HPLC法測定牛蒡子中綠原酸的含量

趙 英周 凱張 靜浦中濱

(1.內蒙古人民醫院，內蒙古呼和浩特010020;2.內蒙古食品藥品檢驗所，內蒙古呼和浩特010010;3.內蒙古醫科大學，內蒙古呼和浩特010010)

HPLC法測定牛蒡子中綠原酸的含量

趙 英1周 凱2*張 靜3浦中濱3

(1.內蒙古人民醫院，內蒙古呼和浩特010020;2.內蒙古食品藥品檢驗所，內蒙古呼和浩特010010;3.內蒙古醫科大學，內蒙古呼和浩特010010)

目的:建立高效液相色譜法測定牛蒡子中綠原酸的含量，為綠原酸的藥用植物資源開發提供依據。方法:依利特C18色譜柱(5μm，4.6mm×250mm)，流動相為乙腈-0.4%磷酸(10∶90)，流速:1.0 mL·min-1;檢測波長:327nm;柱溫:30℃。結果表明:綠原酸在2.82μg·mL-1～56.40μg·mL-1范圍內與峰面積呈良好線性關系r=0.9999。平均回收率為100.2%，RSD=0.325%(n=6)。結論:該方法簡便、準確、靈敏度高、重現性好，為牛蒡子的內在質量控制提供實驗依據。

牛蒡子;綠原酸;高效液相色譜法;含量測定

牛蒡子為菊科植物牛蒡Arctium Lappa L.的干燥成熟的果實。主產于東北及浙江省，此外四川、湖北、河北、河南、陜西等省亦產。秋季果實成熟時采收果序，曬干，打下果實，除去雜質，再曬干。生用或炒用，用時搗碎，為常用中藥。藥性辛﹑苦，寒。歸肺﹑胃經。具有疏散風熱，宣肺祛痰，利咽透疹，解毒消腫等功效。主要治療風熱感冒，溫病初起;麻疹不透，風疹瘙癢;癰腫瘡毒，丹毒，痄腮，喉痹［1-2］。牛蒡子煎劑對肺炎雙球菌有顯著抗菌作用。水浸劑對多種致病性皮膚真菌有不同程度的抑制作用。牛蒡子有解熱﹑利尿﹑降低血糖抗腫瘤作用［3］。據有關文獻報道，牛蒡子中會有牛蒡苷，有機酸(綠原酸，咖啡酸等)及黃酮類［4］。綠原酸為本品清熱解毒，抗菌消炎的主要活性成分。故本實驗以高效液相色譜法對綠原酸進行了分析研究，為牛蒡子的質量控制提供實驗依據。

1 儀器與藥品

儀器:日本LC-10AVP高效液相色譜儀;檢測器:紫外可見檢測器;工作站:Shimadzu CLASS-VP色譜工作站。

試劑與試藥:綠原酸對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，批號:110753—200413(供含量測定用);乙腈為色譜純;水為超純水;其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件:依利特C18色譜柱(5μm，4.6mm×250mm);流動相:乙腈-0.4%磷酸(10∶90);流速:1.0 mL·min-1;檢測波長:327nm;柱溫:30℃。在此色譜條件下，分離度好，對照品及樣品色譜圖見圖1、2。

圖1對照品色譜圖

圖2供試品色譜圖

2.2 對照品溶液的制備:精密稱取綠原酸對照品1.88mg，置于棕色容量瓶中，加適量流動相溶解制成每1mL含綠原酸188μg的溶液。即得。

2.3 供試品溶液的制備:取牛蒡子藥材粉末(過60目篩)約0.5g，精密稱取，置具塞錐形瓶中，精密加入50%的甲醇50mL，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，即得。

測定方法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.4 線性關系考察:精密稱取綠原酸標準品1.88mg，置于10mL容量瓶中，加流動相溶解并定容至刻度。精密吸取0.15mL、0.9mL、1.2mL、1.5mL、2.3mL、3mL置10mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，分別吸取20μL進樣，按上色譜條件測定。結果峰面積Y與濃度之間呈良好的線性關系，回歸方程:Y=63723X+11305，r=0.9999﹙Y為峰面積積分值，X為濃度μg·mL-1).結果見表1。結果表明，綠原酸在2.82～56.40μg·mL-1范圍內與峰面積呈良好線性關系。

