VEGF和CD44v6過表達與乳腺癌浸潤轉移的關系

瞿峰

腫瘤細胞的浸潤與轉移是一個復雜的過程，其中腫瘤的血管生成及癌細胞與間質的黏附作用是重要的影響因素。近年的研究表明，血管內皮細胞生長因子 (vascular endothelial cell growth factor，VEGF)參與了腫瘤的脈管生成和浸潤轉移等過程［1］。CD44v6作為黏附分子CD44的主要成員之一，參與細胞與細胞、細胞與間質之間的黏接，與多種惡性腫瘤浸潤轉移有關［2］。本研究采用免疫組織化學法檢測乳腺癌組織中VEGF和CD44v6在乳腺癌中的表達，探討VEGF和CD44v6在乳腺癌轉移中的可能作用。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選取2008—2010年我院病理科確診的原發乳腺導管浸潤癌手術切除的存檔石蠟標本92例，其中有、無淋巴結轉移病例分別為55例、37例?；颊呔鶠榕?，術前未行放、化療，中位年齡47.8歲。按照李樹玲主編的《乳腺腫瘤學》的診斷標準［3］，復查全部切片。另取45例同期乳腺癌手術切除癌旁組織作為對照。

1.2 方法 鼠抗人VEGF單克隆抗體、鼠抗人CD44v6單克隆抗體及相應二抗試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。采用免疫組織化學SP法對全部病例進行染色，嚴格按照試劑說明書操作，兩種一抗稀釋度均為1:100。同時取已知陽性組織作對照，以PBS替代一抗作為陰性對照。

1.3 結果判定 VEGF蛋白陽性表達均主要定位于細胞質;CD44v6蛋白陽性表達主要定位于細胞膜，少數見于胞質。根據染色強度和陽性細胞百分比進行半定量的綜合計分。即隨機選取5個高倍鏡視野計數陽性細胞百分比的平均數，無陽性細胞計0分，≤25%計1分，26% ～50%計2分，51% ～75%計3分，＞75%計4分;著色強度以多數陽性細胞呈現的染色計分，無著色計0分，淡黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分;將陽性細胞百分比和著色強度兩者的計分相加，0～2分為陰性 (－)，≥3分為陽性 (+)。

1.4 統計學方法 應用SPSS 13.0統計學軟件，采用χ2檢驗及Fisher確切概率法進行統計學處理，以P＜0.05有統計學意義。

2 結果

2.1 VEGF的表達 VEGF蛋白陽性反應定位于細胞質，呈棕黃色顆粒。VEGF蛋白在正常乳腺組織和乳腺癌組織中的陽性表達率分別為6.7%(3/45)和90.2%(83/92)(P＜0.05，見表1)，而且VEGF在淋巴結轉移組中的陽性表達率 (53/55)明顯高于無淋巴結轉移組 (P=0.016，見表2)。

2.2 CD44v6的表達 CD44v6蛋白陽性反應定位于細胞膜，呈棕黃色顆粒。CD44v6蛋白在正常乳腺組織和乳腺癌組織中的陽性表達率分別為8.9%(4/45)和85.9%(79/92)(P＜0.05，見表1)，而且CD44v6在淋巴結轉移組中的陽性表達率(51/55)明顯高于無淋巴結轉移組 (P=0.021，見表2)。

2.3 VEGF和CD44v6表達的關系 VEGF和CD44v6的表達呈正相關關系 (r=0.497，P＜0.05，見表3)。

表1 VEGF和CD44v6在正常乳腺組織和乳腺癌中的表達〔n(%)〕Table 1 VEGF and CD44v6 in normal breast tissue and breast carcinoma

表2 乳腺癌組織中VEGF和CD44v6的表達與淋巴結轉移的關系Table 2 VEGF and CD44v6 expression and lymph node metastasis in breast cancer tissue

表3 乳腺癌組織中VEGF和CD44v6表達的關系Table 3 Relationship between the expression of VEGF and CD44v6 in breast cancer tissue

3 討論

乳腺癌的浸潤與轉移是導致臨床治療失敗的主要原因，其中，新血管的生成是重要的影響因素。VEGF是一種重要的促脈管生成因子，具有促進血管內皮細胞分裂、增殖及血管生成的能力［4］。本實驗中VEGF在乳腺癌組織中高表達，而且淋巴結轉移組乳腺癌VEGF的表達水平明顯高于無淋巴結轉移組，與國內研究結果一致［5］。提示癌細胞通過產生VEGF促進淋巴管形成，新生的淋巴管壁具有高通透性，使腫瘤細胞容易進入淋巴管隨著淋巴回流至淋巴結，而使其容易完成淋巴結轉移。同時，VEGF促進腫瘤血管內皮細胞增殖，導致腫瘤血管數量增加，不僅為腫瘤的生長提供營養，而且為腫瘤細胞的轉移提供通道。因此，腫瘤血管生成對淋巴轉移具有間接促進作用。這說明VEGF隨著乳腺癌進展及淋巴結轉移，其陽性表達升高，可作為臨床參數進行預后評估。

CD44v6作為黏附分子CD44的主要成員，與多種惡性腫瘤浸潤轉移有關。目前認為CD44v6主要參與瘤細胞與宿主基質的黏附，黏附在癌細胞侵襲和轉移過程中起促進作用。研究顯示，CD44v6的過度表達與乳腺癌等的發生發展、侵襲和轉移有關［6－7］。本研究發現CD44v6在乳腺癌組織中高表達，且與腋窩淋巴結轉移有密切的關系。這提示CD44v6作為黏附分子，參與了乳腺癌的發生發展和浸潤轉移過程，其使癌細胞與間質間有更強的黏附能力，同時使癌細胞逃避機體的免疫監測的能力，從而使癌細胞更容易發生轉移。因此，CD44v6的過度表達是乳腺癌變及浸潤轉移的一個重要因素，檢測淋巴結中CD44v6的表達可能成為早期診斷乳腺癌的指標之一。

從VEGF與CD44v6蛋白的表達發現，VEGF和CD44v6的表達在乳腺癌組織中同時出現表達上調，存在正相關關系，并且均與淋巴轉移有關，提示兩者可能在乳腺癌的遠處轉移中起協同作用。因此VEGF和CD44v6蛋白可以作為判斷乳腺癌轉移能力的生物學指標。

1 甲狀腺乳頭狀癌VEGF、MMP－9及COX－2蛋白表達與淋巴道轉移和血管生成的相關性 ［J］.腫瘤防治研究，2010，37(4):441－444.

2 Heider KH，Kuthan H，Stehle G，et al.CD44v6:a target for antibody － based cancer therapy［J］.Cancer Immunol Immunother，2004，53(7):567－579.

3 李樹玲.乳腺腫瘤學［M］.北京:科學技術文獻出版社，2000:337－340.

4 Saad RS，Kordunsky L，Liu YL，et al.Lymphatic microvessel density as prognostic marker in colorectal cancer［J］.Mod Pathol，2006，19(10):1317－1323.

5 羅彬，秦蓁，王旭東.肺癌MMP－9和VEGF表達與微血管密度的關系及意義［J］.現代預防醫學，2011，38(7):1338－1345.

6 田斌，?；?乳腺癌組織CD15和CD44V6及PCNA表達及其臨床意義 ［J］.中華腫瘤防治雜志，2009，16(14):1082－1085.

7 段秀方，鐘容，簡莉人.CD44v6、E－Cadherin在乳腺癌中的表達及意義［J］.中國婦幼保健，2010，25(23):3332－3334.