青秦液在高尿酸血癥比格犬體內相關活性的研究

摘 要 目的：研究青秦液對高尿酸血癥比格犬體內相關活性的影響。方法：將40只比格犬隨機分為正常組、模型組、秋水仙堿組及青秦液組。采用灌服巰嘌呤及乙胺丁醇進行造模；秋水仙堿組按0.15mg/(kg#8226;日)灌服秋水仙堿；青秦液組給予5g/(kg#8226;日)青秦液灌胃。采用磷鎢酸法測定血尿酸和尿尿酸，采用酶比色法測定黃嘌呤氧化酶(XOD)和腺苷脫氨酶(ADA)的含量。結果：秋水仙堿及青秦液均具有明顯降低高尿酸血癥比格犬血尿酸水平的作用，但二者比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；在降低高尿酸血癥比格犬血ADA活性作用方面，秋水仙堿組及青秦液組均明顯低于模型組(P＜0.05，P＜0.01)，且青秦液組比格犬血ADA含量明顯低于秋水仙堿堿組(P＜0.05)；秋水仙堿組及青秦液組比格犬血XOD含量均明顯低于模型組(P＜0.05，P＜0.01)。結論：青秦液具有明顯降低高尿酸血癥比格犬血尿酸水平及血ADA、XOD活性的作用；在降低高尿酸血癥比格犬血ADA活性作用方面，青秦液組明顯優(yōu)于秋水仙堿組。

關鍵詞 青秦液 高尿酸血癥 尿酸代謝 代謝酶

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.07.001

高尿酸血癥屬于復雜的多基因遺傳病。研究表明，嘌呤代謝過程中某些酶發(fā)生基因突變，致酶活性改變，使體內的尿酸生成過多或清除過低，引發(fā)高尿酸血癥。青秦液是由青蒿、秦艽、秦皮、土茯苓、車前子、虎杖、蘇木等組成的純中藥制劑［1］。臨床觀察結果顯示，可以明顯改善高尿酸血癥血尿酸及尿尿酸水平并能調節(jié)高尿酸血癥相關酶的活性。為進一步明確其體內相關活性，建立比格犬動物模型進行研究。

資料與方法

試驗動物：健康雄性比格犬40只，體重10±0.5kg，由河南省實驗動物中心提供，屬封閉群，身體健康。實驗過程中對動物處置符合2006年科學技術部發(fā)布的《關于善待實驗動物的指導性意見》［2］。

試驗藥物：青秦液藥物組成：青蒿15g，秦艽15g，秦皮10g，土茯苓15g，車前子15g，虎杖15g，蘇木8g，忍冬藤25g，黃柏8g，蒼術8g。共煎煮2次，合并2次藥液，濃縮成2.2g/ml，4℃儲存?zhèn)溆谩€嘌呤，乙胺丁醇，秋水仙堿。

試劑：尿酸試劑盒、XOD試劑盒、ADA試劑盒。

試驗方法：①分組、造模及給藥：將實驗比格犬隨機分為正常組(10只)、模型組(10只)、秋水仙堿組(10只)、青秦液組(10只)。除正常組外，各組比格犬每天上午按0.2g/kg體重灌服巰嘌呤及按0.25g/kg體重灌服乙胺丁醇進行造模［3］。秋水仙堿組每天下午按0.15mg/kg體重灌服秋水仙堿；青秦液組每天下午按5g/kg體重灌服青秦液，正常組灌服等容量純化水。②檢測：第7、14、21天各組比格犬空腹眼眥采血，每只0.5ml，5000轉/分離心10分鐘，分離血清，采用磷鎢酸法測各組比格犬的血尿酸值，第14天將各組比格犬留尿3小時，尿液采用磷鎢酸法測尿尿酸值。具體操作按試劑盒說明書進行。同時對第21天采集的血清用酶比色法檢測血清中XOD和ADA的含量，具體操作按試劑盒說明書進行。

統(tǒng)計學處理：采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理，所有數(shù)據(jù)均用(X±S)表示。均值之間比較采用t檢驗。

