胃癌組織中F框/WD-40域蛋白7和Cyclin E蛋白的表達

李向壘，王貴吉 ，裴迎新，張 琪，王夏飛

1)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤科 鄭州450052 2)鄭州大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)教研室 鄭州450001

#通訊作者，男，1954年6月生，本科，教授，研究方向:消化道腫瘤，E-mail:pyx@zzu.edu.cn

F 框/WD-40 域蛋白7 (F-box/WD repeat-containing protein 7，F(xiàn)BXW7)對細胞周期進程、細胞生長和分化起著重要的調(diào)節(jié)作用，很多腫瘤中都存在FBXW7 調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的紊亂［1-2］。Cyclin E 在調(diào)控細胞由G1期進入S 期的進程中發(fā)揮重要作用，其表達異常會導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定，從而引發(fā)腫瘤［3］。該研究通過免疫組化SP 法檢測75例胃癌組織中FBXW7和Cyclin E 蛋白的表達，以期探討FBXW7 和Cyclin E 蛋白與胃癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標本來源 收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2010年6月至2011年6月手術(shù)切除的胃癌組織標本75例，其中男45例，女30例，年齡24～80(55.9±11.1)歲。術(shù)后病理診斷明確，術(shù)前均未行放、化療及靶向治療。病理學(xué)類型:腺癌65例，印戒細胞癌10例。分化程度:高、中分化41例，低分化34例。浸潤深度:T1(腫瘤侵犯固有層、黏膜肌層或下層)和T2(腫瘤侵犯固有層)24例，T3(腫瘤穿透漿膜下結(jié)締組織，未侵犯臟層腹膜或臨近結(jié)構(gòu))和T4(腫瘤侵犯臟層腹膜或臨近結(jié)構(gòu))51例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移:無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移40例;TNM 分期:Ⅰ、Ⅱ期33例，Ⅲ、Ⅳ期42例。癌旁正常組織標本25例，取自距腫瘤邊緣大于5 cm 的正常組織，其中男15例，女10例，年齡24～80(56.3±12.5)歲。所有標本均常規(guī)固定、石蠟包埋，4 μm 厚連續(xù)切片。

1.2 FBXW7 和Cyclin E 蛋白的檢測 采用免疫組化SP 法。FBXW7 鼠抗單克隆抗體為美國Santa Cruz 公司產(chǎn)品，Cyclin E 兔抗單克隆抗體為北京博奧森生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，通用型SP 試劑盒和DAB 顯色試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。FBXW7 和Cyclin E 一抗均稀釋80 倍使用。嚴格按說明書步驟進行操作，以PBS 代替一抗作陰性對照。

1.3 結(jié)果判定 FBXW7 和Cyclin E 均以細胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細胞。選擇5 個高倍鏡視野，每個視野計數(shù)200 個細胞，F(xiàn)BXW7 陽性細胞百分數(shù)＜20%為陰性，≥20%為陽性;Cyclin E 陽性細胞百分數(shù)＜5%為陰性，≥5%為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0 處理數(shù)據(jù)，2 種胃組織中FBXW7 和Cyclin E 蛋白陽性表達率、不同臨床病理特征胃癌患者2 種蛋白陽性表達率的比較采用χ2檢驗，胃癌組織中FBXW7、Cyclin E 表達的關(guān)聯(lián)性采用Pearson 列聯(lián)系數(shù)表示，檢驗水準α =0.05。

2 結(jié)果

2.1 正常胃組織和胃癌組織中FBXW7 和Cyclin E 蛋白的表達 見圖1、表1。

2.2 胃癌組織中FBXW7 和Cyclin E 蛋白的表達與臨床病理特征的關(guān)系 見表2。

2.3 胃癌組織中FBXW7 和Cyclin E 蛋白表達的關(guān)聯(lián)性 見表3。

圖1 正常胃組織和胃癌組織中FBXW7(A)和Cyclin E(B)蛋白的表達(SP，×400)

表1 正常胃組織和胃癌組織中FBXW7 和Cyclin E 蛋白的表達 陽性表達例數(shù)(%)

