銀屑寧膠囊對心得安致豚鼠銀屑病樣皮損IL－2、TNF－α水平的影響

劉俊峰 朱 璐 廣州中醫藥大學第二臨床醫學院（廣州510000）

銀屑病俗稱“牛皮癬”，中醫稱“白疕”，是一種慢性復發性炎癥性皮膚病。近年來中醫藥在銀屑病的治療中逐漸顯出優勢，其具有改善病情，延緩復發，副作用小的特點。本實驗通過對豚鼠耳部外涂心得安乳膏誘發銀屑病模型的實驗研究，選用臨床有效制劑“銀屑寧膠囊”進行干預，研究其可能的作用機制。

1.材料及方法 1.1 實驗材料 1.1.1 動物來源：清潔級豚鼠60只，雌雄各半，體重300g±50g，由西安交通大學實驗動物中心提供。動物合格證號：醫動字第08－019號。

1.1.2 實驗用藥：心得安片（鹽酸普萘洛爾片），10mg/片，國藥準字：H61022221，由陜西中醫學院附屬醫院制劑室配置成5%心得安乳劑備用。

銀屑寧膠囊（主要組成：生地、玄參、丹皮、赤芍、丹參、板藍根、土茯苓、烏蛇）由陜西中醫學院附屬醫院提供。按照文獻方法[1]，遵照人與動物體重折算等效計量表，折算成豚鼠用量，用蒸餾水將藥物配制成生藥含量為0.22g/mL的藥液，冰箱保存備用。

復方青黛膠囊（主要組成：青黛、馬齒莧、白芷、土茯苓、紫草、貫眾、蒲公英、丹參等），國藥準字號Z20010157。用蒸餾水將藥物配制成生藥含量為0.44g/mL、0.22g/mL、0.11g/mL的藥液，冰箱保存備用。

1.1.3 主要試劑：IL－2試劑盒，由北京福瑞生物有限公司提供；TNF－α試劑盒，由北京福瑞生物有限公司提供。

1.1.4 主要實驗器材：GTZA型精密天平；BX－50奧林巴斯顯微鏡；TDL－45H低溫高速離心機，FM－2000全自動γ免疫計數器.

1.2 實驗方法 1.2.1 分組：將60只豚鼠適應性喂養1周，隨機分為6組，每組10只，A組：正常組，B組（模型組）、C組（復方青黛膠囊組，以下簡稱青黛膠囊組）、D組（銀屑寧大劑量組，以下簡稱銀大組）、E組（銀屑寧中劑量組，以下簡稱銀中組）、F組（銀屑寧小劑量組，以下簡稱銀小組）。

1.2.2 造模：按文獻方法[2]將5%心得安乳劑均勻涂于B、C、D、E、F組豚鼠雙側耳背皮膚（1cm2用藥0.3g，用玻璃棒涂勻），厚度約1.0mm，每日3次，連續2周。

1.2.3 給藥：造模完成后，A組、B組用生理鹽水灌胃，每次1mL，每日2次；C組灌服生藥含量為0.22g/mL復方青黛丸藥液，D、E、F組分別灌服0.44g/mL、0.22g/mL、0.11g/mL的銀屑寧藥液，1mL/次，每日2次，連續用藥4周。

1.2.4 觀察指標：①肉眼觀察一般情況和豚鼠雙耳形態鏡下觀察。②治療4周后，手術切取各組豚鼠左側耳部標本，光鏡下觀察病理變化。③采用放免法測定皮損IL－2、TNF－a水平。用藥4周后，手術切取各組豚鼠右側耳部標本，用預冷生理鹽水沖洗，拭干，切取0.4g，放入有1.0mL生理鹽水的試管內，用高速分散機以10000rpm勻漿2次，每次10s，勻漿后，用3500rmp離心15min，取上清液，用放免法測定IL－2、TNF－a的含量（由陜西中醫學院第二附屬醫院同位素室檢測）。

2 實驗結果 2.1 肉眼觀察 2.1.1 一般情況：空白組豚鼠精神好，反應敏捷，好斗，毛發濃密有光澤，緊貼皮膚，飲食、二便正常。所有造模動物造模1周后均出現精神較差，反應較空白組遲鈍，喜臥，進食減少，毛發無光澤，易脫落。2周后造模動物上述癥狀加重并出現搔抓耳部現象。經治療4周后銀屑寧膠囊大、中劑量組和復方青黛膠囊組豚鼠上述癥狀明顯減輕。

2.1.2 豚鼠雙耳形態：造模1周后，模型組動物耳背部涂藥部位毛發部分脫落無毛根，局部皮膚紅腫，觸之皮溫較正常組動物稍高。2周后紅腫加重，并覆有少量極細小銀白色鱗屑。正常組豚鼠雙耳毛發正常無脫落。用藥期間，模型組癥狀無明顯變化；銀屑寧膠囊大、中劑量組和復方青黛膠囊組治療組癥狀逐漸改善，四周后紅腫基本消失，鱗屑減少。

