十三味辛夷滴鼻劑抗炎和體外抑菌作用研究

黃 玲，黃春新（海南省人民醫(yī)院藥學(xué)部，海口 570311）

十三味辛夷滴鼻劑主要由蒼耳子、辛夷、白芷、細(xì)辛、蓽茇、當(dāng)歸、魚腥草、荊芥、沙棘、鵝不吃草、薄荷腦、冰片等組成，具有芳香通竅的功效，用于緩解鼻腔炎癥引起的鼻塞及鼻塞所致的頭痛等癥狀。十三味辛夷滴鼻劑對(duì)釀膿鏈球菌、甲型溶血性鏈球菌的抗菌作用未見文獻(xiàn)報(bào)道，故本文對(duì)十三味辛夷滴鼻劑的抗炎和體外抗菌作用進(jìn)行研究，以期為臨床治療各種鼻炎提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

721型分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)儀器有限公司）；SW-CJ-1FD型醫(yī)用超凈工作臺(tái)（常州諾基儀器有限公司）；DNP-9082型電熱恒溫培養(yǎng)箱（杭州匯爾儀器設(shè)備有限公司）；DHG-9000型電熱恒溫干燥箱（嘉興中新醫(yī)療儀器有限公司）；FA2104S型電子分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；1-14型離心機(jī)（德國Sigma公司）。

1.2 試藥

十三味辛夷滴鼻劑（山西黃河中藥有限公司，批號(hào)：20101203），用時(shí)以1%的吐溫80（上海滬峰化工有限公司，批號(hào)：20101026）先乳化，用滅菌生理鹽水制成不同濃度的乳劑（50%、25%、12.5%）；注射用青霉素鉀（大同市惠達(dá)制藥廠，批號(hào)20101102，規(guī)格：80萬u）；阿司匹林片（哈藥集團(tuán)制藥總廠，批號(hào)：20101103），用時(shí)以生理鹽水配成所需濃度的溶液；二甲苯（分析純，沈陽市新化試劑廠，批號(hào)：20101223）；乙酸（分析純，天津聯(lián)合化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20101216）。

1.3 菌種

金黃色葡萄球菌（26001）、釀膿鏈球菌（32172）、甲型溶血性鏈球菌（32209-19）、肺炎鏈球菌（31001-19）均由中國食品藥品檢定研究院提供。

1.4 動(dòng)物

昆明種小鼠120只，♀♂兼半，體重（20±2）g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（動(dòng)物生產(chǎn)合格證號(hào)：2011A013）。

2 方法與結(jié)果

2.1 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2.2 十三味辛夷滴鼻劑的抗炎作用

2.2.1 十三味辛夷滴鼻劑對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響[1]

實(shí)驗(yàn)分為5組，即生理鹽水（20 mL·kg－1）、阿司匹林（0.28 g·kg－1）和十三味辛夷滴鼻劑高、中、低濃度（50%、25%、12.5%）組，滴鼻給藥，給藥容積為0.4 mL，每天1次，連續(xù)7 d。末次給藥1 h后，將各組小鼠耳廓用蒸餾水擦洗，以干棉球擦拭干，在每只小鼠的右耳上涂0.05 mL二甲苯，左耳涂等量的生理鹽水作為正常對(duì)照，30 min后用頸脫臼法處死小鼠，用直徑為8 mm的打孔器將小鼠左右耳同部位等面積切下，用電子分析天平分別稱兩耳片重量，按下列公式計(jì)算腫脹度和腫脹抑制率：腫脹度（mg）＝右耳片重－左耳片重；腫脹抑制率＝（生理鹽水組腫脹均值－用藥組腫脹均值）/生理鹽水組腫脹均值×100%。十三味辛夷滴鼻劑對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響見表1。

表1 十三味辛夷滴鼻劑對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響（±s，n＝12）Tab 1 Effect of Shisanwei magnolia xingyi on xylene-induced ear edema in mice（±s，n＝12）

