潰瘍性結腸炎患者血清和結腸上皮細胞中細菌鞭毛蛋白的表達*

周 川，郝卉杰，薛福敏，張建立，石朝陽，楊萬荷，仝亞林，馮百歲

鄭州大學第一附屬醫院消化內科鄭州450052

#通訊作者，男，1965年10月生，博士，教授，研究方向:炎癥性腸病，E-mail:fbs163@163.com

炎癥性腸病(inflammatory bowel disease，IBD)包括克羅恩病和潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis，UC)，其病因和發病機制尚未闡明。目前國外報道［1］認為鞭毛蛋白是存在于細菌表面的絡合物的重要分子組成成分，對細菌的黏附能力和活力起著重要作用。哺乳動物體內有受體可以識別細菌鞭毛蛋白，介導機體產生一系列炎癥反應。作者通過檢測UC 患者外周血中細菌鞭毛蛋白抗體的含量和腸黏膜細菌鞭毛蛋白的表達，探討細菌鞭毛蛋白在UC 致病中的作用，為進一步明確IBD 的病因提供新的思路。

1 對象與方法

1.1 研究對象 收集2009年9月至2010年10月鄭州大學第一附屬醫院門診和住院的UC 患者60例，采用Truelove 和Witts UC 分度標準［2］，中、重度UC患者30例，年齡16～55(35.2±7.5)歲;輕度UC 患者30例，年齡20～50(36.2±7.8)歲。結腸鏡下取病灶處腸黏膜活檢組織。30例健康志愿者為血清對照組，年齡22～53(31.4±8.2)歲。15例腸黏膜對照組為結腸癌行外科手術切除的正常結腸斷端，均經病理證實，年齡28～55(40.8±8.3)歲。所有對象受試前4 個月內均未接受氨基水楊酸、糖皮質激素及免疫抑制劑等治療，且未合并其他自身免疫性疾病、病毒性肝炎等。研究對象均簽訂知情同意書。

1.2 血清細菌鞭毛蛋白抗體水平檢測 采受試者外周血1 mL，進行細菌鞭毛蛋白抗體檢測，ELISA 試劑盒購自美國R＆D 公司，實驗嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3 結腸上皮細胞中細菌鞭毛蛋白的表達 采用免疫組化SABC 法測定。取石蠟切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，滴加抗人細菌鞭毛蛋白一抗(美國UCL 公司產品，使用時稀釋100 倍)。4℃冰箱過夜，次日加入生物素二抗，DAB 顯色，各步驟之間用PBS 沖洗3 次，每次5 min，依次脫水和封片，以PBS 代替一抗作陰性對照，以已知陽性切片作陽性對照。均嚴格按試劑盒說明書步驟進行操作。結果判定:高倍鏡(×400)下選擇5 個不重復視野觀察。陽性細胞百分比:0～25%為0 分，～50%為1 分，～75%為2 分，＞75%為3 分。染色強度:無色或黃色為1 分，棕色為2 分，褐色為3 分。以上兩項得分之和≥3 分為陽性，＜3 分為陰性。

1.4 統計學處理 采用SPSS 16.0 處理數據，各組患者血清細菌鞭毛蛋白抗體水平的比較應用單因素方差分析和SNK-q 檢驗，結腸上皮細胞中細菌鞭毛蛋白表達的比較應用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 各組患者血清細菌鞭毛蛋白抗體水平的比較見表1。

表1 各組患者血清細菌鞭毛蛋白抗體水平的比較ng/L

2.2 各組結腸上皮細胞中細菌鞭毛蛋白的表達見圖1。腸黏膜對照、輕度UC 和中、重度UC組結腸上皮細胞中細菌鞭毛蛋白表達的陽性率分別為20.0%(3/15)、56.7%(17/30)和73.3%(22/30)，3 者比較，差異有統計學意義(χ2= 11.553，P =0.003)。其中輕度UC 和中、重度UC組高于對照組，中、重度UC組高于輕度UC組。

圖1 各組結腸上皮細胞中細菌鞭毛蛋白的表達(SABC，×400)

3 討論

IBD 是一種病因和發病機制尚未完全明確的慢性非特異性腸道炎癥性疾病，目前，腸道細菌的感染因素已經越來越受到重視。腸腔里存在大量種類繁多的細菌，這些細菌在正常情況下是營養腸道、促進腸道發育的必需細菌，腸黏膜先天固有的免疫系統對其免疫耐受，若打破這種免疫耐受，則會引起腸道炎癥的發生［3-5］。運動型的細菌都有復雜的體表細胞器和鞭毛，通過感知外界信號，協調運動，以利于細菌的生長和生存。細菌鞭毛包括三個部分:類似于發動機功能的基部小體，扭轉的鉤狀結構和空心的螺旋纖維(即鞭毛)［6］。鞭毛蛋白由鞭毛的中心管道分泌，在末端的螺旋結構中組裝合成［7-8］。細菌鞭毛具有運動、黏附、侵襲黏膜的能力，并且能夠釋放毒力因子，所以是導致細菌致病的重要結構。

該研究結果顯示，UC 患者血清中的細菌鞭毛蛋白抗體水平和腸上皮中細菌鞭毛蛋白的表達較對照組增高，UC 病情越重增高越明顯，提示細菌鞭毛蛋白與UC 病情的輕重有關，細菌鞭毛蛋白可能是UC致病和炎癥持續發生的重要因素。

總之，細菌鞭毛蛋白可能參與了UC 的發病和病情進展過程，為進一步了解UC 的病因及其治療提供一種新的思路。

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