松潘烏頭總堿的抗炎機制研究

李 敏，李曉強，焦海勝，王建治（蘭州大學第二醫院，蘭州 730030）

烏頭屬植物松潘烏頭（Aconitum sungpanense Hand.-Mazz.）分布在甘肅、四川、青海等廣大地區，民間常用于治療跌打損傷、風濕性和類風濕性關節炎等疾病。其化學成分主要為多種生物堿，以二萜類生物堿為主[1]。藥理實驗結果證明，松潘烏頭總堿（TAS）有鎮痛、抗炎、解熱的作用[2，3]。筆者將主要研究TAS的抗炎機制，為其開發、利用提供實驗依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

751型分光光度計、UV/VIS-731型紫外分光光度計（上海分析儀器廠）。

1.2 試藥

TAS（蘭州大學藥學院藥物分析教研室提供，含量：1.14%）；消炎痛（蘭州制藥廠，批號：20101106）；角叉菜膠（Car，遼寧藥物研究所）；丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.3 動物

普通級昆明種小鼠，♀♂兼用，體重（22.0±2.0）g（動物生產合格證號：醫動字第14-005）；普通級Wistar大鼠，♀♂兼用，體重（185.0±25.0）g（動物生產合格證號：醫動字第14-006），均由蘭州大學實驗動物中心提供。

2 方法

2.1 明膠致炎小鼠多形核白細胞游走實驗[4]

♂小鼠40只隨機均分為4組，即對照（等容量生理鹽水，ig）、消炎痛（2.0 mg·kg－1，sc）和TAS高、低劑量（3.0、1.5 mg·kg－1，ig）組，每天給藥1次，連續3 d。于末次給藥1 h后ip 1%明膠0.8 mL，3 h后處死小鼠，取腹液1滴涂片，瑞氏染色，油鏡下計100個多形核白細胞、淋巴細胞、組織細胞，從中計算出多形核白細胞的百分比。

2.2 小鼠腹腔毛細血管通透性測試[5]

♀小鼠40只均分為4組，即對照（等容量生理鹽水，ig）、消炎痛（20 mg·kg－1，sc）和TAS高、低劑量（3.0、1.5 mg·kg－1，ig）組。給藥前禁食不禁水12 h。給藥30 min后，每鼠尾iv 0.5%伊文斯藍溶液5 mL·kg－1，5 min后ip 0.7%乙酸溶液10 mL·kg－1，30 min后處死小鼠，用蒸餾水反復沖洗腹腔內伊文思藍溶液，將沖洗液稀釋至5 mL，加0.1 mol·L－1NaH 0.1 mL，于590 nm波長處測吸光度（A）值。

2.3 大鼠足跖炎癥組織PGE含量測定[6]

♂大鼠40只均分為4組，即對照（等容量生理鹽水，ig）、消炎痛（1.5 mg·kg－1，sc）和TAS高、低劑量（2.0、1.0 mg·kg－1，ig）組。給藥30 min后，每鼠左后足跖sc 1%Car 0.1 mL致炎，4 h后處死大鼠，將致炎足自踝關節上1 cm處剪下，稱重，浸泡于5 mL生理鹽水中45 min后，于50℃水浴異構化20 min，加甲醇溶液5 mL，于278 nm波長處測定A值，計算前列腺素E（PGE）含量。

2.4 Car致炎大鼠氣囊灌洗液中MDA含量和血清SOD活性測定

分組與給藥同“2.3”項下方法。于Car致炎前給藥，每天1次，連續4 d；致炎后6 h再給藥1次。第4天給藥1 h后，于大鼠背部氣囊內注射Car 25 mg·kg－1誘發炎癥，致炎后12 h處死大鼠，取血、離心、制備血清，待測SOD活性；氣囊內注射4 mL Hank’s液進行灌洗，收集灌洗液于試管內，于4℃離心，取上清液，待測MDA含量。SOD活性和MDA含量測定按試劑盒說明書進行。

2.5 統計學方法

3 結果

3.1 TAS對明膠致炎小鼠多形核白細胞游走的影響

對照、消炎痛和TAS高、低劑量組小鼠腹腔液中多形核白細胞百分比分別為（42.50±15.34）%、（21.87±16.92）%、（20.58±17.34）%、（23.16±12.09）%。與對照組比較，TAS高、低劑量組有顯著性差異（P＜0.01），表明TAS能明顯抑制明膠誘發的多形核白細胞的游走，使其百分比降低。

