細(xì)胞數(shù)均高于對(duì)照組，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），WBC、RBC、HGB數(shù)量均高于對(duì)照組，但與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表2。

表2 E838聯(lián)合化療荷瘤鼠外周血常規(guī)的影響（ˉx±SD）

3 病理學(xué)檢測(cè) HE染色結(jié)果顯示，對(duì)照組腫瘤形態(tài)不一，無(wú)包膜，與正常組織細(xì)胞無(wú)明顯界限，呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)。腫瘤細(xì)胞強(qiáng)嗜堿性藍(lán)染，呈典型的惡性特征，核漿比值增大，核異型明顯，中－低分化，見(jiàn)核分裂相，核仁可見(jiàn)（圖1）。17aα－D－高炔雌二醇－3－乙酯組腫瘤形態(tài)基本呈球形，腫瘤細(xì)胞呈索狀排列，瘤內(nèi)有片狀壞死，存在組織細(xì)胞肌化，腫瘤無(wú)包膜，與正常組織細(xì)胞界限明顯。核漿比值增大核分裂相少見(jiàn)，核仁少見(jiàn)（圖2）。E838聯(lián)合5－Fu組腫瘤形態(tài)不規(guī)則，腫瘤細(xì)胞異型性明顯，有包膜。腫瘤細(xì)胞藍(lán)染，瘤細(xì)胞大小形態(tài)不規(guī)則，有片狀壞死，核分裂相少見(jiàn)，核仁不明顯（圖3）。5－Fu組腫瘤形態(tài)規(guī)則，腫瘤細(xì)胞呈索狀排列，瘤內(nèi)有脂性空泡，與周?chē)M織邊界明顯。腫瘤細(xì)胞強(qiáng)嗜堿性藍(lán)染，瘤細(xì)胞大小形態(tài)較規(guī)則，核分裂像少見(jiàn)，偶見(jiàn)巨細(xì)胞（圖4）。

圖1 對(duì)照組

圖2 藥物組

圖3 藥物聯(lián)合化療組

圖4 化療組

討 論

化療是腫瘤治療的主要手段之一，但由化療藥物帶來(lái)的毒副作用如骨髓抑制、胃腸道反應(yīng)、免疫功能下降等，限制了化療藥物療效的進(jìn)一步提高，如何降低化療藥物的毒、副反應(yīng)，提高腫瘤患者的免疫功能［3，4］，并能增加腫瘤對(duì)化療藥物的敏感性，使用較低劑量的化療藥物也能充分發(fā)揮治療作用，日益成為國(guó)內(nèi)外專(zhuān)家學(xué)者努力的方向。近年來(lái)我們應(yīng)用17aα－D－高炔雌二醇－3－乙酯（E838）進(jìn)行的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究已證實(shí)：E838能顯著提高受照射小鼠30d存活率和保護(hù)指數(shù)［5～7］，具有提升白細(xì)胞的作用，毒副作用小。本實(shí)驗(yàn)利用荷瘤裸鼠腫瘤模型，觀察17aα－D－高炔雌二醇－3－乙酯單獨(dú)用藥及聯(lián)合化療藥物的抑瘤增效作用證明，E838能明顯抑制荷瘤小鼠EC901食管癌的生長(zhǎng)，當(dāng)E838與化療藥合用時(shí)可增強(qiáng)抑瘤效果，其抑瘤率高于化療藥組和單獨(dú)藥物組，抑制率比治療組升高28.13%、比化療藥組提高39.47%，提示E838聯(lián)合5－Fu抗移植瘤生長(zhǎng)具有一定增效作用。腫瘤患者的免疫功能不僅與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，而且對(duì)判斷患者治療效果和評(píng)估疾病預(yù)后有重要的參考價(jià)值。化療藥物可加重機(jī)體的免疫抑制，因此提高化療后的免疫功能非常重要。本研究顯示，E838能提高白細(xì)胞和骨髓有核細(xì)胞數(shù)量，說(shuō)明E838除對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)有抑制作用外，也有改善荷瘤小鼠造血功能的作用。這為E838在腫瘤化療中的應(yīng)用提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］ 吳紅英，王月英，李德冠，等.E838聯(lián)合γ射線(xiàn)對(duì)小鼠肝癌H22抑瘤作用的研究［J］.中國(guó)輻 射衛(wèi)生，2008，17（4）：387－389.

［2］ 衛(wèi)生部《新藥（西藥 ）臨床前研究指導(dǎo)原則匯編（藥學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué) ）》.1993：137.

［3］ 李墨林，李傳剛，舒曉宏，等.化療治愈荷瘤小鼠模型的建立及氟尿嘧啶抑瘤作用的免疫機(jī)制［J］.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2007，23（11）：1010－1013.

［4］ 于洪升，費(fèi)從合，沈方臻，等.低劑量輻射聯(lián)合環(huán)磷酰胺對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期以及骨髓增殖的影響的治療研究［J］.中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志，2004，24（2）：117－119.

［5］ 王月英 王汝勤 孟愛(ài)民，等.E838保護(hù)化療小鼠造血功能的療效觀察［J］.陜西醫(yī)學(xué)雜志，2009，38（11）：1443－1444.

［6］ 王月英，王汝勤 ，張良安，等.E838對(duì)IRM－2和ICR小鼠的輻射防護(hù)作用［J］.中國(guó)比較醫(yī)學(xué) 雜志，2004，12（6）：332－335.

［7］ 王月英，王汝勤，趙忠萍.E838對(duì)小鼠輻射防護(hù)作用的觀察［J］.中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志，2005，24（1）：39－40.