燈盞花素片中燈盞乙素含量的HPLC法測定

邵 鑫，周 潔，姚 武

（1.黃山職業技術學院，安徽黃山245000；2.黃山學院化學化工學院，安徽黃山245041）

燈盞花素片中燈盞乙素含量的HPLC法測定

邵 鑫1，周 潔2，姚 武2

（1.黃山職業技術學院，安徽黃山245000；2.黃山學院化學化工學院，安徽黃山245041）

燈盞乙素是從中藥燈盞花中提取的黃酮類有效成分。用HPLC法測定燈盞花素片中燈盞乙素的含量，采用C8反相柱，流動相為乙腈∶水∶醋酸∶2%磷酸=20∶77.5∶2.0∶0.5（V/V）的混合溶液，流速1.2ml/min，檢測波長335nm。該方法在0.03-0.24μg的范圍內具有良好的線性關系，平均回收率為98.05%，相對標準偏差是1.9%。此方法快速、簡便，準確，可用于燈盞乙素的含量測定。

燈盞花素片；燈盞乙素；高效液相色譜法

燈盞花素片是燈盞花中提取的黃酮類有效成分制成的片劑，其主要有效成分為燈盞乙素(Seutellarin)，主要用于治療高血壓、腦栓塞等疾病。為了提高藥物的生物利用度，最大限度發揮藥效，需要建立準確可靠的檢測方法來控制產品質量、滿足臨床研究及藥代動力學研究的需要。燈盞乙素的定量測定方法，已有不少報道。比如用LC/MS/MS方法[1]定量測定，此種方法定性定量準確、靈敏度高，但需三級四級桿串聯質譜作為HPLC的檢測器，儀器昂貴無法推廣。有文獻報道了以甲醇、水、乙酸混合液作為流動相的HPLC方法，[2,3]但該方法保留時間較長，導致分析時間也較長。另有文獻以乙腈、水、乙酸為流動相，[4,5]改善了分離效果，保留時間縮短。本文探索了以乙腈+水+醋酸+磷酸為流動相，測定燈盞花素片中燈盞乙素的含量。實驗證明在最佳條件下，保留時間進一步縮短，且峰形良好，靈敏度進一步提高，得到了類似串聯質譜檢測器的效果，實現了對燈盞乙素的簡便、快速、準確測定。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Agilent1200高效液相色譜儀（四元泵，C8反相柱，六通閥進樣器，紫外可見光度檢測器，色譜工作站）。AL104型電子天平（上海天達儀器有限公司），SYC智能超級恒溫水槽（鞏義市英峪予華儀器廠），KQ-200VDB型雙頻數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），微孔濾膜（上海市新亞凈化器件廠）。

燈盞花素片（云南玉溪望子隆生物制藥有限公司），呈黃棕色。燈盞乙素標準品（上海融禾醫藥科技有限公司，純度>98%）。甲醇、磷酸為分析純，乙腈為色譜純。

1.2 實驗方法和色譜條件

取一定量的燈盞花素片于研缽中研成粉末，準確稱量100mg樣品，至于小燒杯中，加入甲醇適量溶解，超聲20min，冷至室溫，轉移至25mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻后微孔濾膜抽濾，回收濾液待用。

色譜條件：C8反相柱（4.6mm×150mm,5μm）；流動相為乙腈∶水∶醋酸∶2%磷酸=20∶77.5∶2∶0.5（V/V）；流速：1.2mL/min；檢測波長為335nm。燈盞乙素對照品和燈盞花素片試液的色譜曲線如圖1。

圖1 燈盞乙素標準品(A)和燈盞花素片(B)的HPLC曲線

2 結果與討論

2.1 線性關系考查

稱取20mg燈盞乙素對照品用甲醇溶解定容為25mL，再稀釋50倍，得到準確濃度的標準溶液，在上述色譜條件下依次進樣2、5、10、15、20μL。以燈盞乙素進樣量X（μg）與峰面積Y作線性回歸，得燈盞乙素進樣量X（μg）及峰面積Y的回歸方程為Y=351.9X+8.110，相關系數為r=0.9981，表明燈盞乙素在0.032μg-0.32μg間進樣量與峰面積呈良好的線性關系。

