紫葉矮櫻組培快繁技術(shù)的研究

楊 燕，楊亞平

（1.晉中職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山西 晉中 030600；2.山西潞安礦業(yè)集團(tuán)公司林業(yè)處，山西 長(zhǎng)治 046204）

紫葉矮櫻組培快繁技術(shù)的研究

楊 燕1，楊亞平2

（1.晉中職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山西 晉中 030600；2.山西潞安礦業(yè)集團(tuán)公司林業(yè)處，山西 長(zhǎng)治 046204）

以紫葉矮櫻的帶芽莖段為外植體進(jìn)行研究，結(jié)果表明，外植體消毒采用5%NaClO處理20min，效果最好，3月下旬到4月中旬為最適取材季節(jié)，啟動(dòng)培養(yǎng)以1/2MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.05mg/L為最佳組合培養(yǎng)基配方，生根培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基為1/2MS+IBA1.0mg/L+IAA1.0mg/L,其次為1/2MS+NAA1.5mg/L.

紫葉矮櫻；組織培養(yǎng)；離體快繁

紫葉矮櫻（Prunus×cistena‘Pissardii'）系紫葉李和矮櫻雜交種，薔薇科（Rosaceae）,李屬（Prunus），是世界著名的觀賞樹(shù)種，在園林綠化中占有重要位置.進(jìn)行紫葉矮櫻的組織培養(yǎng)，選擇適宜的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)方法，為紫葉矮櫻的大批量快速繁殖提供理論依據(jù)，指導(dǎo)生產(chǎn)具有重要意義.

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 材料及條件

供試材料為山西太谷龍崗莊園經(jīng)濟(jì)林基地的二年生紫葉矮櫻嫁接苗(山桃為砧木)，取紫葉矮櫻帶芽莖段為外植體，以MS、1/2MS、B5、WPM為基本培養(yǎng)基.該實(shí)驗(yàn)在山西農(nóng)大林學(xué)院實(shí)驗(yàn)苗圃組培室進(jìn)行.

1.2 試驗(yàn)步驟及方法

1.3 試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用SAS for windows統(tǒng)計(jì)分析軟件包對(duì)實(shí)驗(yàn)觀測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析,LSD檢驗(yàn).

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 不同消毒方法對(duì)外植體啟動(dòng)的影響

試驗(yàn)中對(duì)NaClO滅菌設(shè)計(jì)了 3%、5%、7%、10%四個(gè)濃度梯度，4種消毒處理方法對(duì)外植體的啟動(dòng)結(jié)果有較大差異.5%NaClO（有效CL%≥0.5%）消毒液處理后的污染率為6.67%，死亡率為0，啟動(dòng)率為93.33%，整體表現(xiàn)為消毒效果最好.這與Found[1]等（1995）的研究結(jié)果一致.

表1 啟動(dòng)培養(yǎng)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案

2.2 不同取材季節(jié)對(duì)外植體啟動(dòng)的影響

本試驗(yàn)分別在2006年3月下旬、4月中旬、5月下旬、7月上旬、9月中旬取材，進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)，3月下旬到4月中旬所取材料的污染率在5-8%，死亡率在10%左右，啟動(dòng)率在81-85%，整體優(yōu)于其它幾個(gè)時(shí)間段.F.Enjalric等(1988)在對(duì)三葉膠初級(jí)培養(yǎng)污染的研究中發(fā)現(xiàn)高溫、多雨的環(huán)境更有利于污染的發(fā)生，而且隨著植物材料年齡的增長(zhǎng)，植物材料的健康狀況不斷惡化，組培污染也會(huì)更加嚴(yán)重[2].由此可見(jiàn)，3月下旬到4月中旬為紫葉矮櫻外植體最適取材季節(jié).

2.3 不同培養(yǎng)基對(duì)紫葉矮櫻分化芽及啟動(dòng)率的影響

外植體接入培養(yǎng)基后，生長(zhǎng)情況各異，試驗(yàn)中，變化最明顯的是1/2MS培養(yǎng)基添加不同激素配比的組合，于7月14號(hào)下午接種，18號(hào)觀察芽長(zhǎng)和莖高已經(jīng)見(jiàn)長(zhǎng)，具體結(jié)果見(jiàn)表2.

對(duì)表2中啟動(dòng)率的結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果見(jiàn)表3.

表2 啟動(dòng)培養(yǎng)結(jié)果

表3 啟動(dòng)率的方差分析

由表3知，因素A（培養(yǎng)基）對(duì)啟動(dòng)率的影響極顯著，因素B（6-BA）對(duì)啟動(dòng)率的影響顯著，分別對(duì)其進(jìn)行多重比較，采用LSD檢驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表4.

