麗格海棠‘宣言’離體再生因素的優化

王海朋，羿德磊，段祖安，崔為正，王洪利

(山東農業大學林學院;農業生態與環境重點實驗室，山東泰安 271018)

麗格海棠(Rieger begoni)為秋海棠科秋海棠屬多年生草本盆栽花卉，冬季開花、花色豐富、花期長，是目前國內流行的年宵花卉，也是國際花卉市場上的暢銷盆花之一［1，2］。其種子繁殖易變異，扦插繁殖浪費大量材料且移栽成活率較低［3］，生產栽培受到限制。李進進等［1－12］對麗格海棠組培技術做了探索和研究，取得了一些進展，但各研究結果間存在較大差異，可重復性低，難以直接應用與工廠化生產。本文旨在通過對影響麗格海棠‘宣言’葉片再生因子的研究，找到其分化繁育的最佳培養基，用于推動該優良品種種苗的繁育及其產業化進程，以便為麗格海棠其他優良品種的研究、生產提供一般參照。

1 材料和方法

1.1 材料與處理

材料來自于山東農業大學林學實驗站。清水沖洗10 min，升汞消毒后用無菌水沖洗2～3遍為外植體。

1.2 方法

1.2.1 不同外植體對麗格海棠不定芽誘導的影響 取麗格海棠葉片、葉柄、花托，接種到MS+6－BA 2.0 mg· L－1+NAA 0.2 mg· L－1+蔗糖30 g· L－1中，培養30 d后統計不定芽誘導數和不定芽誘導率，確定適宜的外植體。試驗中每個處理接種10瓶，每瓶接種1個外植體，3次重復(下同)。

1.2.2 不同培養基對麗格海棠不定芽誘導的影響 將外植體分別接種到不同類型培養中(MS、B5、N6)中，附加6 －BA 2.0 mg·L－1+NAA 0.2 mg·L－1，培養30 d后統計不定芽誘導數和不定芽誘導率，確定適宜的培養基。

1.2.3 不同細胞分裂素對麗格海棠不定芽誘導的影響 細胞分裂素對不定芽誘導有重要的作用，本試驗以6 － BA 、KT、ZT(1.5、2.0 、2.5 mg· L－1)為影響因子，設計3 水平4 因素的正交試驗 L9(34)(見表 3)，分析不同細胞分裂素對麗格海棠不定芽誘導的影響，培養30 d后統計不定芽誘導狀況。

1.2.4 激素配比對麗格海棠不定芽增殖的影響 影響麗格海棠不定芽增殖的主要因素是激素配比，以6－ BA(1.0、1.5、2.0 mg· L－1)、NAA(0.1、0.2、0.3 mg· L－1)、IAA(0.1、0.2、0.3 mg· L－1)為影響因子，設計3水平4因素正交試驗L9(34)，分析不同激素配比對麗格海棠不定芽增殖的影響(見表4)。取誘導生長到2 cm左右的麗格海棠不定芽進行接種，培養30 d后統計增殖狀況。

1.2.5 培養基成分對麗格海棠不定芽增殖的影響 培養基成分影響麗格海棠不定芽增殖狀況，以微量元素(1/4MS、1/2MS、MS)、大量元素(1/4MS、1/2MS、MS)、碳源(蔗糖、果糖、葡萄糖30 g· L－1)，設計3 水平4 因素正交試驗L9(34)(見表5)，分析不同成分組合對麗格海棠不定芽增殖的影響，培養30 d后統計增殖狀況。

1.2.6 不同生長素對麗格海棠無根苗的生根壯苗的影響 切取生長高度為3 cm左右的麗格海棠無根苗，接入附加不同濃度(0.1、0.2、0.3 mg· L－1)IAA、NAA 、IBA 的 1/2MS 中，培養 30 d 后統計分析生根狀況，確定生根培養基。

1.2.7 培養條件 培養基附加瓊脂 6.5 g· L－1和糖，pH 為5.8，培養溫度25℃，光照時間12 h，光照強度2000 Lx。

1.2.8 數據處理和統計方法 誘導率=誘出不定芽外植體數/接種外植體總數×100%;誘出不定芽平均數=誘出不定芽總數/接種外植體總數×100%;增殖倍數=誘出無根苗總數/接種無根苗總數;苗分化率=分化幼苗數/接種幼苗苗總數×100%;數據統計與分析采用SAS 9.0軟件。