表1標準曲線測定結果

2.5 精密度測定:取牛蒡子粉末約0.5g，精密稱定，按供試品制備方法操作制備供試品溶液，連續進樣6次，測得綠原酸峰面積。結果見表2，結果表明儀器精密度良好。

表2精密度試驗結果

2.6 穩定性試驗:取牛蒡子樣品，按樣品制備項下方法制備供試品溶液，分別于0，1，2，4，6及8h進樣，記錄峰面積積分值并計算含量，供試品在8小時內穩定。結果如下:

表3穩定性實驗結果

2.7 重復性試驗:取同一批次牛蒡子粉末6份，精密稱定，每份取樣量約為0.5g。分別按樣品制備方法制備并測定每份的含量。結果見表，表明該方法線性良好。

表4重復性試驗結果

2.8 回收率試驗:取已知含量的牛蒡子粉末6份(綠原酸含量為0.305%)。每份加入綠原酸對照品0.7625mg。按照樣品制備方法操作測定每份樣品的含量，計算回收率。結果見表5。

表5回收試驗結果

2.9 樣品的測定:取不同產地及不同批次3批次牛蒡子樣品，按供試品溶液制備及測定方法處理并測定以上實驗證明:不同產地的牛蒡子，綠原酸含量在0.29%～0.31%之間。

表63批樣品含量測定結果

3 討論

3.1 牛蒡子為常用中藥，2010版中國藥典規定了本品中牛蒡苷的含量，但有關綠原酸在本品中的分析研究目前尚未有報道。本實驗研究證明:牛蒡子中含有較高的綠原酸，本實驗研究結果對牛蒡子的質量控制及開發利用提供了依據。

3.2 綠原酸對照品不穩定，配制應后置棕色瓶中避光放置或臨用時配置。

3.3 實驗參照文獻及《藥典》有關品種中綠原酸的提取方法［5］，比較了超聲提取和加熱回流提取兩種方法，結果表明，加熱回流提取效果優于超聲提取故選擇加熱回流提取方法。加熱回流30min即可達到提取完全。故選擇加熱回流提取方法，提取30min。

3.4 實驗根據文獻及中國藥典2010年版中有關綠原酸的測定波長均為327nm，經在200～700nm波長范圍內進行光譜掃描證明對照品及供試品均在327nm處有最大吸收。故選擇327nm為檢測波長，既可保證樣品測定，又可排除其它組分的干擾。

［1］Tsutomu W.Masabiro Y，Shigeo O.New sulfur-containing acetylenic compounds from Arctium lappa［J］.Agric Biol Chem，1986，50(2):263-269

［2］Tsutomu W.Hideroshi K.Yoshitomi I.Structures of Lappaphen-a and Lappaphen-b，new guaianolides linked with a sulfur containing acetylenic compound from Arctium lappa L［J］.Agric Biol Chem，1987，51(6):1475-1480

［3］高雪敏，中藥學［M］.北京:中國中醫藥出版社，2002:76-77

［4］王海燕，楊峻山.牛蒡子化學成分的研究〔J〕.藥學學報，1993，28(2)∶911

［5］國家藥典委員編.(中華人民共和國藥典)［S］.2010版一部，2010:329

2012年8月7日收稿

HPLC determination of Great Burdock Achene in the content of Chlorogenic Acid

Zhaoying1Zhoukao2Zhangjing3Puzhongbin3
(1.Inner Mongolia People’s Hospital Hohhot010020;2.Inner Mongolia Institute for Food and Drug Control;3.Inner Mongolia Medical University)

Objective:To determine the content of Chlorogenic Acid in Great Burdock Achene by HPLC for developing the medicinal resources of Chlorogenic Acid.Methods:An external standard method by HPLC with Discovery YILITE C18column(250 mm×4.6 mm，25 μm)was employed.The mobile phase was consisted of acetonitrile-0.4%phosphoric acid solution(10︰90)，at the flow rate of 1.0mL·min-1，the detection wavelength was 327 nm，column temperature was 30℃.Results:It showed good linearity in the range of 2.82～56.4μg·mL-1(r=0.9999).The content of Chlorogenic Acid in Great Burdock Achene was 0.343%，and the average recovery rate of Chlorogenic Acid was 100.2%，RSD=0.325%(n=6).Conclusion:The method is simple，accurate，sensitive and reproducible.Internal quality control of the Great Burdock Achene is provided as experimental evidence.

Great Burdock Achene;Chlorogenic Acid;HPLC;Content determination

R291.2

A文獻標志碼:1006-6810(2012)09-0044-03

周凱(1953-)，男，漢族，主任藥師，主要從事中蒙藥藥品檢驗與分析研究等。聯系電話:18647101153，郵箱:zhoukai1800@yahoo.com.cn