表4 培養(yǎng)基和6-BA 4水平顯著性檢驗(yàn)(0.05)

由表4可得出，因素A（培養(yǎng)基）1/2MS和MS、WPM差異不顯著，MS、WPM可以替換1/2MS，根據(jù)均值大小，選取1水平，即培養(yǎng)基為1/2MS時(shí)，對(duì)啟動(dòng)率的作用效果最好.這三者均和B5差異顯著.因素 B（6-BA）4 水平和 3、2、1 水平間差異顯著，3、2、1三水平間差異不顯著，即6-BA2.0mg/L為最適合的6-BA濃度.

本試驗(yàn)方差分析表明，最優(yōu)處理組合應(yīng)為A1B4,因素C（NAA）F檢測(cè)不顯著，其水平可任取.

對(duì)表2中分化芽平均長(zhǎng)的結(jié)果進(jìn)行方差分析，因素A（培養(yǎng)基）、因素B(6-BA)對(duì)分化芽長(zhǎng)的影響作用極顯著，因素C（NAA）的影響作用顯著，分別對(duì)其進(jìn)行多重比較，可得出，因素A（培養(yǎng)基）1、2、3水平間差異不顯著，和4水平差異顯著，從均值來(lái)分析，1/2MS培養(yǎng)基為最好的基本培養(yǎng)基.因素B(6-BA)3水平和4水平、1水平差異顯著，從均值來(lái)分析，3水平效果最好，即6-BA1.5mg/L.濃度過(guò)高過(guò)低都不利于芽子生長(zhǎng).因素C（NAA）4水平間差異顯著，1水平和3、4水平及顯著，和2水平差異顯著，2水平和3、4水平差異極顯著.從均值來(lái)分析，1水平效果最好，即NAA0.05mg/L.

本試驗(yàn)方差分析表明，最優(yōu)組合為A1B3C1，即最優(yōu)組合為 1/2MS，6-BA1.5mg/L，NAA0.05mg/L.

綜合以上分析，在紫葉矮櫻啟功培養(yǎng)中，最適合的培養(yǎng)基配方為1/2MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.05mg/L.

2.2 生根培養(yǎng)基的篩選

將高、壯的紫葉矮櫻無(wú)根苗接種于生根培養(yǎng)基上，一周后開(kāi)始出現(xiàn)乳白色根芽，20d時(shí)觀察生根情況，統(tǒng)計(jì)平均生根數(shù)，計(jì)算生根率，其結(jié)果見(jiàn)表5.

表5 不同培養(yǎng)基生根結(jié)果

對(duì)表5的每組數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和LSD檢驗(yàn)，綜合平均生根數(shù)、生根率、根生長(zhǎng)情況三方面因素，認(rèn)為1/2MS+IBA1.0mg/L+IAA1.0mg/L最適于紫葉矮櫻生根，IBA具有很好的誘發(fā)根原基形成的能力，IBA和IAA又具有不同的生理活性，二者配合使用，可以達(dá)到很好的生根效果，但濃度過(guò)高過(guò)低均對(duì)根的形成、生長(zhǎng)不利，濃度范圍在1.0～1.5mg/L時(shí)利于紫葉矮櫻生根.其次，利于紫葉矮櫻生根的培養(yǎng)基組合為1/2MS+NAA1.5mg/L.

3 小結(jié)

綜合上述試驗(yàn)結(jié)果和分析，紫葉矮櫻快速繁殖技術(shù)體系要點(diǎn)如下:

3.1 外植體啟動(dòng)情況

1.外植體的消毒以5%的NaClO消毒20min處理效果最佳.

2.外植體取材以3月下旬到4月中旬效果最佳.此時(shí)外植體積累了較豐富的內(nèi)源激素，抵抗病菌的能力強(qiáng)或有些病菌還沒(méi)有活躍起來(lái)，污染率低，啟動(dòng)率高.

3.以 1/2MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.05mg/L為最優(yōu)啟動(dòng)培養(yǎng)基組合.

3.2 生根培養(yǎng)

最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA1.0mg/L+IAA1.0mg/L，其次為 1/2MS+NAA1.5mg/L.一周后 1/2MS+IBA1.0mg/L+IAA1.0mg/L中有根長(zhǎng)出，20d后平均生根數(shù)為2～5.4條，生根率為48.6～94.7%.

〔1〕Found M M,Gomaa A H,El Zaher M H A,et al.Factors influencing in vitro establishentand multiplications stages of peach[J].Acta Horticulture,1995,(409):191-196.

〔2〕Enjalric,F，Carron,M.P.＆.Lardet,L.Contamination of primary cultures in tropical areas：The case of Hevea brasiliensis.Acta Horticulturae，1988,225:57-65.

〔3〕陳振光.園藝植物離體培養(yǎng)學(xué)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,1996.

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1673-260X（2012）02-0047-03