表1 十三味辛夷滴鼻劑對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響（±s，n＝12）Tab 1 Effect of Shisanwei magnolia xingyi on xylene-induced ear edema in mice（±s，n＝12）

與生理鹽水組比較：＊P＜0.01vs.N.S group：＊P＜0.01

組別生理鹽水組阿司匹林組十三味辛夷滴鼻劑高濃度組十三味辛夷滴鼻劑中濃度組十三味辛夷滴鼻劑低濃度組n 1212121212腫脹度/mg 11.01±1.214.13±1.02＊4.32±1.13＊4.61±1.12＊4.98±1.17＊抑制率/%－76.18＊78.34＊70.46＊65.41＊

由表1可知，與生理鹽水組比較，十三味辛夷滴鼻劑高、中、低濃度組耳廓腫脹度顯著減弱，抑制率顯著增加（P＜0.01）。表明高、中、低濃度十三味辛夷滴鼻劑對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹均有明顯的抑制作用。

2.2.2 十三味辛夷滴鼻劑對(duì)小鼠毛細(xì)血管通透性的影響 分組與給藥同“2.2.1”項(xiàng)下方法。末次給藥1 h后，于小鼠尾iv伊文思藍(lán)0.2 mL（濃度為0.5%），隨即再ip 0.2 mL乙酸（濃度為0.6%），20 min后用頸脫臼法處死小鼠，用剪刀剪開腹部皮膚和肌肉，以6 mL生理鹽水分3次洗滌腹腔，用吸管吸出洗滌液，加入生理鹽水至10 mL，3000 r·min－1離心15 min，取上清液，在590 nm波長處比色，測(cè)定吸光度，即可表明毛細(xì)血管通透性狀態(tài)。十三味辛夷滴鼻劑對(duì)小鼠毛細(xì)血管通透性的影響見表2。

表2 十三味辛夷滴鼻劑對(duì)小鼠毛細(xì)血管通透性的影響（±s，n＝12）Tab 2 Effect of Shisanwei xingyi drops on capillary permeability in mice（±s，n＝12）

表2 十三味辛夷滴鼻劑對(duì)小鼠毛細(xì)血管通透性的影響（±s，n＝12）Tab 2 Effect of Shisanwei xingyi drops on capillary permeability in mice（±s，n＝12）

與生理鹽水組比較：＊P＜0.01vs.N.S group：＊P＜0.01

組別生理鹽水組阿司匹林組十三味辛夷滴鼻劑高濃度組十三味辛夷滴鼻劑中濃度組十三味辛夷滴鼻劑低濃度組n 1212121212吸光度0.484±0.1120.183±0.078＊0.223±0.063＊0.257±0.037＊0.299±0.043＊

由表2可知，與生理鹽水組比較，十三味辛夷滴鼻劑高、中、低濃度組吸光度顯著降低（P＜0.01）。表明高、中、低濃度十三味辛夷滴鼻劑能明顯抑制由乙酸所致的小鼠毛細(xì)血管通透性增高。

2.3 十三味辛夷滴鼻劑體外抑菌活性的測(cè)定——杯碟法[2]

