莓葉委陵菜醇提物急性毒性實驗研究

閔運江，陳澍潭

（1.皖西學院 生物與制藥工程學院，安徽 六安237012；2.安徽省植物生物技術實訓中心，安徽 六安237012）

莓葉委陵菜（Potentilla fragarioides L.），為薔薇科（Rosaceae）委陵菜屬（Potentilla）多年生草本植物［1-2］，別名雉子筵、毛猴子、菜飄子、滿山紅等。其根極多；莖直立或傾斜，簇生叢狀，莖葉有長柔毛；基生葉為成叢生狀，奇數羽狀復葉，葉柄有開展的疏長柔毛，小葉5～9枚，上部小葉較下部的大。頂生傘房狀聚傘花序，花多，黃色；瘦果小，近腎形。常生長于草地、溝邊、灌叢及疏林下。

莓葉委陵菜主產江蘇、浙江、江西、山東及安徽等省。其植株中的生物活性成分含量豐富，其中總黃酮含量，顯著高于已被廣泛研究的銀杏葉中黃酮含量。據初步研究，安徽產委陵菜屬植物各種類的全草都含黃酮類、三萜類、有機酸等［3］，均可藥用，已有報道的委陵菜（Potentilla chinensis Ser.）、三葉委陵菜（Potentilla freyniana Bornm.）等三萜類成分含量較高，有清熱解毒、涼血止血等功能［4-5］。黃酮類、三萜類等化合物具有較強生物活性，能防治血管硬化和降低心肌耗氧量等；也是天然抗氧化劑，能增強機體免疫力、抗衰老、抗癌防癌等，在食品和醫藥等領域具有廣泛的應用［6-10］。有研究表明，三萜類有顯著抗病毒活性［11-12］。此外，莓葉委陵菜因其花色鮮黃而艷麗，繁殖力強而在城市園林綠化中常被用作地被植物。而對于莓葉委陵菜的乙醇提取物急性毒性研究尚未見報道。本研究即是用新制備的莓葉委陵菜乙醇提取物給實驗小鼠灌胃，觀察其急性毒性反應，從而為莓葉委陵菜的藥用開發利用提供初步的安全性參考數據。

1 材料、方法

1.1 實驗動物

試驗所用小鼠為南京醫科大學實驗動物中心提供的昆明種小鼠，許可證號：SCXK（蘇）2002-0031，雌雄各占50%，體重20±2g。正式試驗前先適應性飼養1周。

1.2 儀器、試劑

TU-1201紫外-可見分光光度計，HH—4恒溫水浴鍋，40目標準檢驗篩，RE-52D旋轉蒸發器，101AS-2型電熱鼓風干燥箱，超聲波破碎儀，加熱回流裝置；乙醇，乙醚，等；試劑均為AR級。

1.3 莓葉委陵菜乙醇提取物的制備

1.3.1 莓葉委陵菜的處理

新鮮莓葉委陵菜根采于六安市小華山荒地林緣，新鮮材料先經105℃殺青15min，70℃烘至近干，剪成2～3mm小段，再用103℃烘干。干樣品磨成粉末，過40目篩后的粉末于103℃烘至恒重，干燥器中冷卻，備用。

1.3.2 脫脂

Soxhlet提取法，45℃下無水乙醚脫脂約20h，待充分除去樣品中脂類和脂溶性色素后取出樣品濾紙包，吹干乙醚，103℃烘干，備用。

1.3.3 浸提

脫脂后的材料，置于三角燒瓶中，搗碎并加入80%乙醇（V／V），80℃水浴中回流浸提10次，每次浸提2h，第一次浸提固液比為1∶5（g∶ml），其后各次浸提的固液比為1∶3，最后一次浸提的乙醇浸提液幾乎為無色，表明已浸提充分。合并10次浸提液于分液漏斗中，加適量石油醚，充分震蕩，靜置，棄去石油醚層，以進行二次脫脂，收集脫脂處理后的含粗黃酮和三萜類物質的提取液，用旋轉蒸發器減壓濃縮，至一定體積后取出，移于燒杯內。

