超聲下觀察芎芍膠囊對心肌梗死大鼠缺血心肌血管新生的作用1）

陳宇寧，嚴 萍，林久茂，葉 盈，陳美華

梗死后心功能的變化與多因素有關，其中很重要的是與新生毛細血管的數量關系密切［1］。以往的研究提示，新生毛細血管的數量與血管內皮生長因子（VEGF）、堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）的表達呈正相關。本課題以能顯著促進血管新生的芎芍膠囊、丹參顆粒為干預措施，采用結扎大鼠冠狀動脈造成急性心肌梗死為缺血心肌實驗模型，以超聲檢查的指標代表心功能，研究心功能與促進毛細血管增生因子間的關系，以比較芎芍膠囊與丹參顆粒促進新生毛細血管的功效。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 SPF級SD雄性大鼠32只，月齡3月～4月，體重（300±20）g。由福建醫科大學實驗動物中心提供，實驗動物及實驗步驟符合國家實驗動物管理條例。

1.1.2 主要試劑 芎芍膠囊由北京西苑醫院提供，丹參顆粒由福建省第二人民醫院提供。

1.1.3 主要設備 TKR－200C小動物呼吸機由江西省特力麻醉呼吸設備公司提供；多功能生理記錄儀BL－420E型由成都泰盟儀器廠提供；GE SYSTEMⅤ超聲心動圖儀及5MHz多平面經食道超聲探頭由美國GE公司提供。

1.2 心肌梗死動物模型的建立 大鼠腹腔注射氯胺酮和安定復合麻醉后，取仰臥位，術區備皮消毒，氣管插管，呼吸機輔助通氣（300mL／min）。取第2肋間水平橫切口，剪斷胸骨，切開心包，暴露主動脈根部，鉗夾左前降支動脈暫時阻斷血流30min后，松開鉗夾的左前降支動脈，壓迫穿刺口止血，關胸復蘇。假手術組手術方法同上，但在冠狀動脈下穿線后打一松結。為防止術后感染，每天肌肉注射青霉素4×105U／只，連續3d。

1.3 動物分組與給藥 將32只大鼠分為假手術組（SO組）、模型組（AM組）、芎芍組（XS組）、丹參組（DS組），每組8只，分別用生理鹽水、芎芍膠囊、丹參灌胃給藥。

1.4 超聲心動圖儀檢測心功能的變化 SO組、AM組、XS組和DS組，分別于術后6周行心臟超聲系列檢測。具體方法如下：動物腹腔注射麻醉（方法同前）后，剔除胸部體毛，取仰臥位，應用超聲心動圖儀及5MHz多平面經食道超聲探頭進行體表經胸M型及二維超聲心動圖檢查，二維超聲掃查角度為15°～20°，深度2cm～3cm，以使幀數至少達到200Hz。調整多平面經食道超聲探頭聲束方向，取得腱索水平左心室短軸切面圖像，應用M型超聲心動圖連續測量3個不同心動周期左心室收縮末期內徑（LVESD）、舒張末期內徑（LVEED）、左室后壁厚度（LVPWT）、左心室射血分數（LVEF），取平均值。

1.5 小鼠AMI后VEGF、bFGF的表達 用ELISA法檢測心肌組織中VEGF、bFGF的含量，操作步驟參照試劑盒說明進行。

1.6 統計學處理 應用SPSS12.0軟件包進行統計分析。計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用One－WayANNOVA分析，方差齊者用LSD檢驗，方差不齊者用Game－Howell檢驗；兩組均數間比較采用成組t檢驗。

2 結 果

2.1 各組超聲心功能指標比較（見表1）

表1 各組超聲心功能指標比較（±s）

表1 各組超聲心功能指標比較（±s）

組別 n LVEED（mm） LVESD（mm） LVEF（%）8 4.16±0.06 1.98±0.09 79.14±2.40 AM組 8 6.72±0.11 5.30±0.07 25.56±0.86 XS組 8 4.65±0.131） 3.19±0.241） 48.85±0.641）DS組 8 5.31±0.101）2） 3.83±0.111）2） 38.76±0.681）2）SO組與AM組比較，1）P＜0.01；與XS組比較，2）P＜0.01

