不同提取方法對3種維吾爾藥材抑菌作用的影響

祖麗皮亞·玉努斯

（新疆大學生命科學與技術學院，新疆 烏魯木齊 830046）

在全球長壽地區之一的新疆，具有獨特的地理環境和氣候條件，因而蘊育了豐富的維吾爾藥材資源，維吾爾傳統醫藥至今廣泛流傳。維吾爾人在用天然藥物治病過程中創造了獨具特色的維吾爾藥制備方法、用藥等理論及臨床經驗。本文為對維吾爾藥材制備方法進行有關試驗，找出合理的制備方法，以三種常用維吾爾藥材為試驗材料對常見的4種細菌進行了體外抑菌試驗 。

1 試驗材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種 大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、變形桿菌。新疆大學生命科學與技術學院微生物教研室保存菌種。

1.1.2 儀器與藥品 恒溫培養箱、高壓滅菌鍋，冰箱，722型可見紫外分光光度計，旋轉蒸發儀，電子天平，pH值精密試紙，以及其他微生物培養所需常規器皿等、所用的藥品有牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂粉等。

1.1.3 維吾爾生藥 地錦草，菝葜根，黃花苜蓿，購自新疆加帕爾阿吉生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 維藥提取液的制備 （1）煎煮法：取上述3種藥材各10g，切細磨碎，加200mL蒸餾水，煮沸30min，過濾，藥渣再加蒸餾水200 mL，煮沸30 min，過濾，合并兩次濾液，加熱蒸發濃縮至10mL，使100%原液，4℃冰箱保存備用。（2）加水研磨法：取上述3種藥材各10g，無菌乳缽中搗碎，按1∶10比例加無菌蒸餾水浸泡過夜，然后3000r／min離心5min，上清液即為100%原液，4℃冰箱保存備用。（3）乙醇提取法：取上述3中藥材10g，加60mL體積分數為70%乙醇浸泡24h，將浸提液置于旋轉蒸發儀濃縮至10mL，即得100%提取液，4℃冰箱保存備用。

1.2.2 菌懸液的制備 無菌條件取一鉑金環已活化的備用菌種接種在滅菌100mL的液體培養基中，在37℃振蕩培養箱培養16～18h，再用可見紫外分光光度計測OD值，測定結果在0.005～0.01范圍內可用于抑菌試驗，如果菌懸液的OD值超過這個范圍用2倍和10倍稀釋法稀釋到0.005～0.01范圍，備用。

1.2.3 最底抑菌濃度（MIC）的測定 采用試管稀釋法進行體外抑菌試驗。不同方法（煎煮法、加水研磨法）制備的地錦草、菝葜根、黃花苜蓿提取液分別配制成含提取液濃度為50%、25%、12.5%、6.25%、3.125%、1.56%的液體培養基各5mL。

分別取菌懸液100μmL接種于上述液體培養基內，做一個平行試驗，一個對照試驗。在37℃振蕩培養箱培養18～24h，然后與對照組對照顏色變化。如顏色變化不明顯，取100μmL于已備好的固體平板培養基中涂布均勻，在37℃培養24h觀察結果。

1.2.4 結果判定 觀察細菌生長情況，細菌不生長的最低維吾爾藥提取液濃度即為該提取液對該細菌的最低抑菌濃度（MIC）。

2 試驗結果

2.1 對大腸桿菌的抑菌作用 采用煎煮法提取的地錦草，黃花苜蓿、菝葜根提取液對大腸桿菌的MIC分別為12.5%、12.5%和25%；采用加水研磨法提取的地錦草、黃花苜蓿、菝葜根提取液對大腸桿菌的 MIC分別為25%、12.5%和6.25%；不同乙醇提取液對變形桿菌的 MIC分別為12.5%、25%、6.25%。見表1。

表1 不同提取液對大腸桿菌的抑菌作用

2.2 對金黃色葡萄球菌的抑菌作用 采用煎煮法制備的提取液對金黃色葡萄球菌的MIC均為12.5%。采用加水研磨法制備的提取液對金黃色葡萄球菌的MIC分別為50%、25%、50%，不同乙醇提取液對變形桿菌的 MIC分別為12.5%、25%、6.25%。見表2。

2.3 對枯草芽孢桿菌的抑菌作用 采用煎煮法制備的3種提取液對枯草芽孢桿菌的MIC均為50%；采用加水研磨法制備的原液對枯草芽孢桿菌沒有抑菌作用，不同乙醇提取液對變形桿菌的MIC分別為50%、50%、25%。見表3。

2.4 對變形桿菌的抑菌作用 采用煎煮法制備的3種提取液對變形桿菌的 MIC分別為25%、25%、50%，采用加水研磨法的提取液對變形桿菌的MIC均為50%，不同乙醇提取液對變形桿菌的MIC分別為12.5%、25%、12.5%。見表4。

3 討論

3.1 維吾爾藥的制備過程不同于天然化學藥物的制備，主要要求提取總有效成分，多數為粗提物，臨床用藥的主要形式以復方為主，因此在研究某種維吾爾藥的抑菌作用時應考慮到復方制劑的抑菌效果。

表2 不同提取液對金黃色葡萄球菌抑菌作用

表3 不同提取液對枯草芽孢桿菌抑菌作用

表4 不同提取液對變形桿菌的抑菌作用

3.2 維吾爾藥制備的方法中炒、煅、蒸、煮應用最多，

3.3 同一種藥材由于不同來源、季節性變化、使用部位的不同其成分和抑菌作用也有差別，特別是有些活性成分對光和熱不穩定，這給抑菌效果帶來一定的影響。還有同一種提取液，對不同供試菌抑菌效果也存在著較大的差異，其機理待進一步研究。

［1］ 艾爾肯·卡斯木，熱娜·吾買爾.試談當前維吾爾藥研究中有待解決的幾個問題［J］.中國民族醫藥雜志，2006，4：82－83.

［2］ 張新江，李燕林.維吾爾藥資源的開發與發展對策［J］.新疆中醫藥，2004，22（4）：62－63.

［3］ 熱依木·居曼努爾尼沙·可力木，海其古麗·提力瓦地.淺談維吾爾藥炮制與臨床療效的關系［J］.中國民族醫藥雜志，2007，6：44.

［4］ 蔣志國，施瑞城.10種中草藥提取物對常見果蔬致腐真菌的抑制作用及有效成分分析［J］.食品科技，2006，4：28.

［5］ 杜銀忠.中藥原液制備方法對產酶菌抑菌效果的影響［J］.青海大學學報：自然科學版，2009，27（3）：62.

［6］ 楊革.微生物學實驗教程［M］.北京：科學出版社，2004.

［7］ 帕麗達，李嘵瑾.關于維吾爾藥研究的思考［J］.新疆醫學，2006，36：247－248.