龍葵對四氯化碳致小鼠急性肝損傷的保護作用

劉穎姝，劉芳萍，李昌文，周 瓊，李 睿，張秀英，趙玉林

(1.東北農業大學動物醫學學院，哈爾濱 150030;2.中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所，哈爾濱 150001)

龍葵為茄科植物龍葵(Solanum nigrum)或少花龍葵(S.photeinocarpum Nakamura et Odashima)的干燥全草，分布于我國南北各省區，廣東省各地均有出產，民間應用廣泛［1］。作為傳統中藥的龍葵其藥理作用主要有以下幾個方面:抗腫瘤作用、抑菌和抗病毒作用、抗炎與抗休克作用、神經藥理作用以及泌尿系統的藥理作用［2］。而龍葵在治療肝損傷方面卻未見報道。最近一些研究證明，龍葵的提取物中包含有幾種抗氧化劑:五倍子酸、原兒茶酸、兒茶酸、蘆丁等。體外試驗中已經證實這些成分都有較強的抗氧化活性［3］。這些抗氧化的成分可以使龍葵作為一種抗氧化的藥物在氧化損傷引起的疾病中起到積極的作用。本試驗研究了龍葵對CCl4所致急性肝損傷的保護作用。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 分析純CCl4。市售精制花生油。龍葵全草，購自哈爾濱市三棵樹中藥材批發市場。水飛薊素，德國馬博士大藥廠。丙氨酸氨基轉移酶(ALT)試劑盒、草氨酸氨基轉移酶(AST)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所。旋轉蒸發儀，型號:R205，上海申勝生物技術有限公司。真空干燥箱，型號:DZF—6050，上海一恒科學儀器有限公司。紫外分光光度計，型號:756p，上海光譜儀器有限公司。

1.2 試驗動物 昆明系小鼠，體重(20±2 g)，雄性，清潔級，購自哈藥集團制藥總廠試驗動物中心，許可證號:SCXK(黑)2006-007。小鼠適應性飼養5～7 d，自由攝食和飲水，溫度保持18～20℃，自由光照，相對濕度40% ～60%，定時通風換氣。

1.3 龍葵提取物的準備 干龍葵800 g放在5000 mL水中浸泡30 min，然后100℃連續熱提取40 min。濾過水提物后經旋轉蒸發儀90℃水域濃縮直至成為乳狀，隨后放入真空干燥箱中烘干(溫度為70℃)。最終獲得185 g粉末(為初始重量的23.125%)。試驗中的濃度都是基于干重的提取物。

1.4 動物分組 將60只小鼠隨機分成六組，分別為:正常對照組、模型組、藥物組(龍葵高、中、低)、陽性對照組(水飛薊素)。水飛薊素組給藥濃度為0.2 g/kg［4］，龍葵高、中、低劑量組給藥濃度分別為1.5、1.0、0.5 g/kg。試驗過程中正常組和模型組給予生理鹽水。灌胃劑量均為10 mL/kg［5］。試驗期間所有小鼠標準飲食，自由飲水。第7 d給藥后，禁食16 h后染毒。藥物組和模型組用0.35%的CCl4油溶液，正常組用生理鹽水，灌胃劑量均為10 mL/kg［5］。

1.5 檢測指標 染毒24 h后眼球采血，血液3000 r/min，離心10 min，分離血清;剖檢取肝臟，肉眼觀察其病變后，手動做成勻漿。組織勻漿后用3000 r/min，離心15 min，取上清液。參照各個試劑盒的說明書，檢測血清中的ALT、AST和組織中的MDA、SOD和 GSH-Px。

1.6 統計學處理 使用SPSS17.0統計軟件進行生物學分析，結果用平均數±標準差表示，多組數據間比較采用單因素方差分析，P＜0.05表示差異顯著有統計學意義;P＜0.01表示差異極顯著有統計學意義。

2 結果

2.1 各組小鼠肝重和肝體比的變化 各組小鼠肝重和肝體比的變化見表1。與正常對照組比較，模型組、龍葵各劑量組、陽性藥物組小鼠肝重和肝體比無顯著性差異(P＞0.05)。由此可見，藥物和毒物的刺激不能引起小鼠臟器的嚴重損傷。

表1 小鼠肝重、肝體比的影響±s，n=10)

表1 小鼠肝重、肝體比的影響±s，n=10)

1.090 ±0.14 4.823 ±0.69模型組 0.992 ±0.34 4.571 ±0.34陽性對照組 1.075 ±0.07 4.886 ±0.28龍葵高劑量組 0.980 ±0.10 4.622 ±0.18龍葵中劑量組 1.097 ±0.08 4.728 ±0.27龍葵低劑量組/%正常組組別 肝重/g 肝體比1.067 ±0.13 4.659 ±0.30

