高效毛細管電泳法測定纈沙坦苯磺酸氨氯地平

李志偉，趙云超，齊建敏

（河北科技大學化學與制藥工程學院，河北石家莊 050018）

高效毛細管電泳法測定纈沙坦苯磺酸氨氯地平

李志偉，趙云超，齊建敏

（河北科技大學化學與制藥工程學院，河北石家莊 050018）

建立了一種高效毛細管電泳方法，用于纈沙坦和苯磺酸氨氯地平的同時分析：以30 mmol／L磷酸鈉緩沖液（p H＝7.47）作為電解質溶液，檢測波長237 nm，分離電壓15 k V，高度差進樣10 s.同時進行了方法學驗證：纈沙坦在0.050 4～0.504 0 mg／mL內線性良好（r＝0.999 8，n＝6），遷移時間和峰面積的相對標準偏差（RSD）分別為0.3%和1.3%（n＝6），回收率為98.98%～99.79%；苯磺酸氨氯地平在0.050 4～0.504 0 mg／mL內線性良好（r＝0.999 6，n＝6），遷移時間和峰面積的RSD為0.6%和1.4%（n＝6），回收率為98.22%～99.46%.通過上述高效毛細管電泳法，纈沙坦和苯磺酸氨氯地平在15.0 min內分離良好，分離度（R＝29.8）.此方法快速，靈敏，實用.

纈沙坦；苯磺酸氨氯地平；高效毛細管電泳法

苯磺酸氨氯地平（amlodipine besylate）是一種重要的二氫吡啶類的鈣離子通道阻滯劑，纈沙坦（valsa－rtan）屬于血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑.通過纈沙坦和苯磺酸氨氯地平綜合治療，高血壓患者的血壓可以降低到正常水平，而不會影響生活質量［1］.2008年7月23日，FDA將纈沙坦和苯磺酸氨氯地平復方制劑，作為治療高血壓的一線藥物.降壓藥物的聯合應用，可以降低用藥劑量，并且能夠更好地保護靶器官.通過不同的作用機制，發揮協同作用，使血壓得到長期的控制.目前，測定纈沙坦和苯磺酸氨氯地平的方法主要有：分光光度法［2］，熒光法，氣相色譜法，流動注射化學發光法，高效液相色譜法和液相色譜－質譜聯用法［3－7］.本文建立了一種高效毛細管電泳方法，用于纈沙坦和苯磺酸氨氯地平片劑中2種成分的分析，具有柱效高、分離速度快、樣品用量少等優點.

1 實驗部分

1.1 儀器和試劑

高效毛細管電泳儀（北京彩陸科學北京彩陸科學儀器有限公司），CL1020型紫外檢測器，HW－2000型色譜工作站，未涂層石英毛細管柱（75μm×75 cm，河北永年銳灃色譜器件公司）.所用化學試劑均為分析純或色譜純.氫氧化鈉、磷酸氫二鈉、甲醇和磷酸均購自天津市科密歐化學試劑開發中心，水為自制重蒸水.

1.2 電泳條件

電泳介質30 mmol／L磷酸鈉緩沖液（用磷酸調p H＝7.47，使用前脫氣）；高度差進樣10 s；分離電壓15 k V；檢測波長237 nm；室溫下操作.實驗前依次用0.1 mol／L NaOH沖洗2 min，重蒸水沖洗3 min，緩沖液沖洗3 min.2次進樣之間，用緩沖液沖洗毛細管.

1.3 溶液配制

分別精密稱取纈沙坦和苯磺酸氨氯地平各10.0 mg，置10 mL量瓶中，用甲醇－水（V（甲醇）∶V（水）＝1∶1）溶解并稀釋至刻度；精密量取1 m L，置10 m L量瓶中，用甲醇－水（V（甲醇）∶V（水）＝1∶1）稀釋至刻度.制備一系列不同質量濃度的標準溶液（0.050 4～0.504 0 mg／m L），進樣前用0.45μm的濾膜過濾.

取纈沙坦苯磺酸氨氯地平薄膜衣片，置50 m L量瓶中，加入5 m L水，振搖45 min使崩散，超聲15 min再機械攪拌30 min，放冷，加溶劑甲醇－水稀釋至刻度，搖勻，離心，取上清液用0.45μm的濾膜過濾，作為供試品溶液.

