注射用鹽酸苯達(dá)莫司汀的制備及質(zhì)量控制

陳祥峰，楊奇珍，魏 佳（江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司，南京 2 1 1 1 1 2）

注射用鹽酸苯達(dá)莫司汀的制備及質(zhì)量控制

陳祥峰＊，楊奇珍，魏 佳（江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司，南京 2 1 1 1 1 2）

目的：制備注射用鹽酸苯達(dá)莫司汀并建立其質(zhì)量控制方法。方法：以凍干賦形劑甘露醇的不同用量為因素，以制劑的成形性等為指標(biāo)篩選處方；確立制劑的制備工藝；采用高效液相色譜法測(cè)定制劑含量；根據(jù)2 0 1 0年版《中國(guó)藥典》相關(guān)要求考察制劑的鑒別、酸度、水分、有關(guān)物質(zhì)和主藥含量等質(zhì)量控制指標(biāo)。結(jié)果：選用2.2 5%甘露醇為輔料，制備時(shí)不采用脫炭工藝；成品各質(zhì)量指標(biāo)均符合《中國(guó)藥典》相關(guān)要求。結(jié)論：所確定的制劑處方和制備工藝合理，所得產(chǎn)品質(zhì)量可控。

注射用鹽酸苯達(dá)莫司汀；制備；質(zhì)量控制

鹽酸苯達(dá)莫司汀（Bendamustine hydrochloride，BH）是一種含有嘌呤類苯并咪唑環(huán)的氮芥衍生物，具有抗腫瘤作用。2 0 0 3年，注射用BH在德國(guó)上市，商品名為Ribomustin，在美國(guó)上市的商品名為 Treanda[1，2]。

BH分子式為C16H21Cl2N3O2·HCl，分子量為3 9 4.7。其原料藥為白色至灰白色結(jié)晶性粉末，在甲醇中易溶，在乙醇中溶解，在水中略溶，在0.1 mol·L－1鹽酸溶液中微溶。其在水溶液中不穩(wěn)定，易水解，可分解為羥基氯和二羥基衍生物。因國(guó)內(nèi)尚無(wú)BH制劑產(chǎn)品上市，所以筆者參考國(guó)外上市制劑，設(shè)計(jì)并制備了注射用BH，初定規(guī)格為每支2 5 mg，并對(duì)其進(jìn)行了質(zhì)量控制，為國(guó)內(nèi)的BH制劑的開(kāi)發(fā)提供依據(jù)[3，4]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LYO-0.4型真空冷凍干燥機(jī)（上海東富龍科技股份有限公司）；LC-2 0 A型高效液相色譜（HPLC）儀，包括LC-2 0 A泵、SPD-2 0 A型紫外檢器、LC solution色譜工作站（日本島津公司）。

1.2 試藥

BH對(duì)照品（批號(hào)：2 0 0 8 1 1 2 4，純度：9 9.9 8%）、BH原料藥（批號(hào)：0 9 0 2 0 1，純度：9 9.8%）均由南京海光應(yīng)用化學(xué)研究所合成室提供；甘露醇（廣西南寧化學(xué)制藥有限責(zé)任公司）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 處方與制備

參考Treanda說(shuō)明書(shū)確定本品的處方組成，即每瓶2 5 mg規(guī)格的注射用BH處方由BH以及甘露醇組成。

將輔料溶解后再加主藥，溶液制備完成后灌裝，再放入凍干機(jī)凍干，得成品制劑。由于BH在水溶液中不穩(wěn)定，易水解，且在光照條件下也易降解變色，所以灌裝包材選用棕色西林瓶。