表2 胃癌組織中FBXW7 和Cyclin E 蛋白的表達與臨床病理特征的關(guān)系

續(xù)表

表3 胃癌組織中FBXW7 和Cyclin E 蛋白表達的關(guān)聯(lián)性

3 討論

許多疾病的發(fā)生都以泛素蛋白酶體對蛋白質(zhì)的異常降解為基礎(chǔ)。FBXW7 在泛素蛋白酶體降解途徑中具有重要作用，是一種廣泛的抑癌蛋白。FBXW7 含有3 個保守的結(jié)構(gòu)域:F-box、WD40 重復(fù)序列和D 結(jié)構(gòu)域。F-box 可與S 期激酶相關(guān)蛋白1(SKP1)相互作用; WD40 重復(fù)序列與靶蛋白上磷酸-降解決定子相互作用，介導(dǎo)FBXW7 與靶蛋白結(jié)合; D 結(jié)構(gòu)域的功能是促進FBXW7 二聚化［4］。FBXW7 表達缺失會導(dǎo)致Cyclin E、MYC、Aurora-A等物質(zhì)的蓄積，加快癌細胞增殖［5］。研究［6］發(fā)現(xiàn)FBXW7 mRNA 在大腸癌組織中的表達明顯低于正常大腸組織。Wertz 等［7］發(fā)現(xiàn)FBXW7 缺陷的卵巢癌和結(jié)腸癌細胞中MCL1 蛋白的表達增高，更易于對抗微管藥物產(chǎn)生耐受，并證實FBXW7 在泛素-蛋白酶體介導(dǎo)的MCL1 蛋白降解中發(fā)揮了關(guān)鍵性作用。國外有文獻［8］報道，在胃癌組織中，F(xiàn)BXW7 的低表達與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后不良有關(guān)。該研究結(jié)果顯示:胃癌組織中FBXW7 的表達降低，且與胃癌的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期有關(guān)，提示FBXW7 與胃癌的發(fā)生和進展有關(guān)。

Cyclin E 在調(diào)控細胞由G1期進入S 期的進程中發(fā)揮重要作用，對DNA 及中心體的復(fù)制也有一定的影響。Cyclin E 隨著細胞周期不同時相有序地合成和降解是保證細胞周期順利進行的重要條件，其過度表達可加速細胞由G1期進入S 期，導(dǎo)致細胞增殖失控并最終形成腫瘤［3］。Cyclin E 在宮頸癌、卵巢癌、乳癌、肝細胞癌、肺癌、胃癌、大腸癌等多種惡性腫瘤中呈過度表達，且與腫瘤的惡性程度及預(yù)后有關(guān)。千新來等［9］發(fā)現(xiàn)Cyclin A 和Cyclin E 在HPV16E7 陽性乳癌組織中的陽性率較高。Kouraklis等［10］發(fā)現(xiàn)在胃癌組織中Cyclin E 高表達與Lauren分型、淋巴結(jié)浸潤、腫瘤直徑＞5 cm、淋巴管浸潤和血管浸潤有關(guān)。該研究結(jié)果表明，Cyclin E 在胃癌組織中的表達升高，且與胃癌的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期有關(guān)，提示Cyclin E 與胃癌的發(fā)生和進展有關(guān)。

Cyclin E 由泛素FBXW7 介導(dǎo)的蛋白酶體進行調(diào)節(jié)。一些腫瘤中FBXW7 基因常發(fā)生缺失或突變，Cyclin E 就不能被有效降解［11］。Ekholm-Reed等［12］認為FBXW7 功能狀態(tài)是調(diào)節(jié)細胞周期中Cyclin E 水平的必要條件，F(xiàn)BXW7 的功能異常足以導(dǎo)致Cyclin E 失調(diào)節(jié)。該研究結(jié)果顯示胃癌組織中FBXW7 與Cyclin E 蛋白的表達呈負關(guān)聯(lián)。

綜上所述，F(xiàn)BXW7 和Cyclin E 與胃癌的發(fā)生、發(fā)展及浸潤、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，聯(lián)合檢測FBXW7 和Cyclin E 的表達將有助于胃癌的預(yù)后判斷。

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