尖銳濕疣組織中p-Stat3和COX-2的表達(dá)*

尹光文，李孝輝，張恒坡，李旭陽(yáng)

鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院皮膚科 鄭州 450052

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3，STAT3)是JAK-STAT信號(hào)通路中的一種關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄因子，其酪氨酸位點(diǎn)被異常激活后形成p-Stat3(其磷酸化形式)，該信號(hào)通路的異常激活在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。環(huán)氧化酶2(cyclooxygenase-2，COX-2)是前列腺素合成的限速酶，在正常組織中多不表達(dá)，但在一些細(xì)胞因子、癌基因及促腫瘤劑等刺激下表達(dá)上調(diào)，參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[1]。尖銳濕疣(condylomata acuminatum，CA)是由人乳頭狀瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染所致的皮膚黏膜增生性病變，臨床上具有增生快、易復(fù)發(fā)的特點(diǎn)。目前，p-Stat3和COX-2的表達(dá)異常與CA的關(guān)系鮮見報(bào)道。作者采用免疫組化SP法檢測(cè)人CA和正常包皮組織中p-Stat3和COX-2蛋白的表達(dá)情況，探討它們?cè)贑A發(fā)病中的可能作用。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 43例CA患者均為鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院皮膚性病科門診病例，具有典型皮損特征，并經(jīng)組織病理學(xué)證實(shí)，其中男31例，女12例;年齡17 ～55(31.4 ±7.3)歲;病程20 ～108(54.7 ±13.6)d。取材前均未接受免疫治療，且無(wú)其他系統(tǒng)疾病。以32例泌尿外科門診手術(shù)切除的正常成年男性包皮作為對(duì)照。所有標(biāo)本取材后均置于40 g/L多聚甲醛溶液固定，石蠟包埋，連續(xù)4 μm厚切片。

1.2 CA和正常包皮組織中p-Stat3和COX-2蛋白的檢測(cè) 采用免疫組化SP法。p-Stat3兔抗人多克隆抗體購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，COX-2單克隆抗體、二抗、SP9001試劑盒及DAB顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)服務(wù)有限公司。操作按試劑盒步驟進(jìn)行，p-Stat3一抗按100倍稀釋，COX-2一抗按20倍稀釋。所有切片染色均采用相同條件，陽(yáng)性對(duì)照為已知p-Stat3和COX-2蛋白染色陽(yáng)性的組織切片，以PBS代替一抗作空白對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定 p-Stat3蛋白陽(yáng)性顯色為細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)淡黃色至棕褐色顆粒，COX-2蛋白陽(yáng)性顯色為細(xì)胞膜和胞膜附近的胞質(zhì)出現(xiàn)淡黃色至棕褐色顆粒。參照文獻(xiàn)[2]評(píng)分方法，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞百分比和著色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分。陽(yáng)性細(xì)胞百分比＜10%為0分，10% ～為1分，26% ～為2分，51% ～75%為3分，＞75%為4分。著色強(qiáng)度:不著色為0分，著淡黃色為1分，著黃色為2分，著棕褐色為3分。上述兩項(xiàng)分值的乘積為最后得分:0分為陰性(－)，1～4分為弱陽(yáng)性(+)，6～8分為陽(yáng)性(?)，9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性(?)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0進(jìn)行分析，應(yīng)用兩獨(dú)立樣本秩和檢驗(yàn)比較2種組織中p-Stat3和COX-2蛋白表達(dá)水平的差異，應(yīng)用Pearson列聯(lián)系數(shù)分析CA組織中2種蛋白表達(dá)的關(guān)聯(lián)性，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α =0.05。

2 結(jié)果

2.1 CA和正常包皮組織中p-Stat3和COX-2蛋白的表達(dá) 見圖1、表1。p-Stat3蛋白主要表達(dá)于棘細(xì)胞層和顆粒層角質(zhì)形成細(xì)胞的胞核中，正常包皮組織中p-Stat3無(wú)表達(dá)。COX-2蛋白主要表達(dá)于棘細(xì)胞層的中上部和顆粒層，正常包皮組織中僅有少量表達(dá)。

圖1 CA(A)和正常包皮組織(B)中p-STAT3和COX-2蛋白的表達(dá)

表1 CA和正常包皮組織中p-STAT3和COX-2蛋白的表達(dá)