將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基溶化，取19 mL鋪于碟（直徑90 mm，深20 mm，大小一致，皿底平坦）中，作為底層，另取5 mL培養(yǎng)基冷卻到50℃，加入金黃色葡萄球菌（26001）、釀膿鏈球菌（32172）、甲型溶血性鏈球菌（32209-19）、肺炎鏈球菌（31001-19）混懸液，制成0.05 mL·mL－1的含菌培養(yǎng)基，均勻攤鋪碟中，待上層充分凝固后，每個(gè)瓊脂板上輕輕放置5個(gè)牛津小杯，其間距應(yīng)相等，用無菌潔凈移液管滴加青霉素鉀標(biāo)準(zhǔn)液（1 u·mL－1）和高、中、低濃度十三味辛夷滴鼻劑，每個(gè)牛津小杯中的加液量為0.2 mL。待所有試液加畢后，換上無菌素?zé)缮w作為培養(yǎng)皿的蓋子，上述操作做3個(gè)重復(fù)，并將平板置37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)18～24 h，之后移去培養(yǎng)皿的素?zé)缮w，再將牛津小杯移去。由于牛津小杯圍產(chǎn)生濃度梯度，各種菌的繁殖被阻止于有效濃度范圍之內(nèi)而形成圓形的透明帶。精確測(cè)量各試驗(yàn)液和青霉素鉀的抑制圈直徑。各菌種對(duì)十三味辛夷滴鼻劑、青霉素鉀的敏感性見表3（抑菌圈直徑16～20 mm，為高度敏感，記“+++”；抑菌圈直徑11～15 mm，為中度敏感，記“++”；抑菌圈直徑10 mm，為輕度敏感，記“+”；抑菌圈直徑小于10 mm，為不敏感或抗藥性，記“－”）。

表3 各菌種對(duì)十三味辛夷滴鼻劑、青霉素鉀的敏感性Tab 3 Sensitivity of the strains to Shisanwei xingyi drops and penicillin potassium

由表3可知，高、中、低濃度十三味辛夷滴鼻劑對(duì)金黃色葡萄球菌、釀膿鏈球菌、甲型溶血性鏈球菌、肺炎鏈球菌的抑菌圈直徑均超過16 mm，為高度敏感。

3 討論

鼻竇炎是常見的鼻部感染之一，其病原菌大多為金黃色葡萄球菌、肺炎球菌、流感桿菌與少數(shù)腸道革蘭陰性菌。感染后，鼻黏膜血管也會(huì)發(fā)生腫脹，從而導(dǎo)致鼻塞[3]。炎癥產(chǎn)生是由于局部受到刺激而引起機(jī)體各種組織的損傷，進(jìn)而激活化學(xué)介質(zhì)，隨之產(chǎn)生血管通透性亢進(jìn)、白細(xì)胞游走與組織增生等變化[4]。本研究表明，十三味辛夷滴鼻劑對(duì)急性非特異性炎性滲出、腫脹有明顯的抑制作用，對(duì)金黃色葡萄球菌、釀膿鏈球菌、甲型溶血性鏈球菌、肺炎鏈球菌的抑菌圈直徑均超過16 mm，為高度敏感。說明其具有明顯的抗炎和抗菌作用。

十三味辛夷滴鼻劑是乳劑，稀釋成各濃度時(shí)要用吐溫80乳化，保持均一性，否則會(huì)影響結(jié)果。在進(jìn)行體外抑菌活性的測(cè)定時(shí)，每一稀釋度應(yīng)更換一支移液管，待所有試液加畢后，要換上無菌素?zé)缮w，因其吸濕性好，在蓋內(nèi)不易形成水滴。測(cè)量抑菌圈時(shí)應(yīng)避免主觀誤差，注意檢查抑菌圈是否圓整，眼睛視線與所讀數(shù)刻度垂直，讀數(shù)要準(zhǔn)確[5]。在測(cè)量抑制圈直徑時(shí)，如采用圓規(guī)兩腳的針尖測(cè)量可提高精度。

為對(duì)十三味辛夷滴鼻劑的藥效學(xué)進(jìn)行較為全面的評(píng)價(jià)，可對(duì)其化學(xué)性和物理性致痛的鎮(zhèn)痛效果與血液流變學(xué)的影響作進(jìn)一步的研究。

[1]徐淑云.藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1994：159.

[2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄79、附錄81、附錄115.

[3]張石革，孫定人.鼻黏膜腫脹與藥物治療[J].中國藥房，2005，16（4）：320.

[4]李 紅，孫文娟，劉 芬，等.追風(fēng)舒經(jīng)活血片的藥效學(xué)研究[J].白求恩醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2001.27（2）：135.

[5]付長春.杯碟法影響抗生素效價(jià)測(cè)定的因素分析[J].西北藥學(xué)雜志，2008，23（5）：310.