紫外-可見分光光度法測(cè)定川明參莖葉中總黃酮含量

明凱利，宋芳芳，陳朝霞，張梅

傘形科川明參屬植物川明參Chuanminshen viloaceum Sheh et Shan為我國(guó)特有單種屬植物，藥用其根，是四川道地藥材[1]。川明參根具有潤(rùn)肺化痰、和胃、生津、解毒等功效，適用于病后補(bǔ)虛和強(qiáng)壯身體，在四川及周邊地區(qū)大量栽種，應(yīng)用廣泛。川明參莖葉通常在其根收獲后作為廢棄物丟棄。目前已有文獻(xiàn)報(bào)道川明參莖葉中含有異虎耳草素、白當(dāng)歸腦、蘆丁等香豆素類和黃酮類化學(xué)成分[2]，尚未見莖葉中總黃酮的含量測(cè)定報(bào)道。因此，為了填補(bǔ)這一研究空白，促進(jìn)川明參這一寶貴的藥用資源的綜合開發(fā)利用，本文參考相關(guān)文獻(xiàn)[3～4]，采用紫外-可見分光光度法建立了川明參莖葉中總黃酮的含量測(cè)定方法，該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可靠，為川明參莖葉的開發(fā)利用奠定了一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試藥

UV1100型紫外分光光度計(jì)(上海天美科學(xué)儀器有限公司)；電子分析天平(Sartorius BP211D，十萬(wàn)分之一；Sartorius BP121S，萬(wàn)分之一)；蘆丁對(duì)照品(購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110826-200712)；川明參莖葉由成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院裴瑾教授鑒定為傘形科(Umbelliferae)川明參屬植物川明參Chuanminshen viloaceum Sheh et Shan的莖葉。所用試劑均為分析純，重蒸水(實(shí)驗(yàn)室自制)。

1.2 方法與結(jié)果

1.2.1 供試品溶液的制備 取川明參莖葉約0.5g 置于100mL燒瓶中，加20mL 60%乙醇回流提取2次，每次1h。過(guò)濾，合并濾液，揮干溶劑并用60%乙醇定容至25mL，即得供試品溶液。

1.2.2 對(duì)照品溶液的制備 取蘆丁對(duì)照品適量，精密稱定，用60%乙醇溶解并定容，即得對(duì)照品溶液(0.265mg/mL)。

1.2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 取對(duì)照品溶液和供試品溶液各2mL于25mL容量瓶中，加入60%乙醇至10mL，再加入5% NaNO2溶液1mL，搖勻，放置6min，加入10% Al(NO3)3溶液1mL，搖勻，放置6min，加入4% NaOH 溶液10mL，再加60% 乙醇至刻度，搖勻，放置15min，于400～800nm掃描，對(duì)照品溶液及供試品溶液均在506nm處有最大吸收（圖1A,B），且峰形變化平緩，便于定量測(cè)定，故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為506nm。

圖1 對(duì)照品溶液及供試品溶液紫外掃描圖譜

1.2.4 線性范圍考察 分別精密吸取濃度為0.265mg/mL的蘆丁對(duì)照品溶液2mL、3mL、4mL、5mL、6mL于25mL量瓶中，加入60%乙醇至10mL，再加入5% NaNO2溶液1mL，搖勻，放置6min，加入10% Al(NO3)3溶液1mL，搖勻，放置6min，加入4%NaOH 溶液10mL，再加60% 乙醇至刻度，搖勻，放置15min，在506nm波長(zhǎng)下測(cè)定不同濃度蘆丁的吸光度值A(chǔ)，以濃度(C)為橫坐標(biāo)，吸光度(A)為縱坐標(biāo)作圖，得到回歸方程：y=11.453x +0.0122，r=0.9992。結(jié)果表明：在0.0212～0.0636mg/mL范圍內(nèi)，對(duì)照品蘆丁的吸光度和濃度線性關(guān)系良好。結(jié)果見圖2。

