2009年～2011年新疆雁形目野生鳥類禽流感血清流行病學調查與分析

成 進，沙依蘭古麗，夏 俊，汪 萍，史 軍，李雁冰，廖 明，任 濤，陸桂麗，阿不都熱合曼，吐爾遜吐拉克，戴志剛，何 健，初紅軍，賽力克拜

（1.新疆畜牧科學院獸醫研究所，新疆 烏魯木齊830000；2.新疆野生動物疫源疫病監測站，新疆 烏魯木齊830063；3.中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所，黑龍江 哈爾濱150001；4.華南農業大學獸醫學院，廣東 廣州510642）

禽流感（AI）具有多宿主感染的特性，感染宿主包括人、豬、馬、水貂、貓科動物、海洋哺乳動物和廣泛的家養鳥類［1］。AI的傳播主要是通過糞－口途徑，這在水禽中傳遞病毒是一個有效途徑，即脫落的病毒通過糞便進入到水表面［2］。由于被感染的野鳥帶毒卻很少發病或死亡，往往成為重要的病原攜帶者，隨著候鳥的遷徙，與留鳥及家禽的接觸，而將疫情進一步擴散。因此，AI的暴發流行除了與禽肉、蛋產品及貿易流通因素有關之外，野生鳥類被認為是最有可能的傳染來源之一［3］。

有研究認為，濕地和水棲野鳥，例如雁形目和鸻形目是禽流感病毒（AIV）主要的天然儲存者［2，4］。新疆具有豐富的濕地資源，每年都有數以萬計的遷徙性鳥類途徑新疆，并在新疆南北疆地區的湖泊、水庫、濕地棲息和繁殖。新疆獨特的地理位置，使得新疆的野生鳥類的遷徙路線處于跨越中亞和歐亞的遷徙路線的一個關鍵性的位置上。因此，野生鳥類的遷徙對新疆地區乃至全國的AI防控構成潛在的威脅和巨大的壓力。雖然，我國已有研究人員對14個省區進行了野生鳥類AI的調查，獲得了重要成果和信息［5］，但是，新疆在野鳥的AI監測與研究方面尚屬空白。因此，我們首次在新疆對野生鳥類開展了AI的血清學監測。

1 材料與方法

1.1 診斷試劑 AI H1～H16亞型標準抗原、陰性和陽性血清均由中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所提供。

1.2 主要試劑 阿氏液，0.01mol／L的pH 值7.2 PBS，按“高致病性禽流感診斷技術”國家標準（GB／T18936－2003）方法配制。

1.3 1%雞紅細胞懸液 按照GB／T18936－2003頒布的方法制備1%（V／V）雞紅細胞懸液，4℃保存備用。

1.4 樣品采集 2009年～2011年在新疆巴音布魯克的博斯騰湖、伊犁昭蘇縣水庫、阿克蘇柯坪縣遠郊濕地、阿勒泰福?？h烏倫古湖北面的薩爾胡松鄉鍋底坑濕地、喀什地區葉爾羌河流域中游處的麥蓋提近郊濕地和莎車縣近郊濕地、烏魯木齊市安寧渠青格達湖及濕地的野生鳥類采集了血清樣品。采樣方法以誘捕方式捕獲野鳥，翅膀靜脈采血后，對采樣野鳥進行放飛大自然。采集綠頭鴨102份，赤麻鴨67份，赤嘴潛鴨44份，鳳頭潛鴨18份，灰 雁22份，天鵝1份，烏鴉3份，紅隼1份，野鴿1份和斑鶇1份，共計采集血清樣品260份。

1.5 AI HI抗體檢測方法 按照GB／T18936－2003頒布的方法檢測血清樣品的AI HI抗體效價。陽性樣本的標準是抑制4個血凝素（HA）單位的血凝活性，滴度≥1∶16。

2 結果

2.1 野鴨類樣品檢測結果

2.1.1 2009年～2011年共計采集野鴨類血清樣品231份，用AI HI方法檢測不同年份血清樣品，結果及分析見圖1和圖2。

結果顯示，3年共檢出16個HA亞型，數據（平均值）分析表明，H9檢出率最高，達8.66%；其后依次為 H5、H2、H8、H1、H6、H10、H13、H12和H7（3.03%～7.79%），其余的 HA 亞型檢出率較低，為1.05%～3.16%（0.43%～1.73%）。2009年檢出5個HA亞型，H8檢出率最高，為15.38%；2010年11個HA亞型，H5的陽性率最高，為14.29%；2011年12個 HA亞型，H9的陽性率最高，為15.79%。

