傣醫解藥雅解沙把對小鼠急性化學性肝損傷的保護作用△

吳愛萍 代 蓉 李相融 王 輝 薛 靜 張 超 淤澤溥

(云南中醫學院，云南 昆明 650500)

傣醫認為“雅解(解藥)”能調節人體生理功能、解除人體的各種毒素，保持體內“四塔五蘊”功能的平衡和協調。“雅解”方藥在疾病的防治中發揮重要的作用，臨床應用十分廣泛。課題組前期實地調研、收集、整理及西雙版納州傣醫院等單位進行的初步臨床研究結果表明，多種傣醫解藥具有一定的保肝作用，對肝病、消化系統疾病、代謝性疾病等均有肯定的療效。我們選用有長期臨床應用基礎的“雅解”方中的代表方——西雙版納州傣醫院的院內制劑“雅解沙把”進行保肝作用的研究。

減少毒物對機體的損傷可能是解藥“雅解沙把”解毒的作用機制之一，肝臟是體內血流最豐富的器官，也最容易受到毒物的損傷。本實驗在傣醫基礎理論為指導下，對通過研究“雅解沙把”對小鼠急性化學性肝損傷模型血清轉氨酶的影響，為其臨床用于防治肝損傷提供實驗依據，也為進一步研究其“解毒”作用機制的特點提供理論支持。

1 實驗材料

1．1 動物:昆明種小鼠，清潔級，雌雄兼用，體重18～22g。均購自四川省醫學科學院實驗動物研究所，許可證號:SCXK(川)2008－24。

1．2 藥物:“雅解沙把”(百解膠囊)，滇藥制字(Z)20082252K，0．2g×60 粒/瓶，5 粒/次，每日 次;由西雙版納州傣醫院提供。聯苯雙酯滴丸:國藥準字H33020232，1．5mg×250丸/瓶，5粒/次，每日3次;浙江醫藥股份有限公司新昌制藥廠，批號:100409、101004。茵梔黃口服液:北京雙鶴高科天然藥物有限責任公司，批號:272421。

1．3 試劑:四氯化碳(CCl4):分析純，≥99．5%，武漢聯堿廠，批號:20040310。D－氨基半乳糖(D－Galn):≥99%，為sigma公司產品。對乙酰氨基酚(AAP):瑞士admas公司產品，批號:T03171。硫代乙酰胺(TAA):瑞士admas公司，批號:T3533。α－萘異硫氰酸酯(ANIT):acros公司，批號:A0298308。丙氨酸氨基轉移酶(ALT)試劑盒，批號:20110228、20110624、20111031;天冬門氨酸氨基轉移酶(AST)試劑盒，批號:20110620、20111101;總膽紅素(Tbil)測定試劑盒，批號:20111111;以上試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1．4 儀器:Infinite M200 PRO酶標儀:瑞士Tecan公司;UV－N2550紫外分光光度計:日本島津公司;CF16 RXⅡseries冷凍離心機:日本HITACHI公司;XS125A電子分析天平:瑞士Precisa公司;UB－7 pH計:;美國丹佛儀器公司(DENVER INSTRUMENT);HW－80A旋渦混合器:上海精科實業有限公司;HH－6數顯恒溫水浴鍋，常州國華電器有限公司。

2 方法和結果

2．1 “雅解沙把”劑量選擇及藥物制備:按人和動物的體表面積計算法，計算得出“雅解沙把”小鼠口服給藥的等效量為0．39g生藥/kg，再參考前期完成的“雅解沙把”抗炎、解酒等實驗的有效劑量為9倍臨床等效劑量，故本實驗選擇3．51g生藥/kg、0．39g生藥/kg為高、低劑量，此劑量相當于臨床用劑量的9倍和1倍。

取“雅解沙把”生藥粉末250g，用無紡布袋分裝后包煎，第一次加3倍量水煎煮，煮沸計時，30min后過濾;第二次加2倍量水煎煮，煮沸計時，20min后過濾;第3次加2倍量水煎煮，煮沸計時，20min后過濾。將三次濾液合并，濃縮成稠浸膏，置冰箱中冷藏保存備用，臨用前按劑量現配至所需濃度。

