HPLC法測定頸椎通絡(luò)丸桂皮醛、芍藥苷含量△

孟克巴牙爾 常 嵐 張高娃 趙 陽 白音夫?

(1.內(nèi)蒙古自治區(qū)中蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010020;2.呼和浩特市環(huán)境科學研究所，內(nèi)蒙古呼和浩特010030;3.內(nèi)蒙古醫(yī)學院2010級研究生，內(nèi)蒙古呼和浩特 010050)

頸椎通絡(luò)丸是我院所臨床協(xié)定處方制劑。具有祛風通絡(luò)，活血化瘀作用，用于頸椎病引起的頭痛、頭暈、耳鳴等癥。主要由白芍、葛根、桂枝、羌活、地龍、烏蛇、防風、制草烏、甘草等藥材組成。制法，以上藥材粉碎成細粉，加蜂蜜制成小蜜丸。本文采用液相色譜法對桂皮醛、芍藥苷含量進行測定。

1 儀器、試劑及樣品

高效液相色譜儀:1100型(美國 Agilentg公司制造);NC－2000中北色譜工作站;1/10萬光電天平:TG332A型(湘儀制造);超聲清洗儀:AS2060B型(上海科學儀器公司制造)。

甲醇、乙腈:色譜純，由美國Tedai公司生產(chǎn);磷酸為分析純;水為三蒸水。桂皮醛(710～9005)芍藥苷(0736～200014)由中國藥品生物制品檢定所提供。頸椎通絡(luò)丸由內(nèi)蒙古中蒙醫(yī)醫(yī)院制劑中心生產(chǎn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件:非羅門 Kromasil色譜柱 C18(4.6×200mm，5μm)。流速:1mL·min－1;柱溫:30℃。桂皮醛測定波長290nm，流動相:甲醇－1%:磷酸(300:200);芍藥苷測定波長為230nm，流動相:乙腈－0.1%磷酸溶液(22:78)［1］。

2.2 測定溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取桂皮醛對照品適量，用甲醇配制成0.08mg·mL－1;濃度的溶液。精密稱取芍藥苷對照品適量，用甲醇配制成0.09mg·mL－1;濃度的溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備:取本品，用剪刀剪碎，稱取0.4g，置研缽內(nèi)，加甲醇2ml研磨直到全部溶散，甲醇溶液轉(zhuǎn)移至50mL具塞錐形瓶中，用甲醇沖洗研缽3次，每次2mL。超聲處理(功率250W，頻率40kHz)30min，再將甲醇溶液轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，靜止，用0.45μm濾膜濾過，即的。

2.2.3 專屬性試驗:依照樣品制備方法分別制備不含肉桂和芍藥的頸椎通絡(luò)丸的陰性制劑，依照色譜條件測定。桂皮醛陰性樣品與芍藥苷陰性樣品在與樣品相應(yīng)的保留時間內(nèi)無干擾峰出現(xiàn)，表明，其它藥材對桂皮醛及芍藥苷的測定無干擾。

2.3 線性關(guān)系考察:精密吸取桂皮醛溶液1mL置10mL量瓶內(nèi)為A溶液，由A溶液量取1mL按上法稀釋為B溶液。吸取 B 溶液2.5、5μL，A 溶液 1、2、4、8μL 按色譜條件測定峰面積。回歸方程:Y=5738+4369354x，r=0.9999。桂皮醛在 0.02 ～0.64μg成線性關(guān)系。

芍藥苷對照品溶液為A，精密吸取1mL置10mL量瓶內(nèi)加甲醇至刻度為B溶液。吸取A溶液4、6、8μL，B溶液2、4、6μL按色譜條件測定峰面積。回歸方程:Y=20038+3807746x，r=0.999。芍藥苷在 0.0182 ～0.546μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗:精密吸取同一供試品溶液4μL，連續(xù)進樣5次，分別測定桂皮醛和芍藥苷峰面積，結(jié)果峰面積的RSD分別為0.74%與1.01%。

2.5 穩(wěn)定性試驗:取同批號供試品溶液，分別于樣品制備后第0，2，4，8h進樣 4μL，測定桂皮醛和芍藥苷峰面積，結(jié)果峰面積的RSD分別為0.65%與1.10%，樣品在8h內(nèi)穩(wěn)定

2.6 重復(fù)性試驗:取同批次樣品，按2.2項下的方法制備5份樣品。分別測定桂皮醛和芍藥苷含量，桂皮醛平均含量 0.21 mg·g－1，RSD 為 3.5%;芍藥苷平均含量 0.16 mg·g－1，RSD 為 3.7%。

2.7 回收率試驗:取已知桂皮醛和芍藥苷含量頸椎通絡(luò)丸0.3g，置10mL容量瓶內(nèi)分別精密加入桂皮醛對照品溶液1mL(0.08mg·mL－1)，芍藥苷對照品溶液 0.5mL(0.091mg·mL－1)，加甲醇至刻度，溶液轉(zhuǎn)入置50mL具塞錐形瓶中，按供試品方法制備，提取，過濾。按色譜條件測定。計算測定平均回收率。見表1樣品編號1～5為桂皮醛加樣回收率測定，6～10為芍藥苷加樣回收率測定3樣品測定分別吸取對照品溶液與樣品溶液4μL，依上述色譜條件測定不同批號桂皮醛和芍藥苷含量，二者平均含量分別為 0.24 mg﹒ g－1、0.16 mg﹒g–1。

表1 頸椎通絡(luò)丸加樣回收率測定

表2 樣品中桂皮醛和芍藥苷含量測定(n=5)

4 討論

對供試品溶液制備方法進行研究。分別考察超聲、回流提取方法，結(jié)果表明超聲處理方法操作簡便、省時，提取效率高。對提取時間考察表明，樣品超聲處理30min后桂皮醛與芍藥苷含量不再增加。色譜柱適用性研究表明，Agilent XDB －C8柱 (150×4.6 mm，5μm)、非羅門Kromasil C18柱(200×4.6 mm，5μm)均可適用本試驗測定。測定結(jié)果表明，桂皮醛含量在 0.21 ～0.27 mg·g－1，芍藥苷含量0.12 ～0.19mg·g－1，批次之間含量差異不大。采用 HPLC法測定頸椎通絡(luò)丸指標性成分，可作為有效控制藥品的質(zhì)量的方法之一。該方法重現(xiàn)性好，操作簡便、靈敏、準確、可靠。

［1］中華人民共和國藥典委員會.中國藥典(一部)［S］.中國醫(yī)藥出版社，2010.127，96