2.1.2 對231份不同品種野鴨的血清樣品檢測，結果及分析見圖3。

圖3 不同品種野鴨AIV HI抗體陽性率結果分析

2.2 灰雁血清樣品檢測結果 對灰雁AIV H1～H16血清亞型的監測結果表明，共檢出8個血清亞型，其中H13亞型的陽性率最高，為40.91%；其后為 H1和 H2（9.09%）；再次之為 H4、H7、H9、H10和 H15（4.55%）；而 H3、H5、H6、H8、H11、H12、H14和H16則為陰性。

2.3 其他野鳥血清樣品檢測結果 在2009年采集天鵝血清樣品1份，經檢測H13為陽性。在2009年共計采集烏鴉、斑鶇、野鴿和紅隼等野鳥血清樣品6份，經用AI的H1～H16種HI診斷抗原進行檢測，結果全部為陰性。

3 分析與討論

3.1 禽流感病毒（AIV）感染的禽類宿主非常廣泛?，F已證實AIV的所有血凝素（HA）和神經氨酸酶（NA）亞型（H1－H16和 N1－N9）和大多數 HA／NA組合在野生鳥類中儲存［6－7］。鸻形目鳥和雁形目鳥呈全球性分布，還代表幾乎覆蓋全球的AIV宿主種類［1－2］。鸻形目主要指海鷗、燕鷗、水鳥等岸禽類鳥，雁形目主要指鴨、雁、鵝和天鵝等鴨科類鳥。新疆位于歐亞大陸的腹地，每年有大量的雁形目候鳥遷徙，分別在春季3月中下旬至5月和秋季9～10月。雁形目候鳥的涉水行為可使AIV由糞便被排泄在水的表面，有效地將病毒傳染給其他在相同水域飼喂或生活的鴨子。AIV可以在水中依靠溫度、鹽分和pH值保持延長感染性［8］。。我們對新疆野鳥的AI血清學監測樣品主要是以雁形目的鴨科鳥類為主，主要有灰雁、綠頭鴨、赤麻鴨、赤嘴潛鴨、鳳頭潛鴨等。

3.2 AI通過野生鳥類在很大的地理范圍潛在傳播，對公眾和動物健康的威脅，使得更加需要對AIV在野生鳥類儲存、循環的生態學信息研究［7］。國外在野生鳥類的AI檢測已經開展了多年的研究。有報道認為，在野生鳥中檢測最多的AIV HA亞型是 H6（17.8%）和 H4（16%），其他亞型有H7、H3、H11、H1、H2、H5、H10、H12、H8、H13、H9和H16，而 H14和 H15從未檢測到。H13和H16亞型的病毒主要是從鸻形目鳥中獲得［8］。而我們本次研究檢測到了16個血清亞型。我們從鴨類檢測到最多的AIV HA亞型是 H9（8.66%），其后依次為 H5、H2、H8、H1、H6、H10、H13、H12和H7（3.03%～7.79%），在鴨的樣品中雖然檢出了其余亞型，但檢出率很低（2%以下）。對灰雁的血清樣品檢測結果表明，H13亞型的陽性率最高，為40.91%，其次為H1和H2（9.09%）。與國外的相關報道比較，H13和H16亞型的病毒主要是從鸻形目鳥中獲得［10］，我們則在灰雁的血清學檢測證實了 H13具有較高的陽性率（40.91%）。

3.3 我們對新疆野鳥的AI監測僅從2009年開始，檢測數據顯示出不同亞型的AI在不同年份的檢出率差異較大。例如，2009年的樣品中AIV H8亞型的陽性率高達15.38%，到2010年和2011年檢出率卻相當低（0%～1.05%），在 AIV H7、H13和H16亞型也存在相同的現象。此外，這3年的監測發現，我們在2009年檢測到5種血清亞型，2010年檢測到11種，2011年檢測到12種，說明野生鳥類感染AIV不同HA亞型的范圍不斷擴大，表明導致基因重組和置換的幾率也在增加。當然，有關野生鳥類AI的監測需要進一步持續的進行，以便獲得長期的、大量的、規律性的數據。

3.4 本研究所采集的樣品均為臨床健康鳥，從樣品中檢測到了H1～H16血清亞型，進一步證實了野鳥可以攜帶或感染AIV但不發病，對野鳥遷徙沿途的生態環境和養殖環境構成一定的威脅。本次調查證實了新疆野鳥血清樣品中總的H5陽性率為7.79%，在2010年高達14.29%；在2010年檢測出H7亞型（8.33%）。眾所周知，H5和H7亞型是屬于高致病性禽流感的范疇，若沒有任何癥狀或病情的野鳥攜帶AIV，尤其是高致病性AIV無疑將對新疆地區家禽養殖環境構成潛在的威脅和隱患。此次研究結果警示我們對環境中的野生鳥類持續地進行AI的監測對疫情的預警和預報具有十分重要的意義。

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