2.2 CA組織中p-Stat3和COX-2蛋白表達(dá)的關(guān)聯(lián)性 見表2。43例CA組織中p-Stat3與COX-2表達(dá)呈正關(guān)聯(lián)。

表2 CA組織中p-STAT3和COX-2蛋白表達(dá)的關(guān)聯(lián)性分析

3 討論

STAT3是一種核轉(zhuǎn)錄因子，作為白細(xì)胞介素6信號(hào)傳遞中的急性反應(yīng)因子被發(fā)現(xiàn)并純化[3]。在一些細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子的刺激下，STAT3可通過(guò)酪氨酸激酶或絲氨酸激酶的活化，成為p-Stat3，并形成二聚體轉(zhuǎn)移入細(xì)胞核，調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄，在分子水平上影響細(xì)胞的增殖和凋亡[4]。作者的研究結(jié)果顯示，CA組織中p-Stat3蛋白的表達(dá)水平高于正常對(duì)照組織。推測(cè)HPV可能是通過(guò)JAK-STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路使STAT3活化，活化的STAT3(p-Stat3)表達(dá)增加，誘導(dǎo)抗凋亡基因、細(xì)胞周期控制基因及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和基質(zhì)金屬蛋白酶9的高表達(dá)[5]，從而增強(qiáng)細(xì)胞的分裂增殖能力，抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)血管形成，進(jìn)而促進(jìn)CA的發(fā)生發(fā)展。

Rodrigues等[6]報(bào)道COX-2一旦被誘導(dǎo)即可催化花生四烯酸氧化，形成前列腺素和高反應(yīng)活性的副產(chǎn)物，通過(guò)與受體偶聯(lián)的G蛋白作用，激活下游的磷脂酶C及蛋白激酶C途徑或鈣信號(hào)系統(tǒng)，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。該研究結(jié)果顯示，CA組織中COX-2的表達(dá)水平高于正常對(duì)照組織。推測(cè)可能是HPV通過(guò)基因整合使原癌基因激活和(或)抑癌基因失活，使COX-2的mRNA轉(zhuǎn)錄增加，這與郭穎等[7]報(bào)道的一致;也可能是HPV感染引起細(xì)胞增殖旺盛，導(dǎo)致局部相對(duì)缺氧，刺激COX-2的合成增加。COX-2的過(guò)表達(dá)可刺激細(xì)胞生長(zhǎng)、抑制細(xì)胞凋亡、刺激新生血管形成和抑制局部免疫功能等，從而影響細(xì)胞增殖[8]，促進(jìn)CA的發(fā)生發(fā)展。

該研究結(jié)果顯示CA組織中p-Stat3和COX-2蛋白的表達(dá)呈正關(guān)聯(lián)，表明COX-2蛋白的表達(dá)也可能與JAK-STAT信號(hào)通路異常激活有關(guān)。

總之，p-Stat3和COX-2蛋白在CA組織中的過(guò)表達(dá)及相關(guān)性結(jié)果提示，二者的共同作用可能促進(jìn)了CA組織過(guò)度增殖和凋亡異常，在CA發(fā)病中起重要作用。

[1]Ristimaki A，Sivula A，Lundin J，et al.Prognostic significance of elevated cyclooxygenase-2 expression in breast cancer[J].Cancer Res，2002，62(3):632

[2]陶小華，孟群，潘衛(wèi)利，等.尖銳濕疣患者皮損中SOCSI和PIASI的血表達(dá)及意義[J].中華皮膚科雜志，2007，40(5):283

[3]Lutticken C，Wegenka UM，Yuan J，et al.Association of transcription factor APRF and protein kinase Jak1 with the interleukin-6 signal transducer gp130[J].Science，1994，263(5143):89

[4]Bromberg JF，Wrzeszczynska MH，Devgan G，et al.Stat3 as an oncogene[J].Cell，1999，98(3):295

[5]尹光文，蔡丙杰，李敏，等.轉(zhuǎn)錄激活因子3、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1和增殖細(xì)胞核抗原在尖銳濕疣組織中的表達(dá)[J].中華皮膚科雜志，2008，41(5):301

[6]Rodrigues S，Nguyen QD，F(xiàn)aivre S，et al.Activation of cellular invasion by trefoil peptides and src is mediated by cyclooxygenase and thromboxane A2 receptor-dependent signaling pathways[J].FASEB J，2001，15(9):1517

[7]郭穎，李海，陳殷，等.環(huán)氧化酶-2和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在尖銳濕疣組織中的表達(dá)及臨床病理意義[J].實(shí)用醫(yī)技雜志，2006，13(21):3734

[8]王興鵬，徐選福，謝傳高，等.環(huán)氧化酶2對(duì)胰腺癌新生血管生成的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制[J].中華肝膽外科雜志，2002，8(9):552