祛異康對子宮內膜異位癥模型大鼠肝腎組織形態結構影響的實驗研究＊

楊鑒冰 楊東艷 陜西中醫學院附屬醫院婦科（咸陽 712000）

子宮內膜異位癥（endometriosis，EMT簡稱內異癥）是育齡婦女的高發病。文獻報道，在盆腔疼痛婦女中40%～60%有內異癥［1］。本研究針對經驗方祛異康作用于內異癥模型大鼠在達到治療作用的同時觀察對大鼠肝、腎臟器影響，從而為祛異康的臨床用藥提供可靠的依據。

1 材料與方法 1.1 實驗動物 健康SD雌性大鼠40只，體重150～180g，由西安交通大學醫學院動物實驗中心提供（動物合格證號：醫動字第08－005號）。

1.2 實驗藥物 祛異康：由當歸、赤芍、川芎、三棱、桂枝、丹參等中藥組成，購于陜西中醫學院金秋門診，將上藥煎煮濃縮制備成2g／mL，藥液塑封儲于4℃冰箱；丹那唑（上海華聯制藥有限公司生產，國藥準字H31021681），用1%的甲基纖維素納溶解成8mg／mL的溶液。

1.3 實驗方法 1.3.1 動物模型制作與分組：大鼠適應性喂養3d后隨機分成4組，每組10只。空白對照組（A組）：只行開腹關腹術；模型組（B組）、丹那唑組（C組）、祛異康組（D組）均采用種植內膜方法建立子宮內膜異位癥動物模型［2－3］。造模當天肌注青霉素20萬U／次，2次／d，連續3d，造模后7d打開腹腔觀察異位內膜生長情況，以異位病灶呈米粒大小之結節，切面可見一線形閉合水孔，異位內膜組織均形成囊狀，囊內為無色透明液體，或囊內形成多個串珠狀，周圍可見豐富血管形成，表明造模成功。術后第8dA組、B組用生理鹽水1mL／100g灌胃，1次／d；C組用丹那唑混懸液，含生藥8mg／（mL·100g）灌胃，1次／d；D組用祛異康煎劑，含生藥2g／（mL·100g）灌胃，1次／d，各組均連續灌胃28d，擇動情期處死。

1.3.2 取材：各組動物處死后分別取肝、腎臟稱重，并計算肝、腎臟臟器指數（臟器指數＝臟器重量／體重×100%）；將肝、腎臟固定于福爾馬林溶液中，石蠟包埋切片，HE染色。

1.3.3 判斷方法：肝臟病變程度分為5個等級：“－”：肝組織結構正常；“＋”：肝細胞核濃縮，核分裂增多，枯否細胞增生；“＋＋”：肝細胞核濃縮、氣球樣變及嗜酸性變、中央靜脈擴張，膽管輕度增生，少量炎癥細胞浸潤；“＋＋＋”：肝細胞變性，有片狀肝壞死，膽管明顯增生，較多炎癥細胞浸潤；“＋＋＋＋”：肝細胞變性壞死，肝索排列紊亂，膽管明顯增生，有少量纖維組織增生，大量炎癥細胞浸潤。腎臟病變程度分為4個等級：“－”：腎組織結構正常；“＋”：少量腎曲管輕度腫脹，間質未見炎癥浸潤；“＋＋”：部分腎曲管腫脹，可見蛋白管型，間質少量炎癥細胞浸潤；“＋＋＋”：大部分腎曲管腫脹變性，間質大量炎癥細胞浸潤。

1.3.4 統計方法：采用spass13.0軟件進行檢驗。計數資料采用Wilcoxon等級分組秩和檢驗；計量資料采用（），兩組間比較采用t檢驗。

2 結 果 2.1 各組大鼠肝臟重量及系數比較 模型組、祛異康組與對照組肝臟重量及系數比較均無明顯差異（P＞0.05），丹那唑組與對照組比較有顯著性差異（P＜0.05），見表1。

表1 各組大鼠肝臟重量及系數的比較（）

表1 各組大鼠肝臟重量及系數的比較（）

組 別 劑量（g／mL） n 肝臟重量（g） 肝臟指數對照組 － 97.77±0.643.89±0.33模型組 － 98.00±0.543.67±0.71丹那唑組 0.008 89.00±0.634.50±0.53祛異康組2 108.00±0.583.90±0.32

2.2 各組大鼠腎臟重量及系數比較 模型組、丹那唑組、祛異康組與對照組腎臟重量及系數比較均無明顯差異（P＞0.05）。見表2。

表2 各組大鼠腎臟重量及系數的比較（）

表2 各組大鼠腎臟重量及系數的比較（）

組 別 劑量（g／mL） n 腎臟重量（g） 腎臟指數對照組 － 92.44±0.531.22±0.44模型組 － 92.33±0.501.11±0.33丹那唑組 0.008 82.50±0.531.25±0.47祛異康組2 102.40±0.521.20±0.42