3.2 TAS對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響

對照、消炎痛和TAS高、低劑量組A值分別為（0.250±0.045）、（0.139±0.033）、（0.125±0.026）、（0.138±0.031）。與對照組比較，TAS高、低劑量組有顯著性差異（P＜0.01），表明TAS能使伊文思藍滲出量明顯減少，即降低了乙酸所致毛細血管通透性增加。

3.3 TAS對Car誘發的大鼠足跖炎癥組織PGE含量的影響

對照、消炎痛和TAS高、低劑量組大鼠足跖炎癥組織PGE的含量分別為（232.71±39.62）、（103.68±27.25）、（109.42±28.15）、（118.24±31.52）mg·g－1。與對照組比較，TAS高、低劑量組有顯著性差異（P＜0.01），表明TAS能使大鼠炎癥組織中PGE的含量明顯減少。

3.4 TAS對Car致炎大鼠氣囊灌洗液中MDA含量和血清SOD活性的影響

與對照組比較，TAS高、低劑量組MDA含量顯著減少，SOD活性顯著增強（P＜0.01或P＜0.05）。TAS對模型大鼠氣囊灌洗液中MDA含量與血清SOD活性的影響見表1。

4 討論

先前的藥理實驗結果表明，TAS對二甲苯致小鼠耳腫，蛋清、Car、甲醛性大鼠足腫與大鼠瓊脂性肉芽增生均有明顯抑制作用，說明TAS具有顯著的抗急、慢性炎癥作用[3]。從本研究結果觀察到，TAS能降低乙酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增加；使明膠誘發的小鼠腹腔炎性滲出液中多形核白細胞百分比降低；使大鼠足跖炎癥組織PGE的含量明顯減少。提示TAS的抗炎作用機制可能與其降低毛細血管通透性、減少滲出，抑制白細胞游走，降低其向炎癥部位的聚集（趨化），以及抑制炎癥介質PGE的釋放有關。

表1 TAS對模型大鼠氣囊灌洗液中MDA含量與血清SOD活性的影響（±s，n＝10）Tab 1 Effects of TAS on MDA content and SOD activity in air sac irrigating solution of model rats（±s，n＝10）

表1 TAS對模型大鼠氣囊灌洗液中MDA含量與血清SOD活性的影響（±s，n＝10）Tab 1 Effects of TAS on MDA content and SOD activity in air sac irrigating solution of model rats（±s，n＝10）

與對照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.control group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別對照組消炎痛組TAS高劑量組TAS低劑量組劑量/mg·kg－1－1.52.01.0 MDA/nmol·mL－111.28±1.137.81±0.97＊＊7.52±0.88＊＊8.11±0.97＊＊SOD/U·mL－198.26±27.02128.06±21.92＊＊130.32±26.21＊＊123.82±24.15＊

氧自由基在疾病中所起的作用日益被人們所重視。據報道，類風濕性關節炎患者病灶中氧自由基明顯增多，可能是其病理機制之一；大鼠佐劑性關節炎局部炎癥與脂質過氧化程度密切相關[7]。本研究結果表明，Car致炎大鼠氣囊灌洗液中MDA水平明顯增高、血清SOD活力明顯降低，與上述報道相一致。而TAS使大鼠炎性灌洗液中MDA含量降低、血清SOD活性升高，提示抑制脂質過氧化反應、減少氧自由基的生成，可能是TAS抗炎作用的又一重要機制。

[1]李洪剛，李廣義.松潘烏頭二萜生物堿的研究[J].藥學學報，1988，3（23）：460.

[2]黨月蘭，胡兆勇，吳福祥.松潘烏頭總堿的鎮痛作用和身體依賴性的實驗研究[J].中國藥物依賴性通報，1993，3（2）：242.

[3]楊軍英，黨月蘭.松潘烏頭總堿的抗炎解熱作用[J].中國臨床藥理學與治療學，2003，8（4）：441.

[4]黨月蘭，駱 勤，李淑玉.紅毛五加總甙的抗炎作用[J].中藥藥理與臨床，2000，16（1）：14.

[5]馬建秀，高明堂，馬迎春.棉丹通肺化淤膠囊鎮痛抗炎的實驗研究[J].中藥藥理與臨床，2005，21（3）：49.

[6]李儀奎.中藥藥理實驗方法學[M].第1版.上海：上?？茖W技術出版社，1991：307.

[7]丁長海，陳敏珠，魏 偉，等.抗氧自由基藥物研究進展[J].中國藥理學通報，1992，8（5）：332.