基層醫院病理科常規制片技術的規范和質量控制

關鍵詞 病理制片 技術 質量 控制

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.07.247

HE制片是病理醫生用作病理診斷的基本和重要的依據之一，病理技術員的責任就是為病理醫生提供高質量的HE制片。了保證制片質量，減少差錯，防范責任事故，避免醫療糾紛，有必要加強對病理技術進行科學規范管理和制片質量的控制。

規范管理技術人員，提高技術人員素質

加強技術人員的培訓工作，不斷引進和學習新技術，掌握過硬的基本功。

醫院和科室要重視病理技術工作，為技術人員提供進修學習和提高的條件和機會。

技術員和醫生、技術員與技術員之間應互相團結，密切配合，發揮團隊精神的作用。

配備心要的儀器設備保障正常運行

科室應配備工作所必須的儀器設備。先進、高質量的儀器設備是保證和提高制片質量的重要條件。

技術人員對儀器設備要正確使用，定期維修保養，保證儀器設備在最佳的狀態下工作。

確保使用試劑、材料質量，嚴把每一個環節。

規范管理標本和資料檔案

標本和送檢單的檢查驗收：病理標本送達后，應立即檢查標本和送檢單的名字是否相符，檢查有無標本清點標本塊數，必要時要補充標本的固定液，然后將送檢單編號登記。

資料檔案的規范管理：診斷報告發出后，附有診斷報告記錄的送檢單、玻片和組織蠟塊馬上存檔并專人保管。建立嚴格的資料借出制度，確保檔案資料不丟失。

制片技術操作規范

組織固定：固定是把病理活體或尸體解剖切取下來的組織泡浸在適宜的化學試劑(一種或多種試劑配成的溶液)里，而這種化學試劑能使組織或細胞內的蛋白質凝聚、沉淀或變性，使組織細胞內的一些物質成為不溶性，同時使組織細胞原有的形態結構盡可能保持。因此，組織應及時固定，固定不當或固定不及時，都會影響組織的脫水、切片和各種染色。

固定的目的：①破壞細胞內的溶酶體酶；②殺死外來細菌；③盡可能保持生活體的原狀；④凝聚、沉定細胞內原有產物，使不被溶解或消失；⑤使組織保持一定的硬度和彈性，抵抗以后的脫水、透明、浸蠟等過程不發生較大的扭曲或變形，使各級溶液在組織間隙內自由交換取得良好的制片效果；⑥對組織的分析性染色起媒染作用。⑦有利于區別各種細胞的折光率。

固定液的使用和配制：固定組織所使用由化學試劑配成的溶液稱為固定液。固定液有單純固定液和混合固定液。常用的固定液10%的甲醛水溶液，因甲醛易氧化成甲酸而偏酸性，因此可配成中性福爾馬林液。巨大組織要切開固定，小塊組織的固定時間約4小時左右，然后在取材時修切成大小約15mm×15mm，厚不超過2～3mm的組織塊進行脫水(固定液配制方法從略)。

組織脫水：組織脫水就是利用某些溶媒置換組織內水分的過程，脫水的目的：組織經過水溶性固定液固定和水洗后，其間隙內含有較多水分，因水與二甲苯、石蠟是不能混合的，即使組織間隙內含有極少的水也會阻礙二甲苯和石蠟的滲透，所以未經脫水或脫水不徹底的組織不能直接進入二甲苯透明和石蠟中浸蠟。只有使組織內部水分徹底脫除，才能進行透明、浸蠟、包埋，組織蠟塊才能長久保存。常用的脫水液為乙醇，用乙醇脫水要由低濃度至高濃度逐步置換組織內的水份(一般70%～100%的濃度)，最后組織內部水分被高濃度乙醇所取代。組織在乙醇脫水時，低濃度乙醇(95%以下)的時間可適當延長，高濃度乙醇(100%)脫水時間不能過長。否則組織變硬變脆。

組織透明：組織脫水后要經過一個浸蠟前的中間溶劑透明過程，才能進行浸蠟。透明的目的：組織經脫水后、浸蠟前必須經過某些既能與脫水劑相混合又能溶解石蠟的中間溶劑處理。組織在中間溶劑時，組織間隙內存留的脫水劑完全為中間溶劑所取代時，組織就呈現透明狀態，此時即可進行浸蠟。透明液多采用二甲苯，組織經無水乙醇脫水后轉入二甲苯透明，組織的大小、厚薄不同，透明時間也不同，一般30～60分鐘。