2.1 賦形劑用量篩選

設(shè)計(jì)不同的賦形劑用量與主藥制備凍干藥液：稱取主藥（每瓶2 5mg）和相應(yīng)量的甘露醇（每瓶4 5、7 5、1 2 5、1 7 5、2 2 5 mg），先加8 0%注射用水?dāng)嚢枞芙猓傺a(bǔ)加注射用水至全量。分裝后進(jìn)行凍干，并觀察凍干成品的顏色、成形性、復(fù)溶性、可見(jiàn)異物，各項(xiàng)指標(biāo)參考2 0 1 0年版《中國(guó)藥典》附錄相關(guān)內(nèi)容[5]。結(jié)果5種處方顏色均為白色，成形性均為疏松飽滿，復(fù)溶性均良好，可見(jiàn)異物檢查均為合格，即各處方結(jié)果無(wú)差異。由此選擇甘露醇的最小量4 5 mg。確定制劑處方為：BH 2 5 mg，甘露醇4 5 mg（2.2 5%），注射用水2 mL。

2.2 活性炭用量選擇

注射劑制備過(guò)程中需要使用活性炭來(lái)除去熱原和雜質(zhì)，但由于活性炭在吸附熱原和雜質(zhì)的同時(shí)也可能會(huì)吸附主藥，為此對(duì)其用量進(jìn)行選擇。

按處方量制備2 0 0 mL BH溶液，平均分成4份，1份不加入活性炭作為0活性炭用量溶液，其余3份分別加入0.0 5%、0.1%和0.2%（W/V）活性炭量，將后3份溶液攪拌3 0 min后脫炭，并考察4份溶液的性狀、主藥含量（以0活性炭用量溶液的峰面積為1 0 0%，換算其余3份溶液的含量）及細(xì)菌內(nèi)毒素。考慮到溶液對(duì)放置環(huán)境的要求，所以在低溫（2～8℃）環(huán)境下對(duì)活性炭的用量進(jìn)行考察。活性炭用量的考察結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 活性炭用量的考察結(jié)果Tab 1 Amount of active carbon

表1結(jié)果表明，活性炭對(duì)主藥有吸附作用。此外，考慮到BH溶液制備后需立即冷卻，但低溫達(dá)不到脫炭工藝要求，此外試驗(yàn)表明不進(jìn)行脫炭的樣品細(xì)菌內(nèi)毒素也符合規(guī)定。因此，本品在生產(chǎn)過(guò)程中不采用脫炭工藝。

2.3 制備

稱取處方量的BH和甘露醇，先將甘露醇置于無(wú)菌容器中，加8 0%量注射用水使之溶解并攪拌均勻，加注射用水定容至全量，攪拌均勻后，加入BH，攪拌使之全部溶解。隨后打開(kāi)冷水夾套，溫度控制在2～8℃。溶液初濾后，取樣進(jìn)行中間體檢查。中間體檢驗(yàn)合格后，溶液經(jīng)2次0.2 2μm微孔濾膜濾過(guò)后送至無(wú)菌室，并按每瓶2 mL灌裝于棕色西林瓶中，半塞上丁基橡膠塞，裝盤(pán)。將灌裝好的樣品置入冷凍干燥機(jī)中，利用導(dǎo)熱油使樣品溫度下降，當(dāng)達(dá)－4 0℃時(shí)繼續(xù)冷凍2～4 h，開(kāi)啟真空系統(tǒng)，最后干燥溫度為4 0℃，保持該溫度6～8 h后，關(guān)閉中隔閥，停真空泵，壓塞、出箱，用鋁塑組合蓋軋口，經(jīng)質(zhì)檢合格后包裝，即得成品。

3 質(zhì)量控制

3.1 性狀

本品為白色或類白色疏松塊狀物或粉末。

3.2 鑒別

（1）稱取甘露醇1 0mg，加甲醇1 0mL使溶解，為輔料溶液；稱取BH對(duì)照品5mg，加甲醇1 0mL使溶解，為對(duì)照品溶液；取本品適量（約相當(dāng)于BH 5 mg），加甲醇1 0 mL使溶解，為供試品溶液。進(jìn)樣，記錄3種溶液的色譜圖，見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.輔料；B.對(duì)照品；C.供試品；1.BHFig 1 HPLC chromatograms A.excipients；B.substance control；C.test sample；1.bendamustine hydrochloride