結 果

秋水仙堿及青秦液均具有明顯降低高尿酸血癥比格犬血尿酸水平的作用，但二者比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；在降低高尿酸血癥比格犬血ADA活性作用方面，秋水仙堿組及青秦液組均明顯低于模型組(P＜0.05，P＜0.01)，且青秦液組比格犬血ADA含量明顯低于秋水仙堿堿組(P＜0.05)；秋水仙堿組及青秦液組比格犬血XOD含量均明顯低于模型組(P＜0.05，P＜0.01)，見表1和表2。

討 論

隨著基因分子生物學、細胞免疫學的深入發(fā)展，對本病病理機制有了全新的認識。研究發(fā)現(xiàn)，高尿酸血癥病理機制與基因遺傳有關。由體內合成或核酸分解代謝產生的尿酸占體內總尿酸的80%，從含嘌呤或核蛋白的食物中核苷酸分解占20%。參與尿酸代謝的嘌呤核苷酸有次黃嘌呤核苷酸(GMP)。研究表明，嘌呤代謝過程中某些酶發(fā)生基因突變，致酶活性改變，最終使體內尿酸生成過多。

嘌呤代謝催化酶發(fā)生缺陷主要包括：①磷酸核糖焦磷酸合成酶(PRS)：嘌呤代謝過程中PRS活性過高可加速核糖焦磷與嘌呤核苷酸的合成，從而導致體內尿酸生成過多。研究表明，犬肝臟的PRS是由催化亞基PRS1、PRS2(34KD)和結合亞基PAP39(39KD)及PAP41(41KD)組成的四聚體，形成PRS家族，結合亞基PAPs總的氨基酸序列與催化亞基略有不同，形成PAPs亞家族，可抑制機體催化亞基的作用。人PRS的結構與犬相似，有研究發(fā)現(xiàn)，編碼PRS的PRPs基因發(fā)生突變，可導致嘌呤核苷酸反饋抵抗的PRS活性增高。②次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核苷酸轉移酶(HGPRT)：HGPRT基因發(fā)生突變可致HGPRT活性降低，從而導致鳥嘌呤轉化為鳥嘌呤核苷酸和次黃嘌呤轉化為次黃嘌呤核苷酸減少，以致后兩者的嘌呤代謝反饋減弱，使代謝終產物尿酸升高。近年通過對代謝綜合征相關基因多態(tài)性研究發(fā)現(xiàn)，亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因c677t突變與高尿酸血癥有關，是高尿酸血癥的一個獨立危險因素。此外，腺嘌呤磷酸核糖轉移酶、黃嘌呤氧化酶、谷胱甘肽還原酶、葡萄糖-6-磷酸酶等酶的異常也與高尿酸血癥的發(fā)病有關［4］。

青秦液為純中藥制劑，具有清熱解毒、化瘀止痛功效，臨床對高尿酸血癥或急性痛風發(fā)作均有良好的治療效果，能有效降低患者血尿酸水平，并有消腫止痛、改善臨床癥狀的作用。實驗結果表明，青秦液改善血尿酸水平、治療高尿酸血癥及其急性關節(jié)炎病理損傷的作用機制在于能有效抑制炎性介質的過度釋放，減少炎性反應過程中的免疫損傷，以及調節(jié)血尿酸代謝過程中相關酶的分泌水平，從而達到糾正高尿酸狀態(tài)的目的。青秦液對ADA、XOD的作用機制及對其他相關酶作用效果和機制仍在研究中。

參考文獻

1 孟鳳仙，劉世菊，張繼勝，等.青秦液對高尿酸血癥大鼠尿酸代謝及相關酶活性的影響.中國中醫(yī)藥信息雜志，2009，16(4):33-35.

2 中華人民共和國科學技術部.關于善待實驗動物的指導性意見，2006.

3 熊湘明，曲竹秋.比格犬高尿酸血癥模型建立［J］.天津中醫(yī)學院學報，2001，20(4):28-29.

4 陳光亮，徐叔云.高尿酸血癥研究進展［J］.中國藥理學通報，2003，19(10):1088-1092.