宮頸人乳頭瘤病毒感染快速檢測方法及其臨床意義

顏 敏 (湖北醫藥學院附屬人民醫院檢驗科，湖北 十堰 442000)

宮頸病變患者生殖道內人類乳頭狀病毒(HPV)檢出率很高〔1〕。HPV是一類具有較強傳播能力的病毒，可以通過性接觸，還可以垂直傳播。HPV高危型基因的感染若在人體內較長時間存在會引發宮頸癌變，在患者身體狀況不佳以及生理周期〔2〕、妊娠等免疫力下降時生殖器HPV感染概率會增加，若妊娠婦女感染HPV還會通過母體傳播給嬰兒引起先天性尖銳濕疣或乳頭瘤病等相關疾病〔3〕，故對于HPV的檢測至關重要。本文通過對十堰市體檢婦女進行宮頸檢查及HPV篩查，分析HPV感染與宮頸病變的相關性。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選擇2007年5月～2011年9月十堰市各大醫院婦科門診就診的患者2 000例作為研究對象。

1.2 儀器及試劑 采用美國ABI公司生產的全自動熒光PCR儀器ABI 7000進行檢測。DNA試劑盒均由中山大學達安基因股份有限公司生產。采用HPV分型DNA雜交技術。

1.3 HPV檢測方法〔4～6〕①樣本處理：將標本置于生理鹽水轉移至1.5 ml離心管離心5 min，取沉淀物加50 μl DNA提取物，100℃加熱10 min，離心5 min取上清液備用。②PCR基因擴增：PCR 反應體積 25 μl，上清液 5 μl，50℃ 下 15 min，95℃10 min后循環35次，延伸到5 min，72℃進行PCR反應。③嚴格按照試劑盒上操作說明進行PCR產物的雜交及顯色。

1.4 統計學方法 應用SPSS18.0統計軟件進行分析，計量資料以s表示，采用t檢驗;計數資料采用率表示，進行χ2檢驗;等級計量資料采用非參數檢驗(Z檢驗)。

2 結果

2.1 病毒檢出率 2 000例受檢婦女中發生HPV感染663例，其陽性率為33.2%。感染者中宮頸光滑以及輕度糜爛的患者有132例(19.9%)，中重度糜爛531例(80.1%)。

2.2 不同危險程度基因型宮頸病變程度分析 PCR方法檢出包括 HPV16，HPV18等在內的 13類高危基因型 562例(84.8%);包括 HPV11等在內的4種低?；蛐?1例(12.2%);另外，還有包括HPVCP8304等在內的3種常見基因亞型20例(3.0%)。見表1。

表1 不同危險程度基因型宮頸病變程度(%)

2.3 HPV感染與年齡的相關性 HPV感染發病高峰在26～33歲，且此年齡段的HPV檢出率與其他組比較具有明顯差異性(χ2=132.525，P=0.001)，50歲以上感染率最低。見表2。

表2 不同年齡段HPV感染情況(n)

3 討論

宮頸癌近年來高發，在女性生殖系統惡性腫瘤的首位〔7〕。但宮頸癌前病變會經歷較長時間，所以它的檢出較難，通常都是癌癥中晚期才發現，大大降低了患者的5年有效生存率〔8〕。近年來通過大量研究表明宮頸癌的發生與HPV的感染具有相關性〔9〕，且認為通過檢測HPV可以增加宮頸癌變的檢出率。HPV是一種可以在人及動物體內廣泛存在的環狀DNA病毒，是一種可以發生特異性感染的小型病毒，可以特異性地感染人類皮膚、黏膜，并引起良性腫瘤以及生殖器官皮膚黏膜組織的病變。通常尖銳濕疣及其他黏膜上的乳頭狀瘤皆是由HPV引發的。HPV的直徑約50～55 mm，主要依靠宿主細胞進行繁殖。在100多種亞型中，發現能從感染的生殖道組織中分離的基因型有30種之多〔10〕。

HPV的感染與年齡具有相關性，魏穎穎等〔11〕研究顯示HPV的感染在26～28歲是個高峰，而后隨圍絕經的出現成為另一個高峰。本研究認為對30歲以上婦女做HPV的檢查對宮頸癌早期篩查具有更重要的意義。HPV的發生與感染與早年性生活次數、性伴侶、性行為等均具有密切關系。所以針對與20～50歲婦女進行HPV感染檢查，可以更及時地篩查出宮頸病變，減少宮頸癌變的可能，并及時診治。本研究說明宮頸癌的發生與基因型有關，其中HPV-16亞型趨勢最為顯著。隨感染率上升，宮頸病變級別也在顯著升高。故在臨床中一定要注意高危型HPV基因的存在，它的持續感染可能是導致宮頸癌的直接因素。

另外，HPV的感染情況在不同地區、不同受檢人群中具有顯著差異，且目前亞太地區常見檢出基因型為HPV-16。最新報道發現HPV-16發生的概率為57.5%，在北美與南非中的發病率為47.7% ～69.5%〔12〕。所以通過在各地開展HPV流行病學調查可以控制宮頸癌的發病率。

此外，還需要注意HPV的多重感染也是增大患者宮頸癌患病危險的重要因素。陳志芳等〔13〕認為，HPV-16基因單純感染和多重相關感染具有不同的發病危險，HPV的多重感染具有加重宮頸癌變的作用。但通常以HPV-16與HPV-18雙重感染占據主導。目前雖然無明顯證據證明其交叉作用對疾病發生的作用〔14〕，但在臨床診療過程中不可忽視其對于HPV感染的促進作用。

綜上所述，十堰市HPV感染與宮頸病變嚴重程度呈正比，高危亞型呈較為明顯趨勢，所以臨床可以通過檢測HPV感染病變程度及時發現宮頸病變，做到早發現、早診斷、早治療。

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