2.1.3 鏡下觀察：光鏡下正常組豚鼠耳背皮膚可見菲薄的角質層，顆粒層約1～3層，棘層細胞約3～5層，基底層為單層柱狀細胞，表皮突平坦；毛細血管擴張不明顯；真皮淺層稀疏散在的淋巴細胞浸潤。模型組鏡下均可見到不同程度的角化過度、棘層肥厚，乳突內有炎細胞浸潤，部分標本見到了廣泛或灶狀角化不全，顆粒層變薄或消失。表皮突延伸呈棒狀，乳突上伸呈杵狀變，毛細血管擴張、充血。血管周圍可見單一核及多形核細胞浸潤。治療后銀屑寧膠囊大、中劑量組和復方青黛膠囊組皮損組織病理明顯改善。

2.2 皮損組織內IL－2水平的檢測 從表1可知：與正常組比較，模型組IL－2含量明顯升高，差異有統計學意義（P＜0.05）；與模型組相比，青黛膠囊組、銀大組、銀中組IL－2含量均降低，差異均有統計學意義（P＜0.05）；青黛膠囊組、銀大組、銀中組之間比較差異均無統計學意義（P＞0.05）。

表1 皮損組織中IL－2含量測定結果

2.3 皮損組織中TNF－α含量測定 從表2可知：與正常組相比，模型組TNF－α含量明顯升高，差異有統計學意義（P＜0.01）；與模型組相比，青黛膠囊組、銀大組、銀中組含量均降低，差異均有統計學意義（P＜0.05）；青黛膠囊組、銀大組、銀中組之間比較差異均無統計學意義（P＞0.05）。

表2 皮損組織中TNF－α含量測定結果

3 討 論 Gaylard[3]等用心得安涂藥于豚鼠皮膚，造成皮膚角化過度，角化不全和棘層肥厚等銀屑病樣皮損，此方法已被國內學者多次重復，證實在豚鼠皮膚引起銀屑病樣皮損具有可重復性。此外，該病理改變在不接受心得安乳劑刺激的情況下能維持2周不消退[4]。在銀屑病的發病過程中，T細胞的活化及其引起的后續免疫炎癥反應是銀屑病發生和發展的關鍵環節。以Th為主的T淋巴細胞是主要的炎癥細胞，Th細胞可分成兩個亞群Thl和Th2，在銀屑病的研究中證實了Thl細胞占優勢，針對Th1細胞超強作用下的IL－2，TNF－α分泌，參與了疾病的發生和發展過程，作為暴露的病理性靶位因子而成為抗銀屑病藥物治療的作用靶位[5，6]。

本實驗研究中經過銀屑寧膠囊治療后模型皮損中IL－2、TNF－α的水平含量明顯降低，銀屑寧膠囊發揮作用的可能機制是通過抑制Thl細胞的超強作用，降低IL－2和TNF－α的分泌水平，一定程度上有利于促進Thl/Th2兩個亞群的平衡，進而降低了由于失衡產生的免疫炎性反應造成銀屑病的病理損害。

尋常型銀屑病早期發病以血熱為主，早期合理的清熱解毒涼血，病情會順勢而消[7]。銀屑寧膠囊由生地、玄參、丹皮、赤芍、丹參、板藍根、土茯苓、烏蛇等組成，是在已故著名老中醫郭仲軻教授治療銀屑病經驗方“生元飲”的基礎上，結合現代藥理研究成果及多年臨床經驗研制而成，全方具有涼血活血，清熱解毒，疏風止癢之功。本實驗主要從細胞因子水平研究了該藥治療銀屑病的機制，結果研究表明銀屑寧膠囊可能降低皮損組織IL－2、TNF－a的含量，這可能是銀屑寧膠囊治療銀屑病的機制之一。

[1]施新猷.醫用實驗動物學[M].西安：陜西科技出版社，1989：152.

[2]黃 畂，張淑芝，孫 令.心得安涂藥造成豚鼠耳部銀屑病樣病理變化[J].中華皮膚科雜志，1991，24（2），96－97.

[3]Garlarde PM.Psoriasiform changes in guinea－pig skin form propranolol[J].clin Exper Dermatol，1978，3（3）：157－160.

[4]王懿娜，方 紅，張幸國，等.紫杉醇溶液外用治療豚鼠耳部銀屑病樣病理改變的療效觀察[J].中華皮膚科雜志，2004，37（3）：156158.

[5]Caldarola G，De Simone C，Carbone A，Tulli A，Amerio P，Feliciani C.TNFalpha and its receptors in psoriatic skin，before and after treatment with etanercept[J].Int J Immunopathol Pharmacol，2009，22（4）：961－6.

[6]施惠娟，周 茹，金少舉，等.氧化苦參堿對銀屑病小鼠模型血清中IL－2、IL－10、TNF－α水平的影響[J].華西藥學雜志，2010，25（4）：418－420.

[7]趙振波.銀屑病中醫治療體會[J].陜西中醫，2009，30（1）：124.