元參組方對急性輻射損傷的保護機理研究

曾 婷，郝 麗，金 星，路松毅，謝逸欣，馬 麗，劉保昌

(1.廣州軍區疾病預防控制中心，廣州 510507;2.76160部隊，廣州 510055;3.廣東省衛生監督所，廣州 510300)

急性骨髓型放射病是機體受到大劑量核輻射后，以骨髓造血功能衰竭、全血細胞減少、免疫功能低下等全身性疾?。?］。在中藥抗輻射損傷研究中，中藥天然藥物復方、單味中藥有效成分已有不少文獻報道［2～4］。為了探討中藥組方對急性骨髓型放射病的治療效果，用小鼠作模型，比較系統地觀察了元參組方對輻射損傷小鼠外周白細胞、骨髓有核細胞及干、祖細胞(CFU-S、CFU-G)的影響。

1 材料與方法

1.1 元參組方

元參組方由元參、黃芩、二花、漏蘆、紅花、三棱、吐絲、雞血藤、土大黃、茜草、甘草11種中藥按常規水煮酒提方法滅菌后制成每5g生藥制成1ml注射液，養血飲由長白山制藥廠生產。

1.2 動物

用日齡50d～60d昆明種小鼠，體重20g～24g，雌雄各半，隨機分為試驗組、陰性對照組、陽性對照組。

1.3 儀器

FA1104上皿電子天平，上海精密科學儀器有限公司;2300C/D直線加速器，美國Varian公司;貝克曼-庫爾特5分類血細胞計數儀，美國 Backman公司;雙目光學顯微鏡(OLYMPUS)，日本生產。

1.4 數據

2 方法

2.1 急性輻射損傷模型的建立

小鼠以X射線全身一次性照射，組織吸收劑量7.0Gy。

2.2 治療方法

治療組于照射后一次性注射元參組方提取液0.2ml，陰性小鼠于照射后注射等體積的生理鹽水，陽性對照組小鼠于照射后灌喂養血飲0.3ml。

2.3 骨髓有核細胞計數

接受7.0Gy照射的小鼠在照后第10天被斷頸處死，無菌條件下取每鼠后肢股骨1根，在2ml 1640培養液沖出其骨髓，并將骨髓單細胞懸液通過4號針頭，做有核細胞計數。

2.4 粒系造血祖細胞(CFU-G)測試方法

采用體內擴散盒瓊脂培養法。培養體系由199培養液、25%新鮮健馬血清、0.3%瓊脂和骨髓有核細胞組成。每個單面擴散盒內注入0.2ml(含104有核細胞)，待凝固后埋入在24h前經環磷酰胺注射的(300mg/kg腹腔注射)昆明種小鼠腹腔內。5d后取出擴散盒，在低倍鏡下計算細胞集落，50個以上細胞組成的集落為1個CFU-G。

2.5 內源性脾結節的計數

接受7.0Gy照射的小鼠在照后第10天被斷頸處死，取出脾臟置于苦味酸飽和溶液(Bouin氏固定液)中固定6h，然后取出以肉眼計數脾凸面的灰白色圓形結節。

3 結果

3.1 元參組方對受照小鼠外周白細胞的作用(見表1)

3.2 元參組方對受照小鼠骨髓有核細胞含量的影響(見表2)

3.3 元參組方對受照小鼠骨髓粒系造血祖細胞的影響(見表3)

表1 元參組方對7.0Gy照射小鼠20天白細胞的影響

表2 元參組方對7.0Gy照射小鼠10d骨髓有核細胞含量的影響

表3 元參組方對7.0Gy照射小鼠10天骨髓粒系造血祖細胞(CFU-G)的影響

3.4 元參組方對內源性脾結結節(CFU-S)的影響(見表4)

表4 元參組方對7.0Gy照射小鼠10d造血干細胞(CFU-S)的影響

3 討論

在前期的實驗中，我們觀察了元參組方作用劑量和時間對造血系統影響［5，6］。本實驗對照國家衛生部認可的生白藥物“養血飲”，研究元參組方對照射后小鼠外周血白細胞的作用。表1、2表明，元參組方有明顯的促進恢復作用，并能使受照小鼠骨髓有核細胞數量明顯增加，其療效高于“養血飲”，表明元參組方確有保護骨髓核細胞、減輕放射損傷程度的作用。表3顯示，元參組方對受照小鼠的骨髓造血祖細胞有很好的保護作用，其療效也優于“養血飲”，推測元參組方促使造血干細胞增殖和向粒系祖細胞和T淋巴祖細胞分化［6］。

小鼠全身照射亞致死量7～7.5Gy后，骨髓中部分存活的CFU-S遷移到脾臟形成結節(CFU-S)，這些CFU-S是屬于自身的，故稱為內源性 CFUS［7］。表4的實驗結果表明，小鼠的 CFU-S數量明顯高于陰性及陽性對照組，表明元參組方能增加內源性多能造血干細胞向脾臟轉移。雖然被亞致死劑量照射小鼠可殺死部分造血干細胞，但殘存的干細胞可能會由于元參組方的作用保留和恢復自我復制的能力。

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［5］劉保昌，虢國泰，馬麗，等.元參組方對粒系造血祖細胞的增殖作用［J］.熱帶醫學雜志，2009，12(9):1391-1393.

［6］劉保昌，虢國泰，曾婷，等.元參組方對小鼠造血干細胞的增殖作用［J］.華南國防醫學雜志，2009，23(6):28-30.

［7］唐佩弦，等.造血細胞培養技術［M］.西安:陜西科學技術出版社，1985:93-107.