圖2 對(duì)照品蘆丁濃度與吸光度的關(guān)系

1.2.5 精密度試驗(yàn) 取川明參莖葉粗粉約0.5g，置于100mL燒瓶中，按1.2.1項(xiàng)下制備供試品溶液后，精密移取2mL于25mL容量瓶中，按照“1.2.4線性關(guān)系考察”項(xiàng)下方法從“加入60%乙醇至10mL”起，顯色，測(cè)定吸光度，重復(fù)測(cè)定6次，其吸光度值的RSD=0.50%，結(jié)果表明精密度良好。

1.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取川明參莖葉粗粉約0.5g，置于100mL燒瓶中，按1.2.1項(xiàng)下制備供試品溶液后，精密移取2mL于25mL容量瓶中，按照“1.2.4線性范圍考察”項(xiàng)下方法從“加入60%乙醇至10mL”起，顯色，于0min、30min、60min、90min、120min分別測(cè)定其吸光度值，RSD=1.1%，結(jié)果表明供試品溶液在2小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。

1.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批號(hào)莖葉粗粉約0.5g，共6份，按1.2.1項(xiàng)下制備供試品溶液后，精密移取2mL于25mL容量瓶中，按照“1.2.4線性范圍的考察”項(xiàng)下方法從“加入60%乙醇至10mL”起，顯色，測(cè)定其吸光度并計(jì)算含量，RSD=3.1%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

1.2.8 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取已知含量的川明參莖葉粗粉約0.25g，精密加入蘆丁對(duì)照品適量，按1.2.1項(xiàng)下制備供試品溶液，顯色，測(cè)定。計(jì)算得到蘆丁的平均回收率為97.03%，RSD=2.3%(n=6)。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.2.9 樣品測(cè)定 取不同產(chǎn)地川明參莖葉樣品，按照擬定的含量測(cè)定條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算各產(chǎn)地樣品中總黃酮含量，結(jié)果見表2。

表2 川明參莖葉中總黃酮含量測(cè)定結(jié)果（n=3）

2 討論

2.1 在供試品溶液制備上，本實(shí)驗(yàn)主要對(duì)提取溶劑、提取方法和提取次數(shù)進(jìn)行了考察。在提取溶劑的選擇中，分別采用50%、60%和75%乙醇溶液加熱進(jìn)行回流提取，結(jié)果表明60%乙醇提取的總黃酮含量相對(duì)較高，且葉綠素含量相對(duì)較低，故采用60%乙醇作為提取溶劑。在提取方法的選擇上，分別采用回流提取法和超聲提取法進(jìn)行提取，結(jié)果表明回流提取的總黃酮含量較高，故采用回流提取法進(jìn)行提取。在提取次數(shù)的選擇上，分別提取了1次、2次和3次。結(jié)果表明，回流提取2次樣品吸光度值與提取3次樣品吸光度值接近且較大，總黃酮含量較高，但提取2次較提取3次簡(jiǎn)便，故選擇回流提取2次。

2.2 在對(duì)照品的選擇上，考慮到中藥中總黃酮含量測(cè)定時(shí)大多以蘆丁為對(duì)照品，參考相關(guān)文獻(xiàn)可知，川明參莖葉中含有該種化學(xué)成分[2]，故本試驗(yàn)也以蘆丁作為川明參莖葉總黃酮含量測(cè)定研究用對(duì)照品。

2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，川明參莖葉中總黃酮含量較高，而黃酮類成分具有止咳、祛痰、平喘等藥理作用，故川明參莖葉具有一定的開發(fā)利用價(jià)值，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果將為川明參的綜合開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

[1]佘盂蘭,單人驊.傘形科兩新屬—環(huán)根芹屬和川明參屬[J].植物分類學(xué)報(bào),1980,18(1):45-49.

[2]王明安,彭樹林,王明奎,等.川明參莖葉中的化學(xué)成分[J].高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報(bào),2002,(8):1539-1541.

[3]孟慶艷,劉圓,孔星蕓,等.不同采收期大花羅布麻葉中黃酮的含量測(cè)定[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2010,16(15):50-52.

[4]劉文煒,沈祥春,陶玲,等.紫外分光光度法測(cè)定大蝎子草藥材中總黃酮的含量[J].中國(guó)藥房,2010,21(43):4088-4089.