小青龍顆粒提取工藝研究

朱燕萍 李小妮 陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科（咸陽 712083）

小青龍顆粒別名小青龍沖劑，是傳統(tǒng)名方小青龍湯的現(xiàn)代劑型之一，由麻黃、桂枝、白芍、干姜、細辛、五味子等組成。具有解表化飲，止咳平喘功效。用于風(fēng)寒水飲，惡寒發(fā)熱，無汗，喘咳痰稀。現(xiàn)代藥理研究表明，小青龍湯具有明顯的平喘、祛痰、抗炎等治療哮喘的作用。臨床用于支氣管哮喘、急、慢性支氣管炎、喘息型肺炎等呼吸系統(tǒng)疾病有良好療效，加用西藥控制感染和解除支氣管痙攣，可以提高療效；對過敏性鼻炎的流涕、鼻塞、嗅覺障礙、鼻黏膜充血腫脹等癥狀有明顯改善作用[1，2]；此外，還可用于風(fēng)濕痹痛、水腫、失音、泄瀉等。該劑型早已載入藥典，但其提取工藝系統(tǒng)化研究尚未見報道。為了降低成本，優(yōu)化工藝參數(shù)，同時保證產(chǎn)品質(zhì)量 ，我們在舊工藝基礎(chǔ)上，選擇鹽酸麻黃堿為考察指標(biāo)，對該制劑工藝中溶劑的用量、提取次數(shù)、提取時間等參數(shù)進行考察，篩選出可靠而穩(wěn)定的提取工藝，為其工藝改革提供依據(jù)。

1 儀器與試藥 LC2010-CHT液相色譜儀（Shimadzu），LCsolution化學(xué)工作站；C18柱（250mm×4.6mm ，5μm），流動相：乙腈-0.1%磷酸（12∶88），以三乙胺調(diào)節(jié)pH＝4.5，檢測波長207nm，流速1mL／min，柱溫25℃；BS110S電子分析天平。鹽酸麻黃堿標(biāo)準(zhǔn)品（中國生物制品檢定所）；色譜分析用乙腈購自MERCK公司，其余試劑均為分析純。

藥物提取 ：按處方比例稱取麻黃、芍藥、細辛、干姜、甘草、桂枝、半夏和五味子8味藥，共9份，加65%乙醇提取，濾過，合并濾液，回收乙醇，濃縮定容測定麻黃堿含量，藥材均購自西安萬壽路藥材市場，全部符合2010版《中國藥典》一部對應(yīng)藥材項下規(guī)定。

2 方 法

2.1 指標(biāo)選擇 復(fù)方中麻黃為君藥，該藥含量測定方法成熟，提取物中鹽酸麻黃堿的含量可用高效液相色譜法測定，故此選為質(zhì)量控制指標(biāo)。

2.2 鹽酸麻黃堿含量測定方法 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備：精密稱取鹽酸麻黃堿對照品5.03mg于50mL容量瓶中，甲醇定容，搖勻，精密吸取2mL于25mL量瓶中，甲醇定容，作為標(biāo)準(zhǔn)工作液。

供試品制備：精密量取復(fù)方提取液適量（約相當(dāng)于麻黃生藥0.2g），置于干燥錐形瓶中揮干，以25mL甲醇溶解，稱重，超聲處理45min，放冷，稱重，加甲醇補足減少量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)液1mL，置中性氧化鋁柱（100～20目，內(nèi)徑1cm，1.5g）上，以50%甲醇洗脫，收集洗脫液約9mL于量瓶中，加磷酸1滴，以50%甲醇定容搖勻，過0.45μm微孔濾膜，取續(xù)濾液備用[3，4]。

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：分別吸取鹽酸麻黃堿標(biāo)準(zhǔn)工作液1，2，4，8，16，32μL進樣，測定并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸曲線Y＝1524.1X＋31.121，R2＝0.9998，鹽酸麻黃堿在0.008～0.256μg間線性良好。

2.3 正交試驗 為了篩選出最佳工藝，選用65%乙醇作為提取溶劑，采用正交設(shè)計優(yōu)選提取條件：選擇了對提取效率影響最主要的三個因素：溶劑量A、提取時間B、提取次數(shù)C，每個因素選取3個水平（見表1），按L9（34）正交表進行試驗并進行方差分析，確定優(yōu)化工藝（見表2，3）。

表1 因素水平表

表2 L9（34）正交設(shè)計表

表3 麻黃堿方差分析表

3 討 論 對鹽酸麻黃堿的轉(zhuǎn)移率考察，方差分析結(jié)果顯示，三個因素對轉(zhuǎn)移率影響的主次關(guān)系為B＞A＞C，尤其前兩個因素的影響具有非常顯著性意義（P＜0.01），而C因素的影響無顯著性意義（P＞0.05），考慮到C2和C3相差不大，從節(jié)能省工時的角度來說可以選擇A3B2C2，即加12倍量的溶劑，每次提取時間1.5h，提取2次為最佳工藝。此工藝以鹽酸麻黃堿為指標(biāo)，確保了藥物的療效。

本研究是在以往工藝的基礎(chǔ)上進行研究的，文獻研究可知小青龍湯回流提取優(yōu)于滲漉法，提取溶劑在60%-70%乙醇[3－5]，故此選定65%乙醇作為提取溶劑，不做進一步考察；測定條件文獻顯示一般有機相和水相比例為10：90[3，4]，本研究經(jīng)反復(fù)試驗，確定流動相為乙腈-0.1% 磷酸溶液（12∶88），樣品分離良好，并減少酸性溶液對儀器和色譜柱的損害。

[1]李雅琴.《傷寒論》小青龍湯的臨床應(yīng)用[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2008，26（1）：46-48.

[2]易桂生.小青龍湯的臨床新用[J].陜西中醫(yī)，2008，29（4）：294.

[3]賴慶寬，尹蓉莉，楊宗錕.小青龍湯復(fù)方提取工藝比較研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2008，19（7）：1622-1624.

[4]潘 玲，臺小華，韓建偉.正交設(shè)計法優(yōu)選小青龍貼膏提取工藝的研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2008，14（11）：20-22.

[5]李 寧，柴清河，董保國.小青龍膠囊的制備工藝研究[J].醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)資訊，2006，3（1）：106-107.