2.3 祛異康、丹那唑對大鼠肝臟病變程度的影響見表3。

表3 祛異康、丹那唑對大鼠肝臟病變程度的影響

2.4 祛異康、丹那唑對大鼠腎臟病變程度的影響 見表4。

表4 祛異康、丹那唑對大鼠腎臟病變程度的影響

2.5 大鼠肝、腎臟組織形態學變化 肉眼觀察對照組肝臟質地柔軟、紅潤有光澤，大小形態正常。鏡下見肝小葉結構清晰，肝板由單房肝細胞堆砌，肝細胞無腫脹變性，中央靜脈未見擴張，匯管區膽管無增生（見圖1）。丹那唑組肝臟腫脹，個別肝臟呈暗紅色。鏡下見肝細胞水腫，部分肝板界不清，失去正常的組織結構，肝竇枯否氏細胞增生，部分匯管區小血管周圍少量淋巴細胞、漿細胞等炎細胞浸潤，周圍肝細胞水腫（見圖2）。祛異康組肝臟大小形態正常，鏡下見肝臟結構大致正常，膽小管未見改變，匯管區未見炎細胞浸潤，僅部分匯管區小膽管稍擴張（見圖3）。對照組肉眼見腎臟色澤紅潤，質地柔軟，大小形態正常。鏡下見腎曲管及腎小球未見腫脹變性，間質無炎癥細胞浸潤，組織結構正常（見圖4）。丹那唑組肉腎臟輕度腫大，鏡下見部分腎小管上皮細胞腫脹、增生，核深染，胞質嗜堿，腎小管間毛細血管擴張、充血，腎小管腔內蛋白滲出物，間質未見炎癥細胞浸潤，部分腎小管內伊浸紅色分泌物，腎小球大小形態基本正常，未見明顯病變（見圖5）。祛異康組腎臟大小形態正常。鏡下見個別腎小管內伊紅色分泌物，間質未見炎癥細胞浸潤病，腎小球未見明顯改變（見圖6）。

3 討 論 子宮內膜異位癥（EMT）是好發于生育年齡婦女的婦科疑難雜癥，近年來子宮內膜異位癥的多發以及易發性已經引起醫學界的廣泛重視，現代醫學多采用激素療法或手術治療，療效不甚滿意［4］。祛異康方系三十多年的臨床治療經驗總結，主要針對EMT瘀血內阻，沖任氣血不通的病機所表現出的痛經、月經不調、不孕、癥瘕等婦科病癥而設。在前期的臨床實踐觀察中已證明該方療效確切，可明顯改善臨床癥狀及體征［5－6］。為確保臨床用藥的安全性，故在前期工作基礎上，以治療EMT的西藥丹那唑作對比，進一步研究祛異康方對大鼠肝、腎病理學的影響。

圖1 對照組正常肝臟組織 ×400

圖2 丹那唑組肝臟損害組織 ×400

圖3 祛異康組肝臟組織 ×400

圖4 對照組正常腎臟組織 ×400

圖5 丹那唑組腎臟組織 ×400

圖6 祛異康組腎臟組織 ×400

臟器系數是實驗動物某臟器的重量與其體重之比值。正常情況下各臟器與體重的比值相對恒定，動物染毒后，受損臟器重量可以發生改變，故臟器系數也隨之而改變。臟器系數是毒理實驗中常用的指標。肝臟是動物重要的代謝器官，來自體內和體外的許多非營養性物質均需經過肝臟的生物轉化作用；腎臟是毒物的主要排泄器官，易受到損害，往往是許多毒物的作用器官或靶器官［7］。實驗結果顯示：丹那唑組作用于子宮內膜異位癥動物模型，連續用藥4周后，可造成大鼠肝臟中等程度的損害，如果用藥時間更長，對肝臟損害更嚴重；而祛異康組對肝、腎無明顯組織形態學改變，祛異康與丹那唑相比，在治療子宮內膜異位癥短期臨床用藥具有相對安全性。同時結合兩藥治療作用的研究，祛異康經驗方具有丹那唑不可比擬的優勢，更適合于臨床選用治療子宮內膜異位癥。

［1］宋作林.子宮內膜異位癥的研究與臨床指南［M］.成都：四川科學技術出版社，2005：28－68.

［2］楊鑒冰，張朝紅.血瘀型子宮內膜異位癥大鼠模型的實驗研究［J］.中國中醫基礎雜志，2007，13（10）：774.

［3］鄭澄宇，楊冬梓，謝梅青，等.大鼠子宮內膜異位癥模型的建立及其組織學觀察［J］.中山醫科大學學報，2001，22（2）：107.

［4］郎景和.子宮內膜異位癥的研究和設想［J］.中華婦產科雜志，2004，（38）：478－480.

［5］楊鑒冰，崔曉萍，孟巧絨，等.中藥祛異康治療子宮內膜異位癥45例臨床觀察［J］.中國中醫急癥，2006，15（1）：35－36.

［6］楊鑒冰，樸芳姬.祛異康治療子宮內膜異位癥30例臨床研究［J］.云南中醫中藥雜志，2006，27（5）：32－34.

［7］施新猷.實驗動物學［M］.陜西：陜西科技出版社，1998：37.