組織浸蠟：用于浸蠟的石蠟最好是熔點稍低(56℃～58℃)，低溫浸蠟對保存組織細胞內的抗原免疫活性，避免組織收縮和變硬變脆有幫助。根據脫水機配有的蠟缸數量，浸蠟采用2～4級，以盡量清除二甲苯。不同大小和厚薄的組織浸蠟時間有所不同，一般1～3小時。浸蠟溫度過高，浸蠟時間過長均可導致組織收縮，變硬變脆，難以切出理想切片。

組織包埋：組織經浸蠟后即可進行包埋。包埋時，包埋石蠟的溫度要比組織高(3～5℃)，否則包埋冷凝后組織與包埋石蠟分離，特別是在冷天包埋時，動作更要迅速，否則容易導致組織與石蠟融合不好，影響切片。包埋時把組織最大最平切面或所需的病灶切面向下，對皮膚、腸管和囊壁等層次清楚的組織其切面應包含有各層組織。組織包埋完后，蠟塊要與取材時記錄的組織形狀和數量核對，發現問題，及時解決。

組織切片：組織切片厚薄要適宜，薄的切片細胞不會重疊，易于觀察。切片的厚度應3～4U，對一些組織如淋巴結、鼻咽和扁桃體，切片的厚度應2～3U。要切出薄而平整的切片需要正確使用切片機，保證切片刀鋒利和調至合適的角度。組織蠟塊過硬，切片刀或蠟塊沒固定好均達不到切片要求。

貼片烤片：切出的蠟片可先放在約10%～15%乙醇內，然后置恒溫水中，這樣因水的表面張力比乙醇大，蠟片便容易在溫水中展平，根據包埋石蠟的熔點不同，水溫約39～42℃。貼片時要注意貼在載玻片中間稍偏右的位置上。對一些組織如皮膚、胃腸等貼片時要注意表皮或黏膜面在下，真皮或肌層在上，方便在鏡下觀察。貼好片后放入60～65℃的烤箱內或恒溫熱板上烤烘15～30分鐘，使蠟片牢固地黏附在玻片上。烤烘切片的溫度一般比包埋石蠟的熔點高5℃左右。

切片脫蠟：切片在染色前必須脫蠟干凈，脫蠟不干凈會影響組織細胞的著染，即使著染，組織和細胞也會模糊不清。脫蠟一般用兩級或三級脫蠟劑如二甲苯，時間10～20分鐘。如果脫蠟劑使用多次或室溫較低，均需延長脫蠟時間。

切片染色：蘇木精染液配制，配好蘇木精染液是HE染色的關鍵。蘇木精配制有多種配方，關鍵在于氧化。如加氧化汞作氧化劑時，要防止氧化過度，同時注意形成的氧化膜污染切片。加碘酸鈉作氧化劑時，就無需煮沸。要配制自然成熟的蘇木精則不需加氧化劑，但要較長時間才能氧化成熟。不同蘇木精染液的染色時間5～20分鐘，自然氧化成熟的蘇木素精染色時間可以更長(染液配制方法從略)。

切片脫水透明：切片經HE染色后，要徹底脫水透明才能用中性樹膠封蓋。如果脫水不徹底，封片后呈白色霧狀，鏡下觀察模糊不清，且容易褪色。切片經1～2級無水乙醇脫水，然后再入二甲苯透明，也可使用石碳酸二甲苯進行脫水透明。

封片：切片染色后封片常用中性樹膠，酸性的樹膠可使胞核褪色，如樹膠放置時間過長，因氧化而變酸。中性樹膠可用二甲苯稀釋。樹膠過濃，封片時容易導致氣泡；過稀，封片時易使膠外溢，影響美觀，也會出現由于二甲苯揮發后缺膠的現象。

討 論

現代病理事業的發展對病理技術員提出了更新更高的要求，這需要廣大病理技術員不斷進取、勇于創新，破解發展的難點，轉變發展的思路，尋找發展方法，保證病理科在設施、設備、人員、技術、流程、質量、管理等醫療服務質量的標準相對一致性。提高病理技術的整體水平，打造一個技術先進、設備優良、流程合理、功能齊備、質量可靠、標準一致、制度規范、發展均衡的病理技術平臺。建立公平、準確、安全、快捷的醫療模式，滿足隨著社會的發展和進步，人民群眾對醫療服務日益增長的需求。造就一支數量充足、結構合理、技藝精湛、愛崗敬業、作風過硬的高技能的病理技術隊伍，不斷探索現代病理技術發展的新的問題、揭示新的規律、提出新的概念、建立新的理論，迎接新的挑戰。

參考文獻

1 中華醫學會.臨床技術操作規范-病理學分冊.北京:人民軍醫出版社，2004.

2 王伯沄，李玉松，黃高升，張遠強，主編.病理學技術.北京:人民衛生出版社，2000.