雷米普利對急性血瘀模型大鼠血小板功能的影響

孟繁宇，施 慧

（1．吉林省人民醫院 心血管內科，吉林 長春130021；2．吉林大學中日聯誼醫院）

目前，雷米普利的臨床適應癥僅限于原發性高血壓及急性心肌梗死后出現的輕－中度心力衰竭。雷米普利是否具有抑制血小板功能尚未見報道。本文旨在通過研究不同劑量組急性血瘀模型大鼠的血小板粘附、聚集功能評價雷米普利在活血化瘀方面的作用，為擴大其臨床應用提供實驗依據。

1 材料與方法

1．1 實驗動物

Wistar大鼠，雌雄兼用，體重210～240g，由吉林大學白求恩醫學部實驗動物中心供給，合格證號：SCXK（吉）2003－0001。動物飼養于動物室內，室溫（20±2）℃，自由進食與飲水。

1．2 藥品與試劑

1．2．1 雷米普利（Ramipril）片 意大利 Aventis Pharma S．p．A生產，北京安萬特制藥有限公司包裝，批號：20080815，以0．5%羧甲基纖維素鈉配制成所需濃度。

1．2．2 血栓素B2（TXB2）及6－酮－前列腺素Fla（6－Keto－PGFla）試劑盒由北京美迪科生物技術有限公司提供，批號：20080825。

1．2．3 0．1%鹽酸腎上腺素注射液，北京永康制藥廠出品，批號：20081030。

1．3 主要儀器

1．3．1 LBY－NJ2型血小板聚集儀 北京普利生醫療器械廠。

1．3．2 LBY－F5血小板黏附儀 北京普利生醫療器械廠。

1．4 實驗方法

1．4．1 實驗分組及給藥 健康Wistar大鼠50只，隨機均分為5組，分組如下：①正常對照組：灌胃0．5%羧甲基纖維素鈉5ml／kg；②急性血瘀模型組：灌胃0．5%羧甲基纖維素鈉5ml／kg；③雷米普利小劑量組：灌胃 Ramipril 0．5mg／kg；④雷米普利中劑量組：灌胃 Ramipril 1mg／kg；⑤雷米普利大劑量組：灌胃Ramipril 2mg／kg；藥物組每天灌胃給藥1次，連續6d，正常對照組及急性血瘀模型組給予等體積0．5%羧甲基纖維素鈉。

1．4．2 大鼠急性血瘀模型的建立 第6d給藥30 min，除正常對照組大鼠外，其它各組大鼠均皮下注射0．1%腎上腺素0．8ml／kg，2h后將大鼠浸入冰水中5min，2h后再按0．6mL／kg注射一次0．1%腎上腺素以復制急性血瘀模型［1，2］。大鼠復制急性血瘀模型后禁食不禁水（包括正常對照組大鼠）12h。

1．4．3 觀測指標 第7d給藥后1h，每組動物以戊巴比妥鈉30mg／kg腹腔注射麻醉，腹主動脈取血，肝素抗凝，從加有抗凝劑的3ml全血以3 000r／min離心10min，取上層血漿用放免法測定血漿6－Keto－PGFla（代表PGI2）及TXB2（代表TXA2）；腹主動脈取血1ml，用3．8%的枸櫞酸鈉按1：9比例抗凝，1 000r／min離心10min，取20μl血漿加入到380μl血小板稀釋液中，混勻，滴入細胞計數板，靜置10min，在光學顯微鏡下計數血小板數。剩余血加入LBY－5F血小板黏附儀的球形玻璃瓶中按3．7r／min旋轉15min，取黏附后血漿20μl滴入細胞計數板，在光鏡下計數黏附后的血小板數，計算血小板黏附率（PA）【PA＝（黏附前血小板數－黏附后血小板數）／黏附前血小板數×100%】；腹主動脈取血1．5ml，用3．8%的枸櫞酸鈉按1：9比例抗凝，混勻，1 500r／min離心5min，所得上清為富血小板血漿（PRP），吸取200μl PRP注入放有攪拌子的比色杯中，置于后方的恒溫孔中備用。余下抗凝血以3 000r／min離心10min，所得上清為貧血小板血漿（PPP）。吸取第二次離心的上清液PPP 200μl注入比色杯中，置于檢測孔，自動檢測零點后取出PPP杯，插入PRP杯，用微量進樣器吸取配制好的血小板聚集劑二磷酸腺苷（ADP）11μl沿比色杯一角插入底部，迅速推入被測樣品中，以LBY－NJ2型血小板聚集儀按比濁法測定血小板聚集活性，求出1、3、5min的血小板聚集率（PAG）及最大血小板聚集率（MPAG）。

1．5 統計學方法

實驗數據處理采用SPSS11．0軟件，均以ˉx±s表示，進行組間t檢驗。

2 實驗結果

2．1 雷米普利對急性血瘀模型大鼠血小板黏附和聚集功能的影響

與正常對照組比較，急性血瘀模型組大鼠的血小板黏附率，1、3、5min血小板聚集率及最大血小板聚集率均明顯增高（P＜0．05或P＜0．01）。與急性血瘀模型組比較，雷米普利1、2mg／kg組均可使血小板黏附率及1、3、5min血小板聚集率和最大血小板聚集率明顯降低（P＜0．05或P＜0．01），見表1、2。

表1 雷米普利對急性血瘀模型大鼠血小板黏附活性的影響

表2 雷米普利對急性血瘀模型大鼠血小板聚集活性的影響

2．2 雷米普利對急性血瘀模型大鼠血漿PGI2及TXA2水平的影響

與正常對照組比較，急性血瘀模型組血漿TXA2含量明顯增加，PGI2含量及PGI2／TXA2比值明顯降低（P＜0．05或P＜0．01）。與急性血瘀模型組比較，雷米普利1、2mg／kg組均可使血漿TXA2含量明顯降低，PGI2含量及PGI2／TXA2比值明顯增高（P＜0．05或P＜0．01）；雷米普利0．5 mg／kg可使血漿PGI2含量及PGI2／TXA2比值明顯增高（P＜0．05），對血漿TXA2含量無明顯影響（P＞0．05），見表3。

表3 雷米普利對急性血瘀模型大鼠血漿PGI2及TXA2水平的影響

3 討論

研究表明，急性心梗患者由于冠狀動脈粥樣斑塊的破裂血管內皮受損，釋放組織因子、膠原纖維暴露，活化血小板，使血小板黏附、聚集功能明顯增強。同時活化的血小板對血液中的各種炎性因子的反應能力增強，進一步加速了黏附與聚集，大大加速血栓的形成。當急性心梗時血管內皮受到嚴重損傷時，內皮功能紊亂，導致內源性舒張因子：PGI2、NO、ADP酶等生成減少，對局部抑制血小板粘附、聚集的作用減弱，使得局部血小板易活化及聚集，功能亢進，而其釋放的TXA2等活化物質使病人血管和側支循環收縮，引起冠脈痙攣。活化的血小板釋放出：Ca2＋、ADP、TXA2，通過正反饋機制促進血小板的黏附與聚集，形成小血栓阻塞小動脈，導致心肌梗死。血栓形成過程消耗了大量的血小板，血小板數目的減少反映了血小板在梗死部位的消耗，由此可見血小板直接參與了心肌梗死的病理過程，血小板的功能狀態是急性冠脈綜合征病情進展和轉歸的重要指標［3］。現已知，前列環素（PGI2）和一氧化氮（NO）是對血小板激活最具特異性的兩種內皮源性抑制劑，最具特異性的激活劑為血栓素A2（TXA2）。上述環節和因子相互協調以調節血小板的功能，在血栓性疾病的形成中起重要作用。TXA2（血栓素A2）：是前列腺素G2和H2在血小板內血栓烷合成酶催化下生成的。因TXA2的不穩定性，以目前的技術水平難以直接測定TXA2，故國內外均以測定TXB2作為判斷其濃度的指標［4］。TXA2以自分泌和旁分泌的形式作用于脈管系統，具有較強的生物學活性，包括使血小板脫顆粒，促進血小板聚集，促進凝血和血栓形成［5］。同時TXA2還能引起血管收縮，使血管平滑肌細胞增殖肥大，導致血管內皮細胞功能紊亂。TXA2也能夠通過正反饋進一步刺激血小板的活化［6］。此外，血管內皮細胞中含有前列環素合成酶，可利用自身的花生四烯酸合成PGI2（前列環素），PGI2具有抗凝血、舒張血管和抑制平滑肌細胞增殖的作用。PGI2抑制血小板聚集的濃度大大低于抑制血小板黏附的濃度，既PGI2不但允許血小板參與血管輕微損傷的修復，而且同時又防止血栓形成。血小板釋放ADP、ATP、鈣離子及5－羥色胺等物質，也能促進PGI2合成。但當機體受到機械損傷、血流紊亂等理化因素影響時，內皮細胞結構被破壞，暴露出內皮下層組織，會引起血小板的活化，發生釋放反應，隨著血小板的激活，產生的TXA2增加，使PGI2／TXA2平衡失調，從而加速血栓形成［7］。本實驗結果表明，雷米普利可明顯降低血小板粘附及聚集功能，降低血漿TXA2水平，并明顯升高PGI2水平及PGI2／TXA2比值，提示其可能通過糾正PGI2與TXA2之間的平衡失調發揮抗血小板粘附和聚集作用，這對于預防冠狀動脈內血栓形成具有益處。

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［5］Masuda A，Mais DE，Oatis JE，et al．Platelet and vascular thromboxane A2／prostaglandin H2receptors［J］．Biochem Pharmacol．1991，42：537．

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［7］Vesterqvist O．Measurements of the in vivo synthesis of thromboxane and prostacyclin in humans［J］．Scand J Clin Lab Invest，1988，48（5）：401．