2．2 “雅解沙把”對CCl4致急性肝損傷模型小鼠血清ALT的影響:參考文獻［1］方法，取雄性昆明種清潔級小鼠75只，按體重與性別隨機分為正常對照組、模型組、聯苯雙酯組、雅解沙把高、低劑量組，每組動物15只。按分組分別等體積灌胃給予相應藥物，正常組和模型組給予等體積1%CMC －Na，1次/d，連續用藥6d，第6 日給藥后30min，除正常對照組外，其余各組均腹腔注射0．2%的CCl4橄欖油溶液0．1ml/10g．bw，造模后禁食不禁水20h，第7日再給藥一次，末次給藥后30min，摘眼球取血，以r/min離心15min，分離血清，按試劑盒(賴氏法)操作方法測定血清ALT。實驗結果見表1，“雅解沙把”高劑量組小鼠血清ALT低于CCl4致肝損傷模型組 (P ＜0．01)，低劑量組有作用趨勢(P ＞0．05)。

表1 “雅解沙把”對CCl4致急性肝損傷模型小鼠血清ALT的影響(+s)

表1 “雅解沙把”對CCl4致急性肝損傷模型小鼠血清ALT的影響(+s)

注:與正常組相比:0△△P ＜0．01;與模型組相比，＊＊P ＜0．01

分組 劑量(/kg) 動物數(只) ALT(IU/L)正常20ml 15 15．09 ±3．70模型 20ml 12 148．25 ±28．52△△聯苯雙酯 200mg 14 100．46 ±34．30＊＊雅解高 3．51g 15 100．36 ±37．42＊＊雅解低0．39g 14 113．05 ±40．88

2．3 “雅解沙把”對D－Galn致急性肝損傷模型小鼠血清ALT、AST的影響:參考文獻［2，3］方法，取昆明種清潔級小鼠70只，雌雄各半，分組給藥同2．2。不同者為每組動物14只，正常組和模型組給予等體積蒸餾水，連續用藥7d。末次給藥1h后，除正常組腹腔注射等量生理鹽水(NS)外，其余4組分別按0．08ml/10g．bw腹腔注射800mg/kg DGaln，給藥后24h，摘眼球取血，分離血清，按試劑盒(賴氏法)操作方法分別測定ALT、AST。實驗結果見表2，“雅解沙把”高劑量組小鼠血清ALT低于D－Galn肝損傷模型組(P＜0．05)，而對抑制AST的升高僅有作用趨勢(P ＞0．05)。

表2 “雅解沙把”對D－Galn致肝損傷模型小鼠血清ALT、AST的影響(+s)

表2 “雅解沙把”對D－Galn致肝損傷模型小鼠血清ALT、AST的影響(+s)

注:與正常組相比:△△P ＜0．01;與模型組相比:*P ＜0．05，＊＊P ＜0．01

分組 劑量(/kg) 動物數(只) ALT(IU/L) AST(IU/L)正常20ml 12 8．57 ±2．61 9．51 ±1．87模型 20ml 13 58．48±33．71△△ 32．60±19．54△△聯苯雙酯 200mg 13 15．33±11．68＊＊ 13．17±3．89＊＊雅解高 3．51g 12 24．97 ±14．60* 19．57 ±10．47雅解低0．39g 12 56．93 ±26．34 28．77 ±17．23

2．4 “雅解沙把”對AAP致急性肝損傷模型小鼠血清ALT、AST的影響:參考文獻［4，5］方法，取昆明種清潔級小鼠80只，雌雄各半，分組給藥同2．3。不同者為每組動物16只，除正常對照組外，其余4組分別灌胃給予500mg/kg AAP，給藥24h后，按前述方法測定ALT、AST。實驗結果見表3，“雅解沙把”高劑量組小鼠血清ALT低于AAP致肝損傷模型組(P＜0．05)，而對抑制AST的升高有作用趨勢(P ＞0．05)。

表3 “雅解沙把”對AAP致急性肝損傷模型小鼠血清ALT、AST的影響(—χ+s)

2．5 “雅解沙把”對TAA致急性肝損傷模型小鼠血清ALT、AST的影響:參考文獻［6－8］方法，取昆明種清潔級小鼠70只，雌雄各半，分組給藥同2．3。不同者為，除正常組腹腔注射等量NS外，其余4組分別腹腔注射100mg/kg－TAA溶液，給藥16h后(禁食不禁水)，按前述方法測定ALT、AST。實驗結果見表4，“雅解沙把”高劑量組對降低TAA致小鼠血清ALT的升高有作用趨勢(P＞0．05)。

表4 “雅解沙把”對TAA致急性肝損傷模型小鼠血清ALT、AST的影響(+s)

表4 “雅解沙把”對TAA致急性肝損傷模型小鼠血清ALT、AST的影響(+s)

