葛花多糖對(duì)X射線(xiàn)照射小鼠抗氧化應(yīng)激能力的影響

陳奕冰，柳鴻敏，馮艷群，李 路，吳巖林，李 靜

（吉林大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春130021）

放射治療是治療惡性腫瘤主要手段之一，但是其在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)也會(huì)對(duì)機(jī)體造成一定程度的損傷，包括氧化應(yīng)激損傷、造血系統(tǒng)的功能異常、免疫功能障礙等，因此，放射防護(hù)劑的應(yīng)用對(duì)保護(hù)患者正常組織，提高放射劑量，增加治愈率及醫(yī)護(hù)人員、其它人群的輻射防護(hù)具有重要意義［1］。

目前臨床應(yīng)用的輻射防護(hù)劑主要有以下幾類(lèi)：雌激素類(lèi)化合物、氨巰基化合物、雌激素類(lèi)化合物、硫辛酸類(lèi)化合物、細(xì)胞因子和植物多糖及中藥復(fù)方等［2－6］。天然植物毒副作用小、資源豐富，現(xiàn)已成為輻射防護(hù)藥物研究的新熱點(diǎn)，葛花為豆科植物葛（Pueraria lobata（Willd．）Ohwi）的干燥未開(kāi)放的花，主產(chǎn)湖南、河南、廣東等地資源豐富［7］。葛花具有解酒醒脾，治傷酒發(fā)熱煩渴、不思飲食、嘔逆吐酸、吐血、腸風(fēng)下血等功效［8］，是傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中最具代表性的解酒藥物。葛花的乙醇提取物能防治酒精性肝損傷能明顯減少模型動(dòng)物的肝臟系數(shù)、降低血清中的ALT和AST水平［9］。但有關(guān)葛花多糖的抗輻射作用研究較少。本文以X射線(xiàn)照射損傷小鼠為模型，觀察葛花多糖對(duì)照射損傷小鼠抗氧化應(yīng)激能力的影響，探討葛花多糖的抗輻射作用，為研究天然輻射防護(hù)劑的奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1．1 試驗(yàn)藥物制備

葛花購(gòu)自吉林大藥房，經(jīng)李平亞教授鑒定為豆科植物葛（Pueraria lobata（Willd．）Ohwi）的干燥花蕾。常規(guī)方法提取及純化葛花多糖。

1．2 主要試劑儀器

SOD試劑盒、GSH－px試劑盒、CAT試劑盒（南京建成生物工程研究所）；754紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì) （山東高密彩虹分析儀器有限公司）；（LD25－2低速自動(dòng)平衡離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠）。

1．3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組處理

健康昆明種雄性小鼠60只，體重（20±2）g，由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

常規(guī)喂養(yǎng)5天后，隨機(jī)分為6組，每組10只。除正常對(duì)照組和照射對(duì)照組外其余4組分別給予不同劑量的葛花多糖。①正常對(duì)照組：不照射，以蒸餾水代替藥物；②低劑量組：不照射，每天灌胃給藥（300mg／kg．bw．）；③高劑量組：不照射，每天灌胃給藥（600mg／kg．bw．）；④照射對(duì)照組：X 射線(xiàn)照射，以蒸餾水代替藥物；⑤低劑量照射組：X射線(xiàn)照射，每天灌胃給藥（300mg／kg．bw．）；⑥高劑量照射組：X射線(xiàn)照射，每天灌胃給藥（600mg／kg．bw．）。

連續(xù)給藥14d。末次給藥后以X射線(xiàn)對(duì)照射對(duì)照組、低劑量照射組、高劑量照射組小鼠進(jìn)行一次全身均勻照射，總劑量為5．0Gy，照射后24h將小鼠處死，取肝臟，用生理鹽水制成10%的組織勻漿，置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫?0］。

1．4 照射條件

小鼠經(jīng)X射線(xiàn)全身均勻照射，劑量率為1．0Gy／min，電壓180kV，電流18mA，濾板為0．5 mm Cu＋1．0mm Al，照射源距靶中心垂直距離50 cm，總劑量為5．0Gy。

1．5 小鼠肝臟組織中SOD、GSH－Px、CAT的活力的測(cè)定

按照試劑盒說(shuō)明書(shū)方法操作，測(cè)定小鼠肝臟組織中SOD、GSH－Px、CAT的活力。

1．6 小鼠肝臟組織中MDA含量的測(cè)定

采用硫代巴比妥酸（TBA）顯色法測(cè)定MDA的含量［11］。取10%的肝組織勻漿400μL于試管中，同時(shí)取同樣體積的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（MDA，10nmol／mL）做對(duì)照組，分別向上述溶液中加入20%的三氯乙酸2．5mL，混勻，再加入1%的TBA 1．0mL，混勻，沸水浴反應(yīng)40分鐘，用流水冷卻至室溫，2000rpm離心10min，吸取上清，在532nm下波長(zhǎng)下，用蒸餾水調(diào)零，1cm比色杯，測(cè)定吸光度值。