2 結果與討論

2.1 分離條件

2.1.1 緩沖液及p H值的選擇

實驗嘗試使用幾種不同類型的緩沖液如磷酸鈉，磷酸－硼砂，硼酸鈉.通過比較發現磷酸鈉的分離效果較好.隨后，考察了緩沖液的濃度和p H值的影響.對p H值在3.0～8.5內進行了考察，結果發現：p H越高，遷移時間越短.但是，p H值過高或過低，纈沙坦和苯磺酸氨氯地平不能達到很好地分離.因此，最終確定的緩沖液p H＝7.47.

2.1.2 濃度的選擇

磷酸鈉緩沖液的濃度會影響到電滲流和分離度.本實驗考察了一系列不同濃度的磷酸鈉緩沖液，結果表明：在低濃度時（7.5 mmol／L），峰部分重疊，而在高濃度時（40 mmol／L），由于離子強度增高而導致重現性變差，最終確定緩沖液的濃度為30 mmol／L.

2.1.3 分離電壓的選擇

工作電壓會影響到分離度及分析時間.實驗在5～25 k V內對分離電壓進行了考察，結果顯示：隨著分離電壓的增大，分析時間縮短，柱效增大.然而，隨著電壓的增大，柱內的焦耳熱也變大，分離度降低，系統變得不穩定.綜合考慮分離度以及分析時間等因素，最終選擇分離電壓為15 k V.

通過上述考察，最終確定的分離條件是0.03 mol／L磷酸鹽緩沖液（用磷酸調p H＝7.47），分離電壓15 k V.在此條件下，纈沙坦和氨氯地平能夠在較短時間內達到完全分離.圖1為電泳圖譜，其中，苯磺酸氨氯地平的遷移時間為4.12 min，纈沙坦的遷移時間為11.12 min，分離度良好（R＝29.8），并且沒有其他雜峰的干擾.結果表明，高效毛細管電泳法是一種簡單，快速的測定纈沙坦和苯磺酸氨氯地平的方法.

圖1 標準溶液電泳（10 mg／L）Fig.1 HPCE electrophoregram of the standard solution（10 mg／L）

2.2 方法學驗證考察

2.2.1 線性實驗

在0.050 4～0.504 0 mg／mL內，分別配制6種不同質量濃度的纈沙坦和氨氯地平的標準溶液，每種質量濃度進樣6次.以質量濃度和峰面積進行線性回歸，苯磺酸氨氯地平的線性方程為Y＝720.2X＋2.85

（r＝0.999 6），纈沙坦的線性方程為Y＝2735.3X＋226.47（r＝0.999 8），其中，X為溶液質量濃度（mg／m L），

Y為峰面積.結果表明：在0.050 4～0.504 0 mg／mL內，纈沙坦和氨氯地平線性關系良好.

2.2.2 回收率實驗

按照處方中主藥及輔料的比例，分別配制低、中、高3種不同質量濃度的纈沙坦和苯磺酸氨氯地平溶液，按照2.2節下的方法進行檢測.苯磺酸氨氯地平的回收率為98.22%～99.46%，纈沙坦的回收率98.98%～99.79%.結果如表1和表2所示.

表1 纈沙坦回收率Tab.1 Assary results of recovery for valsartan

表2 苯磺酸氨氯地平回收率Tab.2 Assary results of recovery for amlodipine besylate

2.2.3 檢測限

依據色譜峰信噪比S／N＝3計算.纈沙坦和苯磺酸氨氯地平的檢測限分別為1.5 mg／L和9 mg／L.結果如圖2所示.

圖2 檢測限電泳Fig.2 Electrophoregram of the detection limit

2.2.4 重復性

在相同條件下，對配制好的溶液（按照處方比例）進行重復檢測，計算遷移時間和峰面積的相對標準偏差.纈沙坦遷移時間和峰面積的相對標準偏差分別為0.3%和1.3%（n＝6），苯磺酸氨氯地平遷移時間和峰面積的相對標準偏差分別為0.6%和1.4%（n＝6）.

2.3 樣品測定

按照已經確定的方法，對3批纈沙坦氨氯地平片進行檢測，電泳圖譜如圖3所示，3批樣品含量測定結果如表3所示.

