高效液相方法測定給希古那－5中大黃素的含量

王曉娟

(錫盟藥檢所，內蒙古 錫林浩特 026000)

蒙成藥給希古那－5由紅花、大黃、赤瓟、高良姜、當歸等5味藥組成。處方中大黃為主藥成分，大黃素可作為給希古那－5中含量的指標成分。本文采用HPLC方法對大黃素進行測定。

1 儀器、材料與試劑

島津SIL－20A高效液相色譜儀。大黃素對照品由中國藥品生物制品檢定所提供;給希古那－5由西烏旗蒙醫院提供，給希古那－5模擬樣品自制。乙睛、甲醇為色譜純，水為高純水，其他試劑均為分析純。

2 含量測定

2.1 色譜條件:色譜柱天河 C18(250mm ×4.5mm，5μm);流動相乙腈－水－冰醋酸(65:35:1);檢測波長437nm;柱溫40℃。

2.2 提取方法及提取效率的考察

2.2.1 提取方法的選擇:取本品粉末約2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液5mL，置錐形瓶中，揮去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液10mL，超聲處理5min，加三氯甲烷10mL，加熱回流1小時，冷卻，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取3次，每次8mL，合并三氯甲烷液，以無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液揮干，殘渣用少量甲醇溶解，轉移至10mL量瓶中，用甲醇稀釋到刻度，即得。

2.2.2 提取效率的考察:稱取樣品粉末6份各約2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，加熱回流30min、60min各3份，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液5mL，置錐形瓶中，揮去甲醇，各加2.5mol·L－1硫酸溶液10mL，超聲處理5min，分別加三氯甲烷10mL，分別將第一次回流時間為30min、60min的各3份溶液再分別加熱60min、90min和120min，冷卻，移置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液用三氯甲烷提取3次，每次8mL，合并三氯甲烷液，以無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液揮干，殘渣用少量甲醇溶解，轉移至10mL量瓶中，用甲醇稀釋到刻度，即得。結果見表1。

表1 提取效率的考察表

從表中數據可見，第一次回流30min、第二次回流60、90和120min，大黃素的含量基本穩定且提取效率好，故2次回流提取時間分別定為30min、60min。

2.3 專屬性

2.3.1 精密稱取大黃素對照品 12.61mg、本品粉末 2.0g及模擬陰性對照樣2.0g，按2.2.1項下方法制備，分別取10μL注入液相色譜儀，進行測定。

2.3.2 測定結果:陰性對照色譜圖中在與大黃素對照品以及供試品色譜圖相對應的保留時間處無色譜峰出現，表明其他組分對大黃素的測定無干擾。

2.4 線性關系考察:大黃素 精密稱取大黃素對照品2.50mg置100mL量瓶中，分別加甲醇適量使溶解，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻(每1mL含25μg)精密吸取大黃素對照品溶液各 0.25、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0mL 置 10mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻 ，各取20μL，按上述色譜條件測定，以峰面積A對進樣量進行回歸分析，得大黃素回歸方程為 Y=988950X+5460，R2=0.9990;結果表明，大黃素在0.0125μg～0.4000μg范圍內呈良好的線性關系。

2.5 穩定性試驗:取同一份供試品，按2.2項下方法制備，精密量取10μL注入液相色譜儀，按2.1項下色譜條件條件測定，分別于0、2、4、8、12、24h 進樣，結果表明供試品在24h內穩定。見表2。

2.6 重復性試驗:取同一批號供試品(批號:20090405)6份，精密稱取 2.0g，按 2.2.1 項下方法制備，取 10μL 注入液相色譜儀，進行含量測定，測得大黃素含量為0.3165、RSD0.89%。

表2 不同時間測定樣品中大黃素的峰面積積分值

2.7 回收試驗:供試品溶液的制備 取供試品(批號20090405 含量 0.3165 mg·g－1)9 份，各約0.5g，精密稱定，分別置9個具塞錐形瓶中，在1～3、4～6、7～9號分別加入濃度為 3.035、6.07、8.93μg·mL－1的大黃素甲醇溶液，分別精密吸取上述溶液各20μL注入液相色譜儀進行測定。平均回收率分別為107.82、99.82、94.65%，RSD 為0.67、0.63、1.69%。

3 樣品含量測定

取本品2.0g，按2.2項下方法制備，取10μL注入液相色譜儀，按2.1項下色譜條件測定。結果見表3。

表3 樣品中大黃含量測定結果

4 小結

4.1 實驗結果表明:大黃素的檢測保留時間為9.85min;而陰性對照溶液在此處未出現檢測峰。說明樣品中的其他藥材不干擾大黃素的測定。

4.2 參照《中國藥典》2005年版一部“大黃”和“三黃片”含量測定項下的流動相和檢測波長，進行實驗，分離效果不好，故采用現在的流動相比例和檢測波長進行實驗。

［1］國家藥典委員會.中國藥典版一部［S］.化學工業出版社，2005，3、17、328

［2］國家藥典委員會.中國藥典二部［S］.化學工業出版社，2005，776

［3］內蒙古衛生廳.內蒙古蒙藥材標準［S］.內蒙古科學技術出版社，1986，448、498

［4］內蒙古食品藥品檢驗所.內蒙古蒙藥制劑規范第一冊［M］.內蒙古人民出版社，2007，39、226