不同分子亞型乳腺浸潤性導管癌組織中Sox2和Oct4蛋白的表達*

史立綱，呂新全，燕 麗，徐正順，李惠翔

鄭州大學第一附屬醫院病理科 鄭州450052

#通訊作者，1960年7月生，博士，教授，研究方向:腫瘤病理，E－mail:huixiang19@yahoo.com.cn

腫瘤干細胞是存在于腫瘤組織中的一群特殊的細胞，具有自我更新、多向分化、高致瘤性等特點。由于其具有對放化療的抵抗性而不易被常規治療手段根除，造成腫瘤治療后復發。Oct4 在胚胎細胞中表達，是細胞分化全能性的標記［1］，表達Oct4 的細胞可能是引起腫瘤發生的起始細胞［2］。Sox2 是Sox家族成員之一，在維持干細胞的多能性方面發揮重要作用［3］。乳癌干細胞的研究近年來取得了很大的進展［4］。Perou 等［5－6］提出乳癌基因分型這一全新概念，將乳癌分為Luminal A、Luminal B、HER－2、和Basal－like 4 種分子亞型。Carey 等［7］的研究證實，基因分型與乳癌患者預后有關。作者應用免疫組化SP 法檢測不同分子亞型乳腺浸潤性導管癌組織中腫瘤干細胞標志的表達情況，以期從腫瘤干細胞角度對各亞型的生物學行為進行探討。

1 材料與方法

1.1 標本來源及分型 標本選自鄭州大學第一附屬醫院乳腺外科2008年6月至2010年3月手術切除后病理證實的乳腺浸潤性導管癌的標本共120例;患者均為女性，年齡24～75 歲，首次發病，術前未進行放化療和其他免疫治療。其中Luminal A 45例、Luminal B 29例、HER－2 27例 和Basal－like 19例。

1.2 乳腺浸潤性導管癌組織中Oct4 和Sox2 蛋白表達的檢測 采用免疫組化SP 法。Oct4、Sox2 單克隆抗體(即用型)及SP 試劑盒均為美國Zymed 公司產品。乳癌組織常規石蠟包埋，4 μm 厚連續切片。按SP 試劑盒說明書進行操作。DAB 顯色，蘇木精復染、封片。用已知Oct4、Sox2 表達陽性的精原細胞瘤組織切片和CK5/6 表達陽性的正常乳腺組織切片作陽性對照，用PBS 代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判定［8］鏡下Oct4、Sox2 陽性為位于細胞核內的棕黃色均勻細顆粒。CK5/6 陽性表達主要在細胞質。根據陽性細胞所占比例:陽性細胞數＜10%為1 分，10%～為2 分，50%～75%為3 分，＞75%為4 分; 根據顯色程度判斷陽性強度:標本無著色為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。兩者得分乘積0～2 分為－，3～4 分為+，6～8 分為，8 分以上為。

1.4 統計學處理 采用SPSS 13.0 處理數據。應用秩和檢驗比較不同分子亞型乳癌組織中Oct4 和Sox 蛋白表達的差異，應用Spearman 分析檢測乳癌組織中Oct4 和Sox 蛋白表達的相關性，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 不同分子亞型乳腺浸潤性導管癌組織中Oct4、Sox2 蛋白的表達 見圖1、表1。

圖1 不同分子亞型乳腺浸潤性導管癌組織中Oct4(A)、Sox2(B)蛋白的表達(SP，×400)

2.2 乳腺浸潤性導管癌組織中Oct4 與Sox2 蛋白表達的關系 見表2。

表1 不同分子亞型乳腺浸潤性導管癌組織中Oct4、Sox2 蛋白的表達

表2 乳腺浸潤性導管癌組織中Oct4 與Sox2 蛋白表達的關系

3 討論

Oct4 基因定位于染色體6q21.3，屬于Pou 區轉錄因子家族［9］，其表達于卵母細胞、原始生殖細胞和胚胎干細胞，但在其分化的子代細胞中不表達［10］，提示其與細胞的多能性分化密切相關; 可能是一個特異的分化全能性基因標記或者是分化全能性的必需基因。既往研究［11］發現其在精原細胞瘤、中樞系統生殖細胞腫瘤、卵巢無性細胞瘤和胚胎性癌中表達。有學者［12］發現Oct－4 表達水平與一些上皮性惡性腫瘤(如胰腺癌和膀胱癌等)的發生和生物學行為關系密切，陽性表達者預后較差。有研究［11］報道在散發性乳癌中，Sox2 常優先表達于“基底型”乳癌中，表明Sox2 可能在調控乳癌的未分化狀態中發揮作用。