2.2 精密度實驗

連續對同一燈盞花素片樣品進行5次平行測定，測定結果的相對偏標準差RSD=0.51%，可見方法精密度良好。

2.3 回收率實驗

在已知燈盞乙素含量的燈盞花素片樣品中準確加入一定量的燈盞乙素標樣，按上述色譜條件進樣，平行測定5次，平均回收率為98.05%，相對標準偏差（RSD）為1.9%，結果見表1。

表1 回收率實驗數據

2.4 穩定性實驗

燈盞花素片穩定性實驗是將燈盞花素片按實驗方法超聲處理后，定容至25ml，取2ml稀釋到100ml，用0.45μm微孔濾膜過濾，所得濾液在室溫自然光下分別放置0h，1h，2h，14h，17h，31h后在相同色譜條件下進樣10μL進行測量，結果見表2，相對標準偏差為2.0%，說明方法穩定性良好。

表2 穩定性實驗結果

2.5 樣品測定

為25mL的樣品液2mL，分別都用甲醇稀釋到100mL，用0.45μm微孔濾膜過濾，按色譜條件進樣10μL，計算樣品中燈盞乙素的含量，結果見表3。

表3 燈盞花素片中燈盞乙素的含量（n=3）

3 結論

通過配制一定濃度的燈盞乙素對照品，用紫外分光光度計在220nm-500nm范圍進行光譜掃描，結果燈盞乙素在335nm處有最大吸收，所以紫外檢測器的波長選為335nm。

本文實驗采用流動相為乙腈∶水∶醋酸∶2%磷酸=20∶77.5∶2∶0.5（V/V），結果燈盞乙素對照品和燈盞花素片樣品在2.2min處均出現特征峰，與其它文獻比較，保留時間更短，提高了分析測定的速度，分析靈敏度也進一步提高。同時，燈盞花素片中的其它成分對測定沒有影響，證明此方法對燈盞乙素具有很好的專屬性。

[1]曲峻，王義明，羅國安，等.LC/MS/MS的多反應監測方法定量測定燈盞乙素[J].藥學學報，2000，35(2):139-141.

[2]馮紹華，楊振乾，張靜.HPLC法測定燈盞花素片中燈盞花乙素的含量，中國藥品標準，2005，6（5）：29-31.

[3]Xiong F,Wang H,Cheng J,Zhu J B.Determination of scutellarin in mouse plasma and different tissues by high-performance liquid chromatography.Journal of Chromatography B,2006,835(1,2):114-118.

[4]李廷釗，周萍，劉文庸，等.HPLC法測定燈盞細辛中燈盞花乙素的含量[J].中草藥，2004，35(11):1304-1305.

[5]王躍飛，潘桂湘，高秀梅，等.HPLC法同時測定不同產地燈盞細辛中4種有效成分的含量[J].藥物分析雜志，2009，29(3)：416-419.

責任編輯：胡德明

Abstract:Breviscapine is an active extract of flavonoids from traditional Chinese medicine Erigeron breviscapus(Vant.).An HPLC method for the determination of seutellarin in beviscapine tablets is reported.The sample is analyzed on a C8 column with a mobile phase containing acetonitrile(20%),water(77.5%),HAc(2%)and 2%H3PO4(0.5%).The flow rate and detection wavelength are 1.2 mL/min and 335 nm respectively.The calibration curve shows a good linearity within the range of 0.03-0.24μg.The average recovery is 98.05%and RSD is 1.9%.Being simple,rapid and accurate,this method can be used in the quantitative determination of scutellarin.

Key Words:breviscapine tablet;scutellarin;HPLC

Determination of Scutellarin in Breviscapine Tablets by HPLC

Shao Xin1,Zhou Jie2,Yao Wu2
(1.Huangshan Vocational College,Huangshan245000,China;2.School of Chemistry and Chemical Engineering,Huangshan University,Huangshan245041,China)

O657

A

1672-447X（2012）03-0053-002

2012-01-20

安徽省自然科學基金項目（11040606M41）；安徽省教育廳自然科學研究項目（KJ2010B215）；黃山學院博士人才啟動項目（2009xkjq001）

邵鑫（1965-），安徽黃山人，黃山職業技術學院高級講師，研究方向為植物資源有效成分。