由圖1可見(jiàn)，甘露醇在此色譜條件下不出峰，供試品主峰的保留時(shí)間與對(duì)照品峰的保留時(shí)間一致。

（2）本品，加甲醇溶解并稀釋制成每1 mL中約含BH 1 0 μg的溶液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定，結(jié)果，在2 3 3 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。

3.3 檢查

3.3.1 酸度。取本品1瓶，加水5 mL溶解后，依法測(cè)定[5]，pH值應(yīng)為2.5～3.5。結(jié)果均符合要求。

3.3.2 溶液的澄清度與顏色[5]。取本品5瓶，分別加水5 mL溶解后，溶液應(yīng)澄清無(wú)色；如顯渾濁，與1號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液比較，均不得更濃；如顯色，與黃色2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液比較，均不得更深。結(jié)果均符合要求。

3.3.3 有關(guān)物質(zhì)。取本品適量，加甲醇溶解并制成每1 mL中約含BH 0.2 5 mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取1 mL，置于1 0 0 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。取對(duì)照溶液2 0 μL進(jìn)樣，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為滿量程的1 0%～2 5%；精密量取供試品溶液與對(duì)照溶液各2 0μL，分別進(jìn)樣，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積的0.5倍（0.5%），各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積的1.5倍（1.5%）。結(jié)果均符合要求。

3.3.4 水分。取本品，照水分測(cè)定法[5]測(cè)定，含水分不得過(guò)4.0%。結(jié)果均符合要求。

3.3.5 細(xì)菌內(nèi)毒素。取本品，依法檢查[5]，每1 mg BH中含內(nèi)毒素的量應(yīng)小于1.0 EU。結(jié)果均符合要求。

3.3.6 無(wú)菌。取本品，加滅菌水適量溶解后，轉(zhuǎn)移至不少于5 0 0 mL的0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，用薄膜過(guò)濾法處理后，依法檢查[5]，應(yīng)符合規(guī)定。結(jié)果均符合要求。

3.4 含量測(cè)定

3.4.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.0 5%十二烷基硫酸鈉溶液（用1 0%磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.0）-乙腈（5 5∶4 5）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為2 3 3 nm。理論板數(shù)按苯達(dá)莫司汀峰計(jì)算不低于2 0 0 0，分離度符合要求。

3.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。取水分測(cè)定后的BH對(duì)照品約6 0 mg，精密稱定，置于5 0 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。分別精密量取貯備液0.0 5、0.1、0.5、1.0、2.0、4.0、1 0.0 mL置于5 0 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成一系列濃度的對(duì)照品溶液。分別精密量取各2 0 μL進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，以進(jìn)樣濃度（x）為橫坐標(biāo)，峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果得方程為y＝8 9 6 7 5.1 x+1 0 5 8 4.7（r＝0.9 9 99，n＝7），表明BH檢測(cè)濃度的線性范圍為1.2 5 4～2 5 0.8 μg·mL－1。

3.4.3 精密度試驗(yàn)。取“3.4.2”項(xiàng)下濃度為2.0 μg·mL－1溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，得峰面積的RSD＝0.3 5%，表明本法進(jìn)樣精密度良好。

3.4.4 回收率試驗(yàn)。分別按處方量的8 0%、1 0 0%、1 2 0%取主藥3份加入輔料，制備3份模擬制劑，測(cè)定含量并以測(cè)得量與加入量之比計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab 2 Results of recovery test

表2結(jié)果表明，本法回收率良好。

3.4.5 重復(fù)性試驗(yàn)。取BH適量制備6份樣品，測(cè)定含量，結(jié)果

RSD＝0.6 0%。

3.4.6 樣品質(zhì)量檢查。精密稱取本品適量，加甲醇溶解并定量稀釋制成每1 mL中含BH 0.0 5 mg的溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖；另取經(jīng)水分測(cè)定后的BH對(duì)照品，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。3批樣品的含量及其他指標(biāo)檢查結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 3批樣品的質(zhì)量檢查結(jié)果Tab 3 Result of quality inspection of 3batches of samples