1.3.4 制備乙醇提取物

將上述燒杯中的浸提液，在90℃水浴中加熱濃縮，至注射器能抽動的最大濃度，即為實驗用莓葉委陵菜乙醇提取物。換算該乙醇提取物，每ml提取物相當于3.6g新鮮莓葉委陵菜原料。依據文獻方法［13］，測定提取物中黃酮類和三萜類的含量，提取物中含三萜類和黃酮類總量為36.0mg／ml。

1.4 動物實驗

依文獻方法［14-15］，選取體重20±2g的小鼠20只，隨機分為2組，每組雌雄各半，分別為給藥組和空白對照組。給藥組小鼠分別在頭、背、尾部用黑色記號筆標注，記錄為1～10號。灌胃前禁食不禁水16 h，按每kg小鼠體重給予莓葉委陵菜乙醇提取物20 ml劑量灌胃；灌胃后，連續觀察小鼠7d，記錄其活動、飲食、毛發、大小便和死亡情況等，解剖觀察死亡小鼠的心、肺、肝、腎、脾等主要器官的組織變化；未死亡的小鼠，實驗第8d稱其體重后處死，解剖觀察其心、肝、脾、肺、腎等主要器官的組織變化。

2 結果

2.1 莓葉委陵菜乙醇提取物對小鼠體征的影響

小鼠給予莓葉委陵菜乙醇提取物21.50g／kg灌胃后10min內，與對照組小鼠比較，均表現為活動減少，精神不佳；10min后，小鼠活動恢復正常，應為灌胃刺激的影響所致；連續觀察7d，存活的受試小鼠的飲食、毛色、活動及大小便均正常，眼、鼻、口腔未見異常分泌物，無不良癥狀出現。

2.2 給藥前后小鼠體重的變化

各組小鼠的體重及其變化情況見表1。

由表1可見，給藥組小鼠體重平均增重6.6g，而空白對照組小白鼠的體重增重7.1g，考慮到灌胃影響，尤其是灌胃初期對其食欲的影響，可認為藥物對其體重增重無顯著影響。

表1 莓葉委陵菜醇提物對試驗小鼠體重的影響

2.3 小鼠死亡狀況

灌胃后7d，給藥組小鼠有一只在給藥后1min內死亡，經解剖后發現是由于灌胃時注射器針頭插進了胸腔里，導致胸腔破裂等機械性致死，屬于操作不當致死，其余試驗小鼠均正常，未出現給藥后死亡的情況。

2.4 對小鼠心、肝、肺、腎、脾等臟器的影響

處死所有試驗后的小鼠，解剖各組實驗小鼠心、肺、肝、腎、胃、脾等主要臟器，均未見異常病變。

由以上試驗可知，莓葉委陵菜醇提物21.50g／kg灌胃小鼠，對小鼠均無影響，表明莓葉委陵菜乙醇提取物對小鼠的LD50大于21.50g／kg。

3 討論

目前，國內外對委陵菜屬植物的研究，大多是針對其性狀、產地分布、種屬分類及栽培技術等方面，國外有其抗病毒活性的研究。對莓葉委陵菜醇提物的急性毒性研究，是為其藥用、食用時對人體是否有毒副作用的基本要求之一。根據保健食品毒理學實驗方法，本研究將小白鼠分為2組，每組10只，雌雄各半，分為給藥組和空白對照組。實驗觀察結果，只有1只由于操作不當致其死亡，其余小鼠灌胃后的活動、飲食、糞便、毛發和精神狀態等方面，均無異常表現，未見任何急性中毒癥狀或藥物致死現象，表明試驗小鼠在灌胃莓葉委陵菜乙醇提取物20ml／kg，即720mg／kg的情況下，未出現急性中毒癥狀。因此，小鼠對受試物的LD50大于21.50g／kg，表明莓葉委陵菜乙醇提取物對實驗小鼠無毒副作用［11-12］。

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