RP－HPLC法測(cè)定蒙藥巴斯日陶克巴中沒食子酸的含量

靖彩霞

(內(nèi)蒙古包頭市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，內(nèi)蒙古 包頭 014030)

巴斯日陶克巴水丸由訶子、草烏(制)、方海、黑云香、甘松等13味藥組成的復(fù)方制劑，其功能為通經(jīng)活絡(luò)，搜風(fēng)除濕，用于半身不遂，腰膝疼痛。本藥屬于蒙藥驗(yàn)方，訶子為處方中的主藥，為控制該制劑的質(zhì)量，保證臨床用藥安全、有效，本文參照《中國藥典》2005年版一部“五倍子”項(xiàng)下沒食子酸的含量測(cè)定方法［1］，選擇訶子所含成分沒食子酸進(jìn)行定量分析，結(jié)果表明該方法簡便、快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作為本制劑內(nèi)在質(zhì)量控制的有效方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器:SPECTRA SERIES P100泵，Spectra SERIES UV100型檢測(cè)器，中北工作站。惠普上分6010紫外分光光度儀。sartorious BP211D型電子天平。

1.2 試劑與試藥:沒食子酸對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號(hào):110831—200302，供含量測(cè)定用):甲醇為色譜純，水為高純水，其它試劑均為分析純。樣品(批號(hào):071120，071207，071216)為包頭市蒙中醫(yī)院提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件:色譜柱:色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，本實(shí)驗(yàn)研究采用Diamonsil(鉆石)C18柱(250mm×4.5mm，5μm);流動(dòng)相為甲醇 －0.1%磷酸溶液(15:85)，在該流動(dòng)相條件下，沒食子酸具有較好的分離度，理論板數(shù)較高，為5000以上。柱溫為室溫;檢測(cè)波長為273nm。

2.2 試液溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取沒食子酸對(duì)照品10mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密量取上述溶液5mL至100mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。取20μL注入色譜儀測(cè)定。見圖1。

2.2.2 供試品溶液的制備:取樣品，研細(xì)，精密稱取0.2g，置索氏提取器中，加入乙醚適量，加熱回流8小時(shí)，提取液回收乙醚至干，殘?jiān)檬兔?30～60℃)浸泡2次，每次10 mL(約浸泡2min)，傾去石油醚，殘?jiān)雍?.1%磷酸的甲醇溶液適量，使完全溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取20μL注入液相色譜儀測(cè)定。見圖2。

2.2.3 陰性對(duì)照液的制備:取除訶子外的其他處方量藥材，按制備工藝方法制備陰性樣品，按上述供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照液。見圖3。

圖1 (對(duì)照品)

圖2 (供試品)

圖3 (陰性對(duì)照)

2.3 線性關(guān)系考察:精密稱取沒食子酸對(duì)照品10mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取0.25、0.5、1、2、3、4 和 5mL，置 10mL 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件測(cè)定，以進(jìn)樣量對(duì)峰面積進(jìn)行回歸分析，結(jié)果沒食子酸在0.04915μg～0.983μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為:Y=8533716.034X+70750.9266 r=0.999。

標(biāo)準(zhǔn)曲線見表1，

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)值表

2.4 提取效率的考察:取樣品(批號(hào)071120)，研細(xì)，取3份，各0.2g，精密稱定，按樣品測(cè)定項(xiàng)處理，分別測(cè)定沒食子酸的含量。結(jié)果見表2。

表2 提取效率結(jié)果表

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一份樣品(批號(hào)071120)溶液，分別在 0h、2h、4h、8h、12h 進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表3。

表3 不同時(shí)間測(cè)定樣品中沒食子酸的峰面積積分值

從表中數(shù)據(jù)可見，沒食子酸在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn):取同一批號(hào)(071120)供試品6份，按樣品測(cè)定項(xiàng)處理，分別測(cè)定沒食子酸的含量，其RSD為1.5%。結(jié)果表明，本法重現(xiàn)性好。結(jié)果見表4。

表4 沒食子酸含量測(cè)定重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

2.7 加樣回收率試驗(yàn):取供試品(樣品批號(hào)071207，沒食子酸含量為:0.242mg·g－1)9 份，各約 0.1g，精密稱定，置索氏提取器中，并精密加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)品，按樣品測(cè)定的方法制備并測(cè)定。結(jié)果見表5。

表5 沒食子酸加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品的含量測(cè)定:取3批樣品，每批各3份，按樣品測(cè)定項(xiàng)處理，分別取供試品溶液、對(duì)照品溶液各20μL注入液相色譜儀測(cè)定。按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見表6。

表6 樣品中沒食子酸含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 提取溶劑的選擇中，參照試劑手冊(cè)中沒食子酸溶于水、醇、醚，不溶于苯、三氯甲烷及石油醚。故采用甲醇、乙酸乙酯、乙醚3種溶劑分別提取，結(jié)果顯示經(jīng)甲醇、乙酸乙酯提取后的分離效果不好，經(jīng)乙醚提取后用石油醚(30～60℃)洗滌，用甲醇溶解殘?jiān)梅宓姆蛛x度好。故本法采用乙醚作為提取溶劑。

3.2 該方法簡便、快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作為巴斯日陶克巴水丸內(nèi)在質(zhì)量控制的有效方法。

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典［S］.化學(xué)工業(yè)出版社，2005，6245 －46.

［2］中國醫(yī)藥公司上海化學(xué)試劑采購供應(yīng)站.試劑手冊(cè)［M］.上海科學(xué)技術(shù)出版社，1963，351－352.