圖3 纈沙坦氨氯地平片電泳Fig.3 Electrophoregram of the tablets

表3 3批片劑的含量測定結果Tab.3 Results of three batches of tablets

3 結論

實驗考察了不同電泳條件對分離的影響，結果表明，與現有的液相色譜方法相比，該法是一種快速、簡便、高效的方法，可以同時測定纈沙坦苯磺酸氨氯地平片中的有效成分.

［1］TALMA R，IRENE G.Fixed－drug combinations as first line treatment for hypertension［J］.Prog Cardiovasc Dis，2006，48（6）：416－425.

［2］PANDERI I.Simultaneous determination of benazepril hydrochloride and hydrochlorothiazide in tablets by second－order derivative spectrophotometry［J］.J Pharm Biomed Anal，1999，21（2）：257－265.

［3］鄧慶文，趙旭麗，郭潔，等.流動注射－化學發光法測定苯磺酸氨氯地平［J］.理化檢驗：化學分冊，2011，47：794－796.

DENG Qingwen，ZHAO Xuli，GUO Jie，et al.FI－Chemiluminescence determination of amlodipine besylate［J］.PTCA（Part B；CHEM ANAL），2011，47：794－796.

［4］胡在林.反相高效液相色譜法測定苯磺酸氨氯地平膠囊的含量和有關物質［J］.中國藥業，2011，20（12）：28－29.

HU Zailin.Determination of contents and related substances in amlodipine besylate capsules by RP－HPLC［J］.China Pharmaceuticals，2011，20（12）：28－29.

［5］MARCIN Z，SIMON D.Enantioselective quantification of carvedilol in human plasma by HPLC in heavily medicated heart failure patients［J］.J Pharm Biomed Anal，2010，52（4）：636－641.

［6］劉雪松，劉偉，門金玉，等.高效液相色譜－串聯質譜法測定人血漿中的纈沙坦［J］.中國新藥雜志，2011，20（14）：1321－1324.

LIU Xuesong，LIU Wei，MEN Jinyu，et al.Determination of valsartan in human plasma a by HPLC－MS／MS［J］.Chinese Journal of New Drugs，2011，20（14）：1321－1324.

［7］KESTING J，HUANG Jingqi.Identification of adulterants in a Chinese herbal medicine by LC－HRMS and LC－MS－SPE／NMR and comparative in vivo study with standards in a hypertensive rat model［J］.J Pharm Biomed Anal，2010，51（3）：705－711.

Simultaneous determination of valsartan and amlodipine besylate by high performance capillary electrophoresis

LI Zhi－wei，ZHAO Yun－chao，QI Jian－min
（College of Chemical and Pharmaceutical Enginering，Hebei University of Science and Technology，Shijiazhuang 050018，China）

A high performance capillary electrophoresis（HPCE）method was established for the simultaneous determination of valsartan and amlodipine.The background electrolyte system composed of 30 mmol／L phosphate buffer（p H＝7.47）was found to be the most suitable solution for this separation at the detection wavelength of 237 nm，separation voltage of 15 k V and the injection of sample for 10 s.The linear calibration ranges were 0.050 4 to 0.504 0 mg／mL（r＝0.999 8，n＝6）for valsartan，and 0.050 4 to 0.504 0 mg／mL（r＝0.999 6，n＝6）for amlodipine besylate.The relative standard deviations（RSD）（n＝6）of the migration time and peak－area counts of valsartan were 0.3%and 1.3%respectively，while amlodipine besylate 0.6%and 1.4%.The recoveries were determined to be 98.98%—99.79%for valsartan，98.22%—99.46%for amlodipine besylate.By using proposed HPCE method，valsartan and amlodipine besylate were well－separated within only 15.0 min（R＝29.8）.This method is rapid，sensitive and practical.

valsartan；amlodipine besylate； HPCE

O657.8

A

1000－1565（2012）02－0149－05

2011－11－20

河北省自然科學基金資助項目（B2010000849）

李志偉（1977－），男，河北唐縣人，河北科技大學副教授，博士，主要從事藥物分析研究.E－mail：lizhiwei＠hebust.edu.cn

梁俊紅）