HPLC法測定復方穿心蓮片中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量

摘 要 目的：建立測定復方穿心蓮片中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯含量的方法。方法：采用HPLC法，色譜柱Phenomenex Gemini 5u 250mm×4.6mm C18柱，甲醇-水(52:48)為流動相，流速1.0ml/分，檢測波長：穿心蓮內酯為225nm，脫水穿心蓮內酯250nm。結果：穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯分別在0.236～2.360μg和0.1528～1.5280μg與峰面積線性關系良好；平均回收率分別為101.57%和98.37%，RSD分別為0.12%和1.02%。結論：本法操作簡便、準確，能有效地控制該制劑的質量。

關鍵詞 復方穿心蓮片 穿心蓮內酯 脫水穿心蓮內酯 高效液相色譜

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.07.024

復方穿心蓮片由穿心蓮、路邊青兩味中藥組成，收載于《衛生部藥品標準》中藥成方制劑第19冊，具有清熱解毒、利濕之功效。用于治療風熱感冒、咽喉疼痛、濕熱泄瀉［1］。穿心蓮的高效液相測定方法報道很多［2］，復方穿心蓮片的高效液相單測定穿心蓮內酯含量或脫水穿心蓮內酯含量亦有報道［3］，但關于復方穿心蓮片用高效液相測定方法同時測定穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量尚無報道［4］。本實驗采用HPLC法對復方穿心蓮片中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量進行測定。結果表明，本法準確、精密、重現性好。

儀器與試劑

LC-10A高效液相色譜儀及SPD-10A紫外檢測器，HL-3000色譜工作站。

穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。復方穿心蓮片由貴港市冠峰制藥有限公司提供。甲醇為色譜純，水為重蒸水，其他試劑為分析純。

方法與結果

色譜條件：色譜柱：C18(Phenomenex Gemini 5u 250mm×4.6mm)；流動相：甲醇-水(52:48)；檢測波長：穿心蓮內酯為225nm，脫水穿心蓮內酯250nm；體積流量1ml/分；柱溫30℃；進樣體積20μl。

系統適用性試驗：理論塔板數按穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯分別計算，均應不低于2000，該峰與其相鄰色譜峰的分離度均大于1.5，對稱因子分別小于1.15和0.95。同條件下分析陰性供試液，其他藥味成分不干擾測定。色譜圖，見圖1。

對照品溶液的制備：精密稱取穿心蓮內酯對照品29.5mg、脫水穿心蓮內酯對照品19.1mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液(穿心蓮內酯0.295mg/ml、脫水穿心蓮內酯0.191mg/ml)。

供試品溶液的制備：取復方穿心蓮片20片，除去糖衣，精密稱定，研細，取細粉約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理40分鐘(功率120W，頻率40kHz)，放至室溫，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液10ml，加在中性氧化鋁柱(200～300目，5g，內徑1.5cm)上，用甲醇20ml洗脫，收集洗脫液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。

陰性對照溶液的制備：按處方自制不含穿心蓮的復方穿心蓮片200g，按供試品溶液的制備項下方法制備陰性對照溶液。

標準曲線的繪制：分別精密吸取穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯儲備液1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml、10.0ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別進樣20μl進行測定，以峰面積(Y)對質量濃度(X)作回歸計算，分別得回歸方程為Y=2112180，X+29046.3，(r=1.0000)和Y=1678601，X-8382.0，(r=1.0000)。穿心蓮內酯線性范圍：0.236～2.360μg，脫水穿心蓮內酯線性范圍：0.1528～1.5280μg。

精密度試驗：精密吸取同一份供試品溶液20μl，重復進樣6次，分別測定峰面積，計算，結果穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯峰面積RSD分別為0.09%和0.21%。

重現性試驗：精密稱取樣品6份，按供試品溶液的制備項下方法平行制備，進樣分析，測定穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量，計算得RSD分別為0.12%、1.02%。

穩定性試驗：取同一批供試品溶液，室溫放置，分別在0、12、24、36及48小時、60小時測定峰面積。結果表明供試品溶液在60h內穩定，RSD分別為0.11%和0.23%(n=6)。

回收率試驗：采用加樣回收法。精密稱取已知含量的復方穿心蓮片粉約0.5g，精密加入對照品(穿心蓮內酯0.07375mg/ml、脫水穿心蓮內酯0.04775mg/ml)25ml，同法提取測定，穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的平均回收率分別為101.57%、98.37%(n=6)。

樣品測定：精密吸取供試品溶液20μl，按上述色譜條件測定。結果復方穿心蓮片中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量，見表1。

討 論

本實驗曾參照中國藥典2005年版穿心蓮、穿心蓮片的提取方法直接用乙醇、甲醇浸泡并超聲提取樣品，但雜質過多，污染色譜柱，且穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯與其他物質無法分離。參照并改進文獻提取方法［5］。本法分離效果好、靈敏、準確，可作為該制劑質量檢測的方法，提高藥品質量可控性，確保臨床用藥的有效性。

參考文獻

1 《衛生部藥品標準》中藥成方制劑第19冊，1998.

2 中國藥典.2000年版一部.

3 郭世明，吳澤君.高效液相色譜法測定復方穿心蓮片中穿心蓮內酯的含量.藥物分析雜志，2002，2(24).

4 黃乃展.高效液相色譜法測定復方穿心蓮片中脫水穿心蓮內酯含量.中國藥業，2006，9:36-37.

5 董海榮，魯靜，等.穿心蓮及消炎利膽片中內酯類成分的含量測定［J］.中成藥，1999，21(1):11.