2.2 病理剖檢變化 大體觀察發現，陽性藥物組與正常對照組小鼠肝臟表面光滑、有彈性、色澤紅潤。模型組肝臟顏色略黃無光澤，質地較脆且表面有彌漫粟粒狀小點。龍葵組隨著給劑量的增大病變逐漸減輕，且最大劑量時接近正常水平。

2.3 龍葵對小鼠生化指標的影響 各組小鼠血清中ALT、AST及肝組織中SOD、MDA、GSH-Px變化見表2。通過統計學分析可以看出，與模型組相比較，正常組、陽性對照組、龍葵高劑量組都顯示差異極顯著(P＜0.01);與正常組相比，龍葵高劑量組、陽性藥物組均無顯著性差異(P＞0.05);龍葵高劑 量組與陽性藥物組之間也無顯著性差異(P＞0.05)。

表2 各組小鼠血清ALT、AST及肝組織SOD、MDA、GSH-Px變化 (

3 討論

本試驗選用的龍葵全草為用途廣泛的藥用植物，來源容易，并且與陽性藥物水飛薊素(文獻報道水飛薊素對各種肝臟疾病都有很好的療效［6-7］)相比較療效相當。試驗結果說明了龍葵除了前人總結的常用的藥理作用以外，在抗氧化損傷方面也同樣具有很好的保護作用，發現了龍葵新的藥用價值。

本試驗用0.35%的CCl4按10 mL/kg的劑量給小鼠灌胃，成功復制了周瓊建立的急性肝損傷模型［5］。CCl4是一種強烈的能夠引起肝細胞壞死的化合物，一直被研究者用來誘發各種肝損傷模型以闡明化合物肝毒性機制或肝損傷保護機制［8］。CCl4所致的肝損傷促進了氧自由基的產生，導致線粒體及肝細胞的脂質過氧化損傷。這種損傷破壞了細胞膜結構，使肝細胞變性壞死，細胞內轉氨酶、自由基滲入血液而活性升高，故血清中ALT、AST仍被認為是肝損傷的敏感指標，其升高在一定程度上說明了肝臟受損的程度［9］。

本試驗結果顯示，CCl4模型組小鼠肝臟呈現明顯病變，血清ALT、AST均顯著升高，表明肝細胞已嚴重損傷，模型復制成功，此結果與童其［9］報道的一致。同時肝功能氧化指標的變化也顯示出肝細胞嚴重受損的趨勢。藥物治療高劑量組小鼠肝臟眼觀與正常組無明顯差異，血清ALT、AST明顯降低，肝功能氧化指標也接近正常水平。此結果與詹可順等［10］研究的白芍總苷對小鼠化學性肝損傷的保護作用及機制結果一致。±s，n=10)

綜上所述，本試驗所選用的龍葵提取物對試驗性CCl4所致小鼠急性肝損傷有很好的保護作用，且最佳藥物濃度為150 mg/kg。其保護機制可能與清除自由基、抑制脂質過氧化，有效地保護細胞的膜結構和減少細胞凋亡有關。

［1］ 梅全喜.廣東地產藥材研究［M］.廣東科技出版社，2011:247-250.

［2］盧汝梅，譚新武，周媛媛.龍葵的研究進展［J］.時珍國醫國藥，2009，20(7):1821.

［3］Lin H M，Tseng H C，Wang C J，et al.Induction of autophagy and apoptosis by the extract of Solanum nigrum Linn in HepG2 cells［J］J Agric Food Chem，2007，(55):3620-3628.

［4］李佐軍.水飛薊素對CCl4和/或酒精所致小鼠肝纖維化的保護作用及機制初探［D］.中南大學，2008.

［5］ 周 瓊.小鼠急性肝損傷模型的建立及GSTA1分析［D］.東北農業大學，2012.

［6］Murphy F，Issa R，Zhou X，et al.Inhibition of apoptosis of activated hepatic stellate cells by TIMP-1 is mediated via effects on MMP inhibition:Implications for resversibility of liver fibrosis［J］.J Biol Chem，2002，277(3):11069-11076.

［7］Jia J D，Yin S S.The progress in diagnosis and treatment of liver fibrosis［J］.J Clin hitemMed，2002，19:244-246.

［8］汪 濤，姜 華，陸國才，等.四氯化碳肝臟毒性機制的研究進展［J］.毒理學雜志，2007，21(4):339.

［9］童 其，閏向東，高 珊，等.四氯化碳急性肝損傷敏感指標的研究［J］.中國食品衛生雜志，2000，12(6):10-11.

［10］詹可順，王 華，魏 偉.白芍總苷對小鼠化學性肝損傷的保護作用及機制［J］.安徽醫科大學學報，2006，41(6):664-666.