2 結果與分析

2.1 不同外植體對麗格海棠不定芽誘導的影響

把不同部位的外植體接入到培養基中，觀察其分化狀況，葉片膨大、出現不定芽時間分別為7 d、14 d，葉柄、花托平均為14 d、20 d。

表1 不同外植體對麗格海棠不定芽誘導的影響Table 1 Effects of different explant on induction of buds

由表1可知，葉片不定芽誘導率最高，為96.7%。因此，葉片是麗格海棠不定芽誘導的最佳外植體。

2.2 不同培養基對麗格海棠不定芽誘導的影響

觀察接種于培養基MS、B5、N6中葉片不定芽誘導狀況可知，誘出不定芽平均數分別為20.4、17.5、15.9，其分化率在MS培養基中最高，為96.7%(見表2)。因此，MS是麗格海棠不定芽誘導的最佳基本培養基。

表2 不同培養基對麗格海棠不定芽誘導的影響Table 2 Effects of different basic culture on induction of buds

2.3 不同細胞分裂素對麗格海棠不定芽誘導的影響

對統計的麗格海棠不定芽誘導率進行方差分析，由表3可知:6－BA對誘導麗格海棠葉片不定芽誘導率有顯著影響，KT、ZT對誘導麗格海棠葉片不定芽率沒有達到顯著水平。

表3 不同細胞分裂素對麗格海棠不定芽誘導的影響Table 3 Effects of different cytokinins on induction of buds

因此，6－BA(2.0 mg·L－1)是麗格海棠葉片不定芽誘導的最佳細胞分裂素。

2.4 激素配比對麗格海棠不定芽增殖的影響

通過對麗格海棠苗分化率進行方差分析，由表4可知:6－BA、NAA對麗格海棠葉片不定芽增殖有顯著影響，IAA對誘導麗格海棠葉片不定芽增殖沒有達到顯著水平。

表4 激素配比對麗格海棠不定芽誘導的影響Table 4 Effects of hormone ratio on induction of buds

因此，6－ BA 1.5 mg·L－1+NAA 0.1 mg·L－1是麗格海棠葉片不定芽增殖的最佳激素配比。

2.5 培養基成分對麗格海棠不定芽增殖的影響

以麗格海棠苗分化率來作為統計數據，進行方差分析，結果見表5:

表5 培養基成分對麗格海棠不定芽增殖的影響Table 5 Effects of construction of culture on the growth and polarization status

微量、碳源對麗格海棠葉片不定芽增殖分別達到極顯著和顯著水平，大量元素對麗格海棠葉片不定芽增殖影響不顯著。鄧肯氏檢驗計算表明，1/2MS(微量)、MS、蔗糖(30 g·L－1)是最佳組合。

2.6 不同生長素對麗格海棠無根苗的生根壯苗的影響

麗格海棠在1/2MS附加IAA、NAA、IBA的生根培養基中生長30 d時生根情況見表6:

表6 不同種類的生長素對麗格海棠生根的影響Table 6 Different types of concentration of auxin to rooting

由表6可以知:麗格海棠在1/2MS+IAA 0.1mg·L－1的生根培養基中生根率最高，可達93.3%，且苗高最高;3種生長素都可誘導較高的生根率，IAA對根的誘導、根的伸長優于其他兩種生長素;提高生長素有利于增加生根數，但生根較細。

3 結論

影響麗格海棠不定芽誘導的因素是外植體、培養基和分裂素種類，誘導不定芽培養基為MS+6－BA 2.0 mg·L－1+NAA 0.2 mg·L－1;增殖的主要因素是微量的多少、碳源及激素配比，不定芽增殖培養基為MS+1/2MS(Trace element)+Sugar 30 g·L－1+6 － BA 1.5 mg·L－1+NAA 0.1 mg·L－1。本試驗研究確定的麗格海棠不定芽誘導培養基與不定芽增殖分化培養基與李進進、魏占才等［3－12］所報道的有一定差異，可能是麗格海棠的基因型差異和外植體不同部位等原因所致。

生根培養基為1/2MS+IAA 0.1 mg·L－1，適宜生長素種類有更明顯的促進生根壯苗效果。誘導不定根宜降低MS培養基離子濃度，這在許多植物組織培養中已見報道［13－14］，本試驗采用1/2MS誘導獲得高生根率也驗證了這一點。

果糖有利于提高增殖分化效果;蔗糖對麗格海棠不定芽誘導和增殖的影響沒有達到顯著水平。魏占才［4］報道了蔗糖對麗格海棠生長效果影響并不大，這與本試驗結果較為一致，原因可能是由于外植體不定根誘導是一個能量消耗過程，需要提供一定碳源作為能量供應［15－16］，當光合作用所需的碳源滿足其營養物質的臨界點時，糖質量濃度的提高也不會增加光合效率。

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