注:與正常組相比:△△P ＜0．01;與模型組相比:*P ＜0．05

分組 劑量(/kg) 動物數(只) ALT(IU/L) AST(IU/L)正常20ml 13 10．41 ±4．67 15．01 ±3．28模型 20ml 12 113．47±39．08△△ 77．41±15．09△△聯苯雙酯 300mg 12 69．03 ±35．09* 60．65 ±20．55*雅解高 3．51g 13 86．30 ±22．99 72．31 ±16．42雅解低0．39g 13 114．58 ±33．88 78．15 ±27．15

2．6 “雅解沙把”對 ANIT致急性肝損傷模型小鼠血清ALT、AST的影響:參考文獻［8－10］方法，取昆明種清潔級小鼠84只，雌雄各半，隨機分為正常對照組、模型組、聯苯雙酯組、茵梔黃組、雅解沙把高、低劑量組，每組動物14只。除正常組和模型組灌胃給予等體積蒸餾水外，其余各組按分組分別灌胃給予相應藥物，1次/d，連續用藥8d。第6d給藥1h后，除正常組外，其余5組均灌胃給予100mg/kgANIT橄欖油溶液，中毒后繼續給藥2d。第8d給藥1h后(ANIT中毒48 h)摘眼球取血，分離血清，測定 ALT、Tbil。所有小鼠在ANIT中毒前和處死前分別禁食12 h，自由飲水。實驗結果見表5，“雅解沙把”高劑量組小鼠血清ALT低于ANIT致肝損傷模型組 (P ＜0．05)。

表5 “雅解沙把”對ANIT致急性肝損傷模型小鼠血清ALT、Tbil的影響(+s)

表5 “雅解沙把”對ANIT致急性肝損傷模型小鼠血清ALT、Tbil的影響(+s)

注:與正常組相比:△△P ＜0．01;與模型組相比:*P ＜0．05，＊＊P ＜0．01

分組 劑量(/kg) 動物數(只) ALT(IU/L) Tbil(umol/L)正常20ml 14 8．97 ±3．20 4．67 ±3．21模型 20ml 13 80．24±17．45△△ 95．70±18．07△△聯苯雙酯 200mg 11 42．90±20．63＊＊ 81．76±10．76*茵梔黃 20ml 10 65．77 ±16．16* 80．69 ±12．92*雅解高 3．51g 12 64．55 ±19．18* 83．82 ±14．50雅解低0．39g 10 78．11 ±28．95 95．44 ±19．77

3 討論

CCl4、D－Glan、AAP、TAA和ANIT損傷肝臟的機理不同。CCl4損傷肝臟的主要機理是CCl4經肝細胞色素P450代謝激活后生成三氯甲基(CCl3)自由基和氯自由基可引起細胞膜，脂質過氧化，導致肝細胞損傷壞死，胞漿內轉氨酶滲入血液［6，11］。D－Glan損傷肝細胞是由于其與磷酸尿嘧啶核苷競爭性結合，導致糖原、RNA、蛋白質合成障礙，從而引起肝細胞炎癥和壞死［6］。過量的AAP進入體內，經肝細胞色素P450代謝后，產生大量的半醌自由基，其需要谷胱甘肽(GSH)參與滅活，過多的自由基使肝內GSH被消耗，并與肝細胞蛋白質進行共價結合;且AAP在肝內代謝過程中產生的自由基，可引起肝細胞膜脂質過氧化，從而導致肝細胞損傷壞死［11，12］。TAA對肝臟造成損害，可能是由于TAA經肝細胞內細胞色素P450代謝后的產物與肝臟大分子物質結合，引起肝細胞結構和功能的改變繼而壞死［13］。ANIT損傷肝細胞，不僅引起膜脂質過氧化反應，致使肝細胞變性、壞死。而且還直接損傷肝內膽管的內皮細胞，使之變性、腫脹、壞死，引起膽管阻塞，導致膽汁外溢，血中膽紅素明顯升高［14］。從本實驗結果可以看出，“雅解沙把”對CCl4、D－Glan、AAP、TAA和ANIT所引起的小鼠急性肝損傷均具有一定的保肝降酶作用。此外，項目組前期實驗研究發現，“雅解沙把”具有一定清除機體自由基的能力。綜合分析“雅解沙把”對這5種化學性肝損傷的實驗結果以及課題組前期研究結果，我們認為該藥保肝作用的重要機理可能與其抑制脂質過氧化過程、增加機體清除自由基能力有關，還可能與其能調節肝細胞核酸、蛋白質、糖類等物質正常代謝有關。綜上所述，我們認為“雅解沙把”并非僅僅作用于其中的某一種環節，而是對多種機制的多個環節都有影響，從而顯示其多成分、多途徑綜合作用的優勢。對于該方保護肝臟的具體作用機制的探討有待于進一步深入研究。

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