2.2 各組小鼠AMI后VEGF、bFGF的表達（見表2）

表2 各組小鼠AMI后VEGF、bFGF的表達（±s）

表2 各組小鼠AMI后VEGF、bFGF的表達（±s）

組別 n VEGF bFGF AM組8 49.37±3.08 12.97±1.32 XS組 8 100.16±2.441） 21.57±6.661）DS組 8 48.50±6.971）2） 13.00±1.901）2）與AM組比較，1）P＜0.01；與XS組比較，2）P＜0.01

2.3 相關性分析 VEGF、bFGF與LVEF呈正相關（r值分別為0.813、0.589，P＜0.01）。

3 討 論

AMI的心肌修復過程與血管狀態密切相關，梗死區內是否有血管迅速生成和（或）殘留血管的重新開放對心肌梗死的預后有十分重要的作用。促進缺血區血管新生是一種具有吸引力的新穎的治療策略，即通過刺激心肌缺血區小血管生長和側支循環的形成，實現心肌缺血區的“自我搭橋”。因此，血管新生已成為一種旁路生物學策略。這對相當數量的彌漫性冠脈病變以及難以接受傳統血管重建治療的患者，可能成為一種極具吸引力的治療模式［2］。

VEGF是一個密切相關的生長因子家族的總稱，它可由內皮細胞、平滑肌細胞等多種細胞產生。VEGF是迄今為止發現的唯一特異性促進血管內皮細胞有絲分裂的生長因子，由于內皮細胞增殖是血管形成的重要部分，故VEGF可在新生血管的形成過程中發揮重要作用［3］。bFGF是一種強的血管源性生長因子，可刺激成纖維細胞、血管內皮細胞、血管平滑肌細胞及神經細胞的生長［4］。目前，VEGF、bFGF對血管新生調控的研究備受矚目，兩者對促進血管新生具有協同作用。多項研究表明，某些中藥制劑，能通過提高缺血區域局部的VEGF、bFGF的表達，進而促進新生血管生成，改善心功能［5］。

以往的研究認為丹參是有著確切活血化瘀功效，能促進梗死區小血管新生，從而改善心功能［6］。這在本實驗中也觀察到了相應的效果，丹參組較假手術組LVEED、LVESD、LVEF有明顯的改善。芎芍膠囊在以往的研究發現能促進血管新生因子的表達［7］。而本實驗進一步發現，芎芍膠囊較丹參對心功能改善更明顯。而且芎芍膠囊促進缺血區域局部的VEGF、bFGF的表達較丹參組明顯。芎芍膠囊較丹參更有效促進促進缺血區域局部血管增生。

本研究在促進血管新生因子的具體機制方面，特別是各因子的上下游關系還未能剖析，期待將來的研究進一步闡明。

［1］王智慧，李智博，朱洪權，等.血管內皮生長因子在冠心病患者的表達及對心功能的影響［J］.中國實驗診斷學，2009 13（1）：72－74.

［2］羅怡軍，劉廠輝，曾艷輝，等.同種異體骨髓干細胞移植聯合VEGF干預對心肌梗死后左室功能的影響［J］.現代生物醫學進展，2009，9（8）：1490－1492.

［3］Lee SH，Wolf PL，Escudero R，etal.Early expression of angiogenes is factors in acute myocardial ischemia and infarction［J］.N Engl J Med，2000，342（9）：626－633.

［4］Iwai Kanai E，Hasegawa K，Fujita M，etal.Basic fibroblast growth factor protects cardiac myocytes from iNOS mediated apoptosis［J］.J Cell Physiol，2002，190（1）：54－62.

［5］王承龍，史大卓，殷惠軍，等.西洋參莖葉總皂苷對急性心肌梗死大鼠心肌VEGF、bFGF表達及血管新生的影響［J］.中國中西醫結合雜志，2007，27（4）：331－334.

［6］陳巖，楊關林，張哲，等.丹參注射液對心肌梗死后梗死區及周圍區血管再生的影響［J］.中華中醫藥學刊，2009，27（5）：976－977.

［7］林久茂，莊群川，許艷芳，等.芎芍膠囊對人臍靜脈內皮細胞分泌血管新生因子的影響［J］.世界中西醫結合雜志，2009，4（6）：390－392.