4 討論

本文篩選了處方中輔料的用量，確定了制備工藝，并對(duì)成品制劑進(jìn)行了質(zhì)量考察。結(jié)果表明，外觀性狀、酸度、溶液澄清度和顏色、細(xì)菌內(nèi)毒素、無(wú)菌等指標(biāo)按2 0 1 0年版《中國(guó)藥典》要求檢查均合格；同時(shí)建立了主藥和有關(guān)物質(zhì)的含量測(cè)定方法，測(cè)定結(jié)果也符合要求。表明所確定的制劑處方和制備工藝合理，所得產(chǎn)品質(zhì)量可控、穩(wěn)定性好，適于大生產(chǎn)制備。

[1] Dreyling M.Bendamustine is a hybrid antimetabolite and alkylating agent offering new therapeutic options for the treatment of non-Hodgkin lymphomas[J].Hematology Meeting Reports，2 0 0 8，2（5）：1 2 3.

[2] Tageja N，Nagi J.Bendamustine：something old，something new[J].Cancer Chemother Pharmacol，2 0 1 0，6 6（3）：4 1 3.

[3] 陳 棟，宮 平.鹽酸苯達(dá)莫司汀[J].中國(guó)藥物化學(xué)雜志，2 0 0 9，1 9（2）：1 5 9.

[4] Gust G，Krauser R.Investigations on the stability of bendamustin，a cytostatic agent of the nitrogen mustard type，Ⅰ.synthesis，isolation，and characterization of reference substances[J].Monatshefte für Chemie Chemical Monthly，1 9 9 7，1 2 8（3）：2 9 1.

[5] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].2 0 1 0年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2 0 1 0：附錄2 9、4 4、6 0、6 8、7 1、7 8、9 9、1 0 3.

Preparation and Quality Control of Bendamustine Hydrochloride for Injection

CHEN Xiang-feng，YANG Qi-zhen，WEI Jia
（Jiangsu Aosaikang Pharmaceutical Co.，Ltd.，Nanjing 2 1 1 1 1 2，China）

OBJECTIVE：To prepare and control the quality of Bendamustine hydrochloride for injection.METHODS：The prescription was screened with the different amount of frozen-dried supporting agent mannitol as factor and compactibility of preparation as index.The preparation technology was determined and HPLC method was adopted to determine the content of preparation.The identification，acid，moisture，the content of related substances and main components and other quality control index were investigated according to Chinese Pharmacopoeia（2 0 1 0edition）.RESULTS：2.2 5%mannitol was used as excipient，and decarbonization technology wasn’t adopted.The quality index of products were all up to the requirements of Chinese Pharmacopoeia.CONCLUSION：The prescription and preparation technology is appropriate，and the quality of product is controllable.

Bendamustine hydrochloride for injection；Preparation；Quality control

R9 4 2；R9 7 9.1

A

1 0 0 1-0 4 0 8（2 0 1 2）1 3-1 2 0 1-0 3

DOI1 0.6 0 3 9/j.issn.1 0 0 1-0 4 0 8.2 0 1 2.1 3.1 8

＊工程師。研究方向：新藥研發(fā)。電話：0 2 5-5 1 1 9 8 9 0 9

2 0 1 1-0 4-2 5

2 0 1 1-0 6-0 3）

＊碩士研究生。研究方向：藥物新劑型與新技術(shù)。E-mail：lgl1 9 8 6@1 2 6.com

#通訊作者：教授，博士。研究方向：藥物新劑型與新技術(shù)。電話：0 3 1 1-8 6 2 6 5 6 3 3。E-mail：caody3@1 6 3.com