依據特異基因表達狀態進行分子亞型分類是為乳癌分型的新觀點，在預測乳癌復發轉移風險、評估治療反應及判斷生存預后等方面比傳統的依據腫瘤大小、組織學類型、淋巴結轉移等更準確［13］。在預后比較上，Luminal A 較好，Luminal B 其次，HER－2較差，Basal－like 型乳癌患者預后最差［14］。該研究結果顯示Oct4 和Sox2 在乳癌亞型中陽性表達率明顯不同，以Basal－like 型最高，說明該型中多能性或全能性細胞比例高，與Rodriguez－Pinilla 等［11］的發現一致。由于腫瘤干細胞分化極低，更容易適應不同的機體環境，而且其具有較高的耐藥性，致使化療療效較差，因此推測含有乳癌干細胞數量多的乳癌亞型其預后也將較差，這可能是Basal－like 型乳癌的臨床預后最差的原因之一。

作者觀察了乳腺浸潤性導管癌中Oct4 和Sox2蛋白的表達之間的關系，結果表明癌組織中Oct4 和Sox2 的表達呈正相關，提示Oct4 和Sox2 可能協同作用，維持胚胎干細胞自我更新以及多向分化能力。

［1］Deev IE，Polianovskiǐ OL.Oct－genes and oct－proteins［J］.Mol Biol，2004，38(1):48

［2］Tai MH，Chang CC，Kiupe lM，et al.Oct4 expression in adult human stem cells:evidence in support of the stem cell theory of carcinogenesis［J］.Carcinogenesis，2005，26(2):495

［3］Boiani M，Sch?ler HR.Regulatory networks in embryo－derived pluripotent stem cells［J］.Nat Rev Mol Cell Biol，2005，6(11):872

［4］Cobaleda C，Cruz JJ，González－Sarmiento R，et al.The emerging picture of human breast cancer as a stem cellbased disease［J］.Stem Cell Rev，2008，4(2):67

［5］Perou CM，Sorlie T，Eisen MB，et al.Molecular portraits of human breast tumours［J］.Nature，2000，406(6797):747

［6］Sorlie T，Wang Y，Xiao C，et al.Distinct molecular mechanisms underlying clinically relevant subtypes of breast cancer:gene expression analyses across three different platforms［J］.BMC Genomics，2006，7:127

［7］Carey LA，Perou CM，Livasy CA，et al.Race，breast cancer subtypes，and survival in the Carolina Breast Cancer Stud［J］.JAMA，2006，295(21):2492

［8］徐珂佳，索振河，樊青霞，等.Oct4 在乳腺癌組織中的表達及意義［J］.山東醫藥，2009，49(15):56

［9］Scholer HR，Ruppert S，SuzukiN，et al.New type of POU domain in germ line－specific protein Oct－4［J］.Nature，1990，344(6265):435

［10］Scholer HR.Octamania:the POU factors in murine development［J］.Trends Genet，1991，7(10):323

［11］Rodriguez－Pinilla SM，Sarrio D，Moreno－Bueno G，et al.Sox2:a possible driver of the basal－like phenotype in sporadic breast cancer［J］.Mod Pathol，2007，20(4):474

［12］Bresalier RS，Ho SB，Schoeppner HL，et al.Enhanced sialylation of mucin－associated carbohydrate structures in human colon cancer metastasis［J］.Gastroenterology，1996，110(5):1354

［13］Sims AH，Howell A，Howell SJ，et al.Origins of breast cancer sub－types and therapeutic implications［J］.Nat Clin Pract Oncol，2007，4(9):516

［14］Bauer KR，Brown M，Cress RD，et al.Descriptive analysis of estrogen receptor(ER)－negative，progesterone receptor(PR)－negative，and HER－2－negative invasive breast cancer，the so－called triple－negative phenotype:a population－based study from the California Cancer Registry［J］.Cancer，2007，109(9):1721