1．7 小鼠肝臟組織中蛋白含量的測(cè)定

采用考馬斯亮藍(lán)比色法［21］測(cè)定小鼠肝臟組織中蛋白含量。將肝組織勻漿用生理鹽水稀釋成1%的組織勻漿。取樣品30μl，加入0．97ml的生理鹽水，再加入3．0ml的考馬斯亮藍(lán)溶液，混勻，靜置10min。用1．0ml生理鹽水和3．0ml的考馬斯亮藍(lán)的混合液調(diào)零，在595nm波長(zhǎng)下，1cm比色杯測(cè)定吸光度值。

1．8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS16．0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0．05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 葛花多糖對(duì)X射線(xiàn)照射小鼠肝組織中SOD活力的影響

從表1可以看出照射對(duì)照組的SOD活力明顯低于正常對(duì)照組（P＜0．05），高劑量照射組的SOD活力明顯高于照射對(duì)照組（P＜0．05），低劑量照射組的SOD活力也高于照射對(duì)照組，但差異無(wú)顯著性。

表1 葛花多糖對(duì)X射線(xiàn)照射小鼠肝組織中SOD活力的影響 （±s）

表1 葛花多糖對(duì)X射線(xiàn)照射小鼠肝組織中SOD活力的影響 （±s）

＊P＜0．05與正常對(duì)照組相比 ΔP＜0．05與照射對(duì)照組相比

組別 n SOD（U／mgprot）正常對(duì)照組10 245．46±53．28低劑量組 10 245．19±53．08高劑量組 10 243．52±46．31照射對(duì)照組 10 136．98±30．73＊低劑量照射組 10 169．33±35．01＊高劑量照射組 10 192．13±59．22＊Δ

2．2 葛花多糖對(duì)X射線(xiàn)照射小鼠肝組織中GSHPx活力的影響

由表2可見(jiàn)，與正常對(duì)照組比較，照射對(duì)照組的GSH－Px活力明顯降低（P＜0．05），與照射對(duì)照組比較，高劑量照射組的GSH－Px活力明顯升高（P＜0．05），低劑量照射組的GSH－Px活力也高于照射對(duì)照組，但差異無(wú)顯著性。

表2 葛花多糖對(duì)X射線(xiàn)照射小鼠肝組織中GSH－Px活力的影響（x－±s）

2．3 葛花多糖對(duì)X射線(xiàn)照射小鼠肝組織中CAT活力的影響

從表3可以看出照射對(duì)照組CAT活力明顯低于正常對(duì)照組（P＜0．05），高劑量照射組的CAT活力明顯高于照射對(duì)照組（P＜0．05），低劑量照射組的CAT活力雖然高于照射對(duì)照組，但差異無(wú)顯著性。

表3 葛花多糖對(duì)X射線(xiàn)照射小鼠肝組織中CAT活力的影響（x－±s）

2．4 葛花多糖對(duì)X射線(xiàn)照射小鼠肝組織中MDA含量的影響

表4數(shù)據(jù)顯示照射對(duì)照組MDA含量明顯高于正常對(duì)照組（P＜0．05），高劑量照射組的 MDA明顯低于照射對(duì)照組（P＜0．05），低劑量照射組的MDA也低于照射對(duì)照組，但差異無(wú)顯著性。

表4 葛花多糖對(duì)X射線(xiàn)照射小鼠肝組織中MDA含量的影響（x－±s，n＝10）

3 討論

從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，與正常對(duì)照組比較，照射對(duì)照組小鼠肝組織中的SOD、GSH－Px和CAT的活力顯著降低，說(shuō)明X射線(xiàn)照射后小鼠的抗氧化酶的水平顯著下降，各種自由基對(duì)正常組織細(xì)胞的損傷隨之增多，而丙二醛含量的升高也證實(shí)了這結(jié)論，此結(jié)果也說(shuō)明X射線(xiàn)損傷小鼠模型的建立是成功的。與正常對(duì)照組比較，葛花多糖的高劑量和低劑量給藥組小鼠的各項(xiàng)氧化指標(biāo)沒(méi)有顯著差別，提示本實(shí)驗(yàn)選擇的兩個(gè)劑量未對(duì)小鼠產(chǎn)生毒性。葛花多糖高劑量照射給藥組小鼠肝組織中的SOD、GSH－Px和CAT活力顯著升高，MDA顯著下降，提示葛花多糖能逆轉(zhuǎn)X射線(xiàn)照射損傷小鼠的SOD、GSH－Px、CAT活性的降低，清除輻射產(chǎn)生的自由基從而降低丙二醛（MDA）的含量提高機(jī)體的防御能力，提示葛花多糖可能是通過(guò)提高抗氧化酶體系活力、減輕自由基對(duì)組織細(xì)胞的損傷來(lái)發(fā)揮作用的。由于本實(shí)驗(yàn)是在對(duì)小鼠給藥14天后才進(jìn)行照射的，因此實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示高劑量葛花多糖增強(qiáng)X射線(xiàn)照射小鼠抗氧化應(yīng)激能力，對(duì)小鼠x射線(xiàn)損傷具有一定的預(yù)防保護(hù)作用，葛花資源豐富可作